G. rostochiensis: ITS-1 (5′-TGT TGT

G. rostochiensis: ITS-1 (5′-TGT TGTACG TGC CGTACC TT-3′), G. pallida: ITS-1 (5′-GGT GAC TCG ACG ATT GCT GT-3′), and universal primer for PCN: 5.8S rDNA (5′-GCA GAA GGC TAG CGATCT TC-3′) (Mulholland et al. 1996). Twenty five ng DNA template from each region was transferred into 25 μl PCR mixture containing 50 mM Tris–HCl(pH 9.0),50mMKCl,1.5mMMgCl2so thatthe 2 is subscript, 0.1 % Triton X-100, 0.2 mM dNTP (New England Biolabs, Hitchin, UK), 50 ng primer and 0.5 unit Taq polymerase (New England Biolabs, Hitchin, UK). PCR products were analysed using 2 % agarose gel electrophoresis in 0.5× TBE buffer and stained with ethidium bromide (Maniatis et al. 1989). The primers successfully amplified targeted DNA fragments for each PCN region. Paired primers of ITS-1 and 5,8S rDNA produced 238 bp DNA fragment for all regions (West Java, East Java, and Central Java) (Fig. 1),
while ITS-1 and 5,8S rDNA resulted in a 391 bp DNA fragment only for the Central Java isolates (Fig. 2). According to Mulholland et al. (1996) the fragments of 238 bp and 391 bp are related to G. rostochiensis and G. pallida, respectively. The results presented here give evidence of the occurrence of G. rostochiensis and G. pallida in Indonesia. Both species are present in Central Java (Wonosobo and Banjarnegara Districts),whileinEastJavaandWestJavaonlysinglespecies were found. This is the first report of identification with molecular characterisation of PCN in Indonesia. This method isnotonlyhighlyeffectiveasaspeciesdiagnostictoolbutalso a sensitive method which can be used for taxonomic and quarantine purposes.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Rostochiensis กรัม: เป็นข่าวลือ 1 (5′ TGT TGTACG TGC CGTACC TT-3′) pallida กรัม: เป็น 1 (5′-GGT GAC TCG จีบ ATT GCT GT-3′), และรองพื้นสากลสำหรับ PCN: 5.8S rDNA (5′ GCA เฒ่า GGC แท็ก CGATCT TC-3′) (Mulholland et al. 1996) ยี่สิบห้า ng ดีเอ็นเอต้นแบบจากแต่ละภูมิภาคมีการโอนย้ายลงในส่วนผสม PCR 25 μl ประกอบด้วย 50 mM ตรี – HCl(pH 9.0), 50mMKCl, 1.5mMMgCl2so 2 ว่าตัวห้อย 0.1% ไตรตั้น X 100, dNTP 0.2 mM (นิวอิงแลนด์ Biolabs, Hitchin, UK), รองพื้น 50 ng และ 0.5 หน่วย Taq พอลิเมอเรส (Biolabs นิวอิงแลนด์ Hitchin, UK) ผลิตภัณฑ์ PCR ได้ analysed ใช้ 2% agarose เจ electrophoresis ในบัฟเฟอร์ TBE × 0.5 และสี ด้วย ethidium โบรไมด์ (Maniatis et al. 1989) ไพรเมอร์ที่ประสบความสำเร็จขยายชิ้นส่วนดีเอ็นเอเป้าหมายสำหรับแต่ละภูมิภาค PCN ไพรเมอร์ที่จัดเป็นคู่ของ-1 และ 5, 8S rDNA ผลิตราคา 238 บีพีดีเอ็นเอส่วนภูมิภาคทั้งหมด (ชวาตะวันตก ชวาตะวันออก และ ชวากลาง) (Fig. 1),ในขณะที่ของ 1 และ 5, 8S rDNA ผลใน 391 bp ดีเอ็นเอส่วนสำหรับชวากลางแยก (Fig. 2) ตามไป Mulholland et al. (1996) ชิ้นส่วนของ 238 bp และ 391 bp จะเกี่ยวข้องกับ rostochiensis กรัมและ pallida กรัม ตามลำดับ ผลลัพธ์ที่แสดงที่นี่ให้หลักฐานของการเกิดขึ้นของ rostochiensis กรัมและ pallida กรัมในอินโดนีเซีย ทั้งสปีชีส์อยู่ในชวากลาง (Wonosobo และ Banjarnegara เขต) whileinEastJavaandWestJavaonlysinglespecies พบ นี้เป็นรายงานแรกของรหัส โดยตรวจลักษณะเฉพาะของโมเลกุลของ PCN ในอินโดนีเซีย Isnotonlyhighlyeffectiveasaspeciesdiagnostictoolbutalso วิธีนี้วิธีการสำคัญที่ใช้ในอนุกรมวิธาน และตรวจสอบวัตถุประสงค์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

