ครอบคลุม all nucleic acid molecules

ครอบคลุม all nucleic acid molecules that รวมถึง nucleotide sequences encoding a functional มิวทีน. In this regard, the present การเปิดเผย provides nucleic acid sequences (as shown in SEQ ID NO: 36-61, 72-81 and 86-
89) encoding certain ไลโปคาลิน มิวทีน of the การเปิดเผย.



[00122] Therefore, the present การเปิดเผย รวมถึง a nucleic acid sequence encoding a มิวทีน
amino acid sequence positions 26-34, 56-58, 80, 83; 104-106 and 108 of the ลำดับ โพลีเปปไทด์ เชิงเส้น of ไลโปคาลิน น้ำตามนุษย์ เต็มวัย, โดยที่ the โคดอนs encoding at least one of the ซิสเทอีน เรซิดิว at sequence positions 61 and 153 of the ลำดับ โพลีเปปไทด์ เชิงเส้น of the ไลโปคาลิน น้ำตามนุษย์ เต็มวัย have been mutated to encode any other amino acid เรซิดิว. In some further embodiments, the nucleic acid sequence encoding a มิวทีน according to the การเปิดเผย that has a mutation at at least one โคดอน of any of the amino acid sequence positions 79, 92 and 105 of the ลำดับ โพลีเปปไทด์ เชิงเส้น of ไลโปคาลิน น้ำตามนุษย์ เต็มวัย.

[00123] The การเปิดเผย as disclosed herein also รวมถึง nucleic acid molecules encoding tear ไลโปคาลิน มิวทีน of the การเปิดเผย, which รวมถึง additional mutations outside the indicated sequence positions of experimental การก่อกลายพันธุ์. Such mutations are often tolerated หรือ can even prove to be advantageous, for example if they contribute to an improved folding efficiency, serum stability, thermal stability หรือ ลิแกนด์ binding แอฟฟินิตี้ of the มิวทีน.

[00124] A nucleic acid molecule disclosed in this application may be "operably linked" to a regulatory sequence (or regulatory sequences) to allow expression of this nucleic acid molecule.

[00125] A nucleic acid molecule, such as DNA, is referred to as "capable of expressing a nucleic acid molecule" หรือ capable "to allow expression of a nucleotide sequence" if it รวมถึง sequence elements which contain information regarding to transcriptional and/or translational regulation, and such sequences are "operably linked" to the nucleotide sequence encoding the โพลีเปปไทด์. An operable linkage is a linkage in which the regulatory sequence elements and the sequence to be expressed are connected in a way that enables gene expression. The precise nature of the regulatory บริเวณs necessary for gene expression may vary among species, but in general these บริเวณs รวมถึง a promoter which, in prokaryotes, contains both the promoter per se, i.e. DNA elements directing the initiation of transcription, as well as DNA elements which, when transcribed into RNA, will signal the initiation of translation. Such promoter บริเวณs normally รวมถึง 5' non-coding sequences involved in initiation of transcription and translation, such as the -35/-10 boxes and the Shine-Dalgarno element in prokaryotes หรือ the TATA box, CAAT sequences, and 5'-capping elements in eukaryotes. These บริเวณs can also รวมถึง enhancer หรือ repressor elements as well as translated signal and leader sequences for targeting the native โพลีเปปไทด์ to a specific compartment of a host cell.
[00126] In addition, the 3' non-coding sequences may contain regulatory elements involved m transcriptional termination, polyadenylation หรือ the like. If, however, . these termination sequences are not satisfactory functional in a particular host cell, then they may be substituted with signals functional in that cell.

[00127] Therefore, a nucleic acid molecule of the การเปิดเผย can รวมถึง a regulatory sequence, such as a promoter sequence. ในบางรุรุ a nucleic acid molecule of the การเปิดเผย รวมถึง a promoter sequence and a transcriptional termination sequence. Suitable prokaryotic promoters are, for example, the tet promoter, the lacUV5 promoter หรือ the T7 promoter. Examples of promoters useful for expression in eukaryotic cells are the SV40 promoter หรือ the CMV promoter.

[00128] The nucleic acid molecules of the การเปิดเผย can also be part of a เวกเตอร์ หรือ any other kind of cloning vehicle, such as a plasmid, a phagemid, a phage, a baculovirus, a cosmid หรือ an artificial chromosome.

[00129] In one embodiment, the nucleic acid molecule is รวมถึงd in a phasmid. A phasmid เวกเตอร์ denotes a เวกเตอร์ encoding the intergenic บริเวณ of a temperent phage, such as Ml3 หรือ fl, หรือ a functional part thereof fused to the cDNA of interest. After superinfection of the bacterial host cells with such an phagemid เวกเตอร์ and an appropriate helper phage (e.g. Ml3K07, VCS-Ml3 หรือ R408) intact phage particles are produced, thereby enabling physical coupling of the encoded heterologous cDNA to its corresponding โพลีเปปไทด์ displayed on the phage surface (see e.g. Lowman, H.B. (1997) Annu. Rev. Biophys. Biomol. Struct. 26,
401-424, หรือ Rodi, D.J., and Makowski, L. (1999) Curr. Opin. Biotechnol. 10, 87-93).

[00130] Such cloning vehicles can รวมถึง, aside from the regulatory sequences described above and a nucleic acid sequence encoding a ไลโปคาลิน มิวทีน of the การเปิดเผย, replication and control sequences derived from a species compatible with the host cell that is used for expression as well as selection markers conferring a selectable phenotype on transformed หรือ transfected cells. Large numbers of suitable cloning เวกเตอร์s are known in the art, and are commercially available.

[00131] The DNA molecule encoding ไลโปคาลิน มิวทีน of the การเปิดเผย, and in particular a cloning เวกเตอร์ containing the coding sequence of such a ไลโปคาลิน มิวทีน can be transformed into a host cell capable of expressing the gene. Transformation can be performed using standard techniques. Thus, the การเปิดเผย is also directed to a host cell containing a nucleic acid molecule as disclosed herein.
[00132] The transformed host cells are cultured under conditions suitable for expression of the nucleotide sequence encoding a fusion protein of the การเปิดเผย. Suitable host cells can be prokaryotic, such as Escherichia coli (E. coli) หรือ Bacillus subtilis, หรือ eukaryotic, such as Saccharomyces cerevisiae, Pichia pastoris, SF9 หรือ High5 insect cells, immortalized mammalian cell lines (e.g. HeLa cells หรือ CHO cells) หรือ primary mammalian cells.

[00133] The การเปิดเผย also relates to a method for the production of a มิวทีน of the การเปิดเผย, โดยที่ the มิวทีน, aชิ้นส่วนย่อย of the มิวทีน หรือ a fusion protein of the มิวทีน and another โพลีเปปไทด์ is produced starting from the nucleic acid coding for the มิวทีน by means of genetic engineering methods. The method can be carried out in vivo, the มิวทีน can for example be produced in a bacterial หรือ eukaryotic host organism and then isolated from this host organism หรือ its culture. It is also possible to produce a protein in vitro, for example by use of an in vitro translation system.

[00134] When producing the มิวทีน in vivo a nucleic acid encoding a มิวทีน of the การเปิดเผย is introduced into a suitable bacterial หรือ eukaryotic host organism by means of recombinant DNA technology (as already outlined above). For this purpose, the host cell is first transformed with a cloning เวกเตอร์ that รวมถึง a nucleic acid molecule encoding a มิวทีน of the การเปิดเผย using established standard methods. The host cell is then cultured under conditions, which allow expression of the heterologous DNA and thus the synthesis of the corresponding โพลีเปปไทด์. Subsequently, the โพลีเปปไทด์ is recovered either from the cell หรือ from the cultivation medium.

[00135] In some tear ไลโปคาลิน มิวทีน of the การเปิดเผย, the naturally occumng disulfide bond between Cys 61 and Cys 153 is removed. Accordingly, such มิวทีน (or any other tear ไลโปคาลิน มิวทีน that does not รวมถึง an intramolecular disulfide bond) can be produced in a cell compartment having a reducing redox milieu, for example, in the cytoplasm of Gram-negative bacteria. In case a ไลโปคาลิน มิวทีน of the การเปิดเผย รวมถึง intramolecular disulfide bonds, it may be desired to direct the nascent โพลีเปปไทด์ to a cell compartment having an oxidizing redox milieu using an appropriate signal sequence. Such an oxidizing environment may be provided by the periplasm of Gram-negative bacteria such as E. coli, in the extracellular milieu of Gram-positive bacteria หรือ in the lumen of the endoplasmatic reticulum of eukaryotic cells and usually favors the formation of structural disulfide bonds. It is, however, also possible to produce a มิวทีน of the การเปิดเผย in the cytosol of a host cell, such as E. coli. In this case, the โพลีเปปไทด์ can either be directly
obtained in a soluble and folded state หรือ recovered in form of inclusion bodies, followed by renaturation in vitro. A further option is the use of specific host strains having an oxidizing intracellular milieu, which may thus al