G. rostochiensis: ITS-1 (5'-TGT TGTACG TGC CGTACC TT-3 '), G. pallida: ITS-1 (5'-GGT GAC TCG ACG ATT GCT GT-3') และไพรเมอร์สากลสำหรับ PCN: 5.8S rDNA (5'-GCA GAA GGC TAG CGATCT TC-3 ') (มัลฮอลแลนด์ et al. 1996) ยี่สิบห้าดีเอ็นเอแม่แบบงะจากแต่ละภูมิภาคก็ถูกย้ายเป็น 25 ไมโครลิตรผสม PCR ที่มี 50 มิลลิ Tris-HCl (pH 9.0) 50mMKCl, 1.5mMMgCl2so thatthe 2 ห้อย, 0.1% Triton X-100 0.2 มิลลิ dNTP (นิวอิงแลนด์ Biolabs, ชิ่งสหราชอาณาจักร), ไพรเมอร์ 50 นาโนกรัมและ 0.5 หน่วยโพลิเมอร์ Taq (นิวอิงแลนด์ Biolabs ชิ่งสหราชอาณาจักร) ผลิตภัณฑ์พีซีอาร์ได้รับการวิเคราะห์โดยใช้ 2% ข่าวคราว agarose 0.5 × TBE buffer และย้อมด้วย ethidium bromide (Maniatis et al. 1989) ไพรเมอร์ประสบความสำเร็จในการกำหนดเป้าหมายการขยายดีเอ็นเอสำหรับแต่ละภูมิภาค PCN ไพรเมอร์จับคู่และ ITS-1 5,8S rDNA ผลิต 238 ชิ้นดีเอ็นเอ bp สำหรับทุกภูมิภาค (ชวาตะวันตกชวาตะวันออกและชวากลาง) (รูป. 1)
ในขณะที่ของ-1 และ 5,8S rDNA ผลใน 391 bp ชิ้นดีเอ็นเอเฉพาะแยกชวากลาง (รูปที่. 2) ตามที่มัลฮอลแลนด์ et al, (1996) ชิ้นส่วนของ 238 bp และ 391 bp ที่เกี่ยวข้องกับจี rostochiensis กรัมและ pallida ตามลำดับ ผลการนำเสนอที่นี่ให้หลักฐานของการเกิดกรัม rostochiensis กรัมและ pallida ในอินโดนีเซีย ทั้งสองชนิดที่มีอยู่ในชวากลาง (Wonosobo และ Banjarnegara หัวเมือง) whileinEastJavaandWestJavaonlysinglespecies ถูกค้นพบ รายงานนี้เป็นรายงานแรกของบัตรประจำตัวที่มีลักษณะโมเลกุลของ PCN ในอินโดนีเซีย วิธีการนี้เป็นวิธีการที่ isnotonlyhighlyeffectiveasaspeciesdiagnostictoolbutalso ที่มีความสำคัญซึ่งสามารถนำมาใช้เพื่อวัตถุประสงค์ในการจัดหมวดหมู่และกักกัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

กรัม rostochiensis : its-1 ( 5 ’ - TGT tgtacg TGC cgtacc tt-3 School ) , จี pallida : its-1 ( 5 ’ - ไม่ผ่าน TCG ACG ATT GCT gt-3 School ) และสากล ไพรเมอร์สำหรับ PCN : 5.8s rDNA ( 5 ’ - GCA GAA cgatct แท็ก ggc tc-3 School ) ( Mulholland et al . 1996 ) ยี่สิบห้าของดีเอ็นเอแม่แบบจากแต่ละภูมิภาค ถูกส่งตัวไปเป็น 25 μผม PCR ผสมที่ประกอบด้วย 50 มม. โดย– HCl ( pH 9.0 ) , 50mmkcl 1.5mmmgcl2so ว่า 2 , ตัวห้อย , 0 .1% Triton X-100 , 0.2 มม. dntp ( อังกฤษ biolabs Hitchin , สหราชอาณาจักร ) , 50 ของไพรเมอร์และ 0.5 หน่วยแท็ค Polymerase ( อังกฤษ biolabs Hitchin , สหราชอาณาจักร ) ผลิตภัณฑ์ PCR วิเคราะห์โดยใช้ 2% เจลอิเล็กโตรโฟรีซิสใน 0.5 ×ทีบีบัฟเฟอร์ และย้อมด้วยทิเดียมโบรไมด์ ( maniatis et al . 1989 ) ไพรเมอร์เรียบร้อยแล้วขยายดีเอ็นเอแต่ละ PCN เขตเป้าหมาย คู่ไพรเมอร์ของ its-1 และ 5 ,8 ด้วยการผลิตแต่ BP ดีเอ็นเอสำหรับทุกภูมิภาค ( West Java , Java , ตะวันออกและชวา ) ( รูปที่ 1 ) ,
ในขณะที่ its-1 5,8s rDNA และส่งผลให้ขนาด 391 BP ดีเอ็นเอสำหรับ Java กลางแยก ( รูปที่ 2 ) ตาม Mulholland et al . ( 1996 ) การกระจายตัวของ 238 BP และ 391 BP เกี่ยวข้องกับ G และ G rostochiensis pallida ตามลำดับผลลัพธ์ที่แสดงที่นี่ให้หลักฐานของการเกิด rostochiensis G G pallida ในอินโดนีเซีย ทั้งสองชนิดอยู่ในชวา ( Wonosobo และ banjarnegara เขต ) , whileineastjavaandwestjavaonlysinglespecies พบ นี่คือรายงานแรกของรหัสที่มีลักษณะโมเลกุลของ PCN ในอินโดนีเซียวิธีนี้เป็นวิธี isnotonlyhighlyeffectiveasaspeciesdiagnostictoolbutalso ไวซึ่งสามารถใช้สำหรับวัตถุประสงค์ทางอนุกรมวิธานและกักกัน .