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ครอบคลุมทั้งหมดโมเลกุลกรดนิวคลีอิกนิวคลีโอไทด์ที่รวมถึงลำดับรหัสมิวทีนทำงาน ในการนี้ การเปิดเผยปัจจุบันมีลำดับกรดนิวคลีอิก (ตามที่แสดงในลำดับ ID: 36-61, 72-81 และ 86 -89) การเข้ารหัสบางมิวทีนไลโปคาลินของการเปิดเผยดังนั้น [00122] รวมถึงการเปิดเผยนำเสนอลำดับกรดนิวคลีอิกที่เข้ารหัสแบบมิวทีน กรดอะมิโนลำดับตำแหน่ง 26-34, 56-58, 80, 83 104-106 และ 108 เชิงเส้นโพลีเปปไทด์ลำดับของไลโปคาลินน้ำตามนุษย์เต็มวัย โดยที่ โคดอนs เข้ารหัสอย่างน้อยหนึ่งของเรซิดิวซิสเทอีนที่ลำดับตำแหน่ง 61 และ 153 ของเชิงเส้นโพลีเปปไทด์ลำดับของไลโปคาลินน้ำตามนุษย์เต็มวัยมีการกลายไปเข้าเรซิดิวกรดอะมิโนอื่น ๆ ในบางอย่างเพิ่มเติม embodiments ลำดับกรดนิวคลีอิกเข้ามิวทีนตามการเปิดเผยที่มีการกลายพันธุ์ที่โคดอนน้อยของตำแหน่งลำดับกรดอะมิโน 79, 92 และ 105 เชิงเส้นโพลีเปปไทด์ลำดับของไลโปคาลินน้ำตามนุษย์เต็มวัย[00123] การเปิดเผยเป็นการเปิดเผยนี้ยังรวมถึงกรดนิวคลีอิกโมเลกุลเข้ามิวทีนไลโปคาลินฉีกขาดของการเปิดเผย การกลายพันธุ์เพิ่มเติมรวมถึงนอกตำแหน่งระบุลำดับของการก่อกลายพันธุ์ทดลอง มักจะมีอภัยโทษกลายพันธุ์ดังกล่าวหรือสามารถพิสูจน์ได้จะได้เปรียบ เช่นถ้าเกี่ยวข้องให้มีประสิทธิภาพดีขึ้นพับ ซีรั่มความมั่นคง เสถียรภาพความร้อนหรือลิแกนด์รวมแอฟฟินิตี้ของมิวทีนได้โมเลกุลของกรดนิวคลีอิก A [00124] เปิดเผยในโปรแกรมประยุกต์นี้อาจจะ "operably กับ" ลำดับที่กำกับดูแล (หรือลำดับข้อบังคับ) ให้นิพจน์นี้โมเลกุลของกรดนิวคลีอิก[00125] A nucleic acid molecule, such as DNA, is referred to as "capable of expressing a nucleic acid molecule" หรือ capable "to allow expression of a nucleotide sequence" if it รวมถึง sequence elements which contain information regarding to transcriptional and/or translational regulation, and such sequences are "operably linked" to the nucleotide sequence encoding the โพลีเปปไทด์. An operable linkage is a linkage in which the regulatory sequence elements and the sequence to be expressed are connected in a way that enables gene expression. The precise nature of the regulatory บริเวณs necessary for gene expression may vary among species, but in general these บริเวณs รวมถึง a promoter which, in prokaryotes, contains both the promoter per se, i.e. DNA elements directing the initiation of transcription, as well as DNA elements which, when transcribed into RNA, will signal the initiation of translation. Such promoter บริเวณs normally รวมถึง 5' non-coding sequences involved in initiation of transcription and translation, such as the -35/-10 boxes and the Shine-Dalgarno element in prokaryotes หรือ the TATA box, CAAT sequences, and 5'-capping elements in eukaryotes. These บริเวณs can also รวมถึง enhancer หรือ repressor elements as well as translated signal and leader sequences for targeting the native โพลีเปปไทด์ to a specific compartment of a host cell. [00126] In addition, the 3' non-coding sequences may contain regulatory elements involved m transcriptional termination, polyadenylation หรือ the like. If, however, . these termination sequences are not satisfactory functional in a particular host cell, then they may be substituted with signals functional in that cell.[00127] Therefore, a nucleic acid molecule of the การเปิดเผย can รวมถึง a regulatory sequence, such as a promoter sequence. ในบางรุรุ a nucleic acid molecule of the การเปิดเผย รวมถึง a promoter sequence and a transcriptional termination sequence. Suitable prokaryotic promoters are, for example, the tet promoter, the lacUV5 promoter หรือ the T7 promoter. Examples of promoters useful for expression in eukaryotic cells are the SV40 promoter หรือ the CMV promoter.[00128] The nucleic acid molecules of the การเปิดเผย can also be part of a เวกเตอร์ หรือ any other kind of cloning vehicle, such as a plasmid, a phagemid, a phage, a baculovirus, a cosmid หรือ an artificial chromosome.[00129] In one embodiment, the nucleic acid molecule is รวมถึงd in a phasmid. A phasmid เวกเตอร์ denotes a เวกเตอร์ encoding the intergenic บริเวณ of a temperent phage, such as Ml3 หรือ fl, หรือ a functional part thereof fused to the cDNA of interest. After superinfection of the bacterial host cells with such an phagemid เวกเตอร์ and an appropriate helper phage (e.g. Ml3K07, VCS-Ml3 หรือ R408) intact phage particles are produced, thereby enabling physical coupling of the encoded heterologous cDNA to its corresponding โพลีเปปไทด์ displayed on the phage surface (see e.g. Lowman, H.B. (1997) Annu. Rev. Biophys. Biomol. Struct. 26,401-424, หรือ Rodi, D.J., and Makowski, L. (1999) Curr. Opin. Biotechnol. 10, 87-93). [00130] Such cloning vehicles can รวมถึง, aside from the regulatory sequences described above and a nucleic acid sequence encoding a ไลโปคาลิน มิวทีน of the การเปิดเผย, replication and control sequences derived from a species compatible with the host cell that is used for expression as well as selection markers conferring a selectable phenotype on transformed หรือ transfected cells. Large numbers of suitable cloning เวกเตอร์s are known in the art, and are commercially available.
[00131] The DNA molecule encoding ไลโปคาลิน มิวทีน of the การเปิดเผย, and in particular a cloning เวกเตอร์ containing the coding sequence of such a ไลโปคาลิน มิวทีน can be transformed into a host cell capable of expressing the gene. Transformation can be performed using standard techniques. Thus, the การเปิดเผย is also directed to a host cell containing a nucleic acid molecule as disclosed herein.
[00132] The transformed host cells are cultured under conditions suitable for expression of the nucleotide sequence encoding a fusion protein of the การเปิดเผย. Suitable host cells can be prokaryotic, such as Escherichia coli (E. coli) หรือ Bacillus subtilis, หรือ eukaryotic, such as Saccharomyces cerevisiae, Pichia pastoris, SF9 หรือ High5 insect cells, immortalized mammalian cell lines (e.g. HeLa cells หรือ CHO cells) หรือ primary mammalian cells.

[00133] The การเปิดเผย also relates to a method for the production of a มิวทีน of the การเปิดเผย, โดยที่ the มิวทีน, aชิ้นส่วนย่อย of the มิวทีน หรือ a fusion protein of the มิวทีน and another โพลีเปปไทด์ is produced starting from the nucleic acid coding for the มิวทีน by means of genetic engineering methods. The method can be carried out in vivo, the มิวทีน can for example be produced in a bacterial หรือ eukaryotic host organism and then isolated from this host organism หรือ its culture. It is also possible to produce a protein in vitro, for example by use of an in vitro translation system.

[00134] When producing the มิวทีน in vivo a nucleic acid encoding a มิวทีน of the การเปิดเผย is introduced into a suitable bacterial หรือ eukaryotic host organism by means of recombinant DNA technology (as already outlined above). For this purpose, the host cell is first transformed with a cloning เวกเตอร์ that รวมถึง a nucleic acid molecule encoding a มิวทีน of the การเปิดเผย using established standard methods. The host cell is then cultured under conditions, which allow expression of the heterologous DNA and thus the synthesis of the corresponding โพลีเปปไทด์. Subsequently, the โพลีเปปไทด์ is recovered either from the cell หรือ from the cultivation medium.

[00135] In some tear ไลโปคาลิน มิวทีน of the การเปิดเผย, the naturally occumng disulfide bond between Cys 61 and Cys 153 is removed. Accordingly, such มิวทีน (or any other tear ไลโปคาลิน มิวทีน that does not รวมถึง an intramolecular disulfide bond) can be produced in a cell compartment having a reducing redox milieu, for example, in the cytoplasm of Gram-negative bacteria. In case a ไลโปคาลิน มิวทีน of the การเปิดเผย รวมถึง intramolecular disulfide bonds, it may be desired to direct the nascent โพลีเปปไทด์ to a cell compartment having an oxidizing redox milieu using an appropriate signal sequence. Such an oxidizing environment may be provided by the periplasm of Gram-negative bacteria such as E. coli, in the extracellular milieu of Gram-positive bacteria หรือ in the lumen of the endoplasmatic reticulum of eukaryotic cells and usually favors the formation of structural disulfide bonds. It is, however, also possible to produce a มิวทีน of the การเปิดเผย in the cytosol of a host cell, such as E. coli. In this case, the โพลีเปปไทด์ can either be directly
obtained in a soluble and folded state หรือ recovered in form of inclusion bodies, followed by renaturation in vitro. A further option is the use of specific host strains having an oxidizing intracellular milieu, which may thus al

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ครอบคลุมทุกโมเลกุลของกรดนิวคลีว่ารวมถึงลำดับเบสเข้ารหัสการทำงานมิวทีน ในการนี้การเปิดเผยในปัจจุบันมีลำดับนิวคลีอิกกรด (ดังแสดงใน SEQ ID NO: 36-61, 72-81 และ 86-
89) การเข้ารหัสบางไลโปคาลินมิวทีนของการเปิดเผย. [00122 ] ดังนั้นในปัจจุบันการเปิดเผยรวมถึงลำดับกรดนิวคลีเข้ารหัสมิวทีนอะมิโนตำแหน่งลำดับกรด26-34, 56-58, 80, 83; 104-106 และ 108 ของลำดับโพลีเปปไทด์เชิงเส้นของไลโปคาลินน้ำตามนุษย์เต็มวัย, โดยที่โคดอน s การเข้ารหัสอย่างน้อยหนึ่งของซิสเทอีนเรซิดิวที่ลำดับ ตำแหน่ง 61 และ 153 ของลำดับโพลีเปปไทด์เชิงเส้นของไลโปคาลินน้ำตามนุษย์เต็มวัยได้รับการกลายพันธุ์ในการเข้ารหัสกรดอะมิโนอื่น ๆ เรซิดิว ใน embodiments เพิ่มเติมบางลำดับกรดนิวคลีอิกเข้ารหัสมิวทีนตามการเปิดเผยว่ามีการกลายพันธุ์ที่อย่างน้อยหนึ่งโคดอนใด ๆ ของลำดับกรดอะมิโนที่ตำแหน่ง 79, 92 และ 105 ของลำดับโพลีเปป ไทด์เชิงเส้นของไลโปคาลินน้ำตามนุษย์เต็มวัย. [00123] ที่การเปิดเผยตามที่ได้เปิดเผยในที่นี้ยังรวมถึงโมเลกุลของกรดนิวคลีอิกเข้ารหัสฉีกขาดไลโปคาลินมิวทีนของการเปิดเผยซึ่งรวมเพิ่มเติมถึง การกลายพันธุ์นอกตำแหน่งที่ระบุลำดับของการทดลองการก่อกลายพันธุ์ การกลายพันธุ์ดังกล่าวจะทนมักหรือแม้กระทั่งสามารถพิสูจน์ให้เป็นประโยชน์เช่นถ้าพวกเขานำไปสู่ประสิทธิภาพการพับการปรับปรุงเสถียรภาพเซรั่ม, เสถียรภาพทางความร้อนหรือลิแกนด์ที่มีผลผูกพันแอฟฟินิตี้ของมิวทีน. [00124] เป็น โมเลกุลของกรดนิวคลีอิกเปิดเผยไว้ในโปรแกรมนี้อาจจะ "ที่เชื่อมโยง operably" เพื่อลำดับการกำกับดูแล (หรือลำดับการกำกับดูแล) เพื่อให้การแสดงออกของโมเลกุลของกรดนิวคลีอิกนี้. [00125] โมเลกุลของกรดนิวคลีอิกเช่นดีเอ็นเอจะเรียกว่า "ความสามารถในการ แสดงโมเลกุลของกรดนิวคลีอิก "หรือความสามารถ" ที่จะช่วยให้การแสดงออกของลำดับเบส "ถ้ามันรวมถึงองค์ประกอบลำดับที่มีข้อมูลเกี่ยวกับการถอดรหัสและ / หรือระเบียบแปลและลำดับดังกล่าว" ที่เชื่อมโยง operably "ลำดับเบสเข้ารหัสโพ ลีเปปไทด์ เชื่อมโยงกระทำคือการเชื่อมโยงซึ่งในองค์ประกอบลำดับการกำกับดูแลและลำดับที่จะแสดงมีการเชื่อมต่อในทางที่ช่วยให้การแสดงออกของยีน ธรรมชาติที่แม่นยำของการกำกับดูแลบริเวณ s ที่จำเป็นสำหรับการแสดงออกของยีนที่อาจแตกต่างกันระหว่างสายพันธุ์ แต่โดยทั่วไปเหล่านี้บริเวณ s รวมถึงผู้ก่อการซึ่งใน prokaryotes มีทั้งผู้ก่อการต่อ se คือองค์ประกอบดีเอ็นเอกำกับการเริ่มต้นของการถอดความได้เป็นอย่างดี เป็นองค์ประกอบดีเอ็นเอซึ่งเมื่อคัดลอกลงในอาร์เอ็นเอจะส่งสัญญาณการเริ่มต้นของการแปล โปรโมเตอร์ดังกล่าวบริเวณ s ตามปกติรวมถึง 5 'ลำดับที่ไม่ได้มีส่วนร่วมในการเขียนโปรแกรมการเริ่มต้นของการถอดรหัสและการแปลเช่น -35 / -10 กล่องและองค์ประกอบ Shine-Dalgarno ใน prokaryotes หรือกล่องทาทาลำดับ CAAT และ 5'- สูงสุดที่กำหนดองค์ประกอบในยูคาริโอ บริเวณ s เหล่านี้ยังสามารถรวมถึงเพิ่มหรือองค์ประกอบอดกลั้นเช่นเดียวกับลำดับการแปลสัญญาณและเป็นผู้นำสำหรับการกำหนดเป้าหมายพื้นเมืองโพลีเปปไทด์ไปยังช่องที่เฉพาะเจาะจงของเซลล์โฮสต์. [00,126] นอกจากนี้ 3 'ที่ไม่ได้เข้ารหัส ลำดับอาจมีองค์ประกอบที่เกี่ยวข้องกับการกำกับดูแลการยกเลิกการถอดรหัสเมตร, Polyadenylation หรือไม่ชอบ แต่ถ้า ลำดับที่การเลิกจ้างเหล่านี้จะไม่พอใจการทำงานในเซลล์โฮสต์โดยเฉพาะอย่างยิ่งจากนั้นพวกเขาอาจใช้แทนสัญญาณทำงานในมือถือที่. [00127] ดังนั้นโมเลกุลของกรดนิวคลีอิกของการเปิดเผยสามารถรวมถึงลำดับการกำกับดูแลเช่นลำดับโปรโมเตอร์ . ในบางรุรุโมเลกุลกรดนิวคลีอิกของการเปิดเผยรวมถึงลำดับโปรโมเตอร์และลำดับการเลิกจ้างการถอดรหัส โปรโมเตอร์โปรคาริโอที่เหมาะสมตัวอย่างเช่นการก่อการเทต, โปรโมเตอร์ lacUV5 หรือโปรโมเตอร์ T7 ตัวอย่างของโปรโมเตอร์ที่มีประโยชน์สำหรับการแสดงออกในเซลล์ยูคาริโอเป็นผู้ก่อการ SV40 หรือก่อการ CMV ได้. [00128] โมเลกุลของกรดนิวคลีอิกของการเปิดเผยนอกจากนี้ยังสามารถเป็นส่วนหนึ่งของเวกเตอร์หรือชนิดอื่น ๆ ของโคลนยานพาหนะเช่นพลาสมิดที่ phagemid, ทำลายจุลินทรีย์ที่ baculovirus เป็น cosmid หรือโครโมโซมเทียม. [00129] หนึ่งในศูนย์รวมโมเลกุลกรดนิวคลีอิกเป็นรวมถึง d ใน phasmid phasmid เวกเตอร์หมายถึงเวกเตอร์เข้ารหัส intergenic บริเวณของฟาจ temperent เช่น ML3 หรือชั้นหรือเป็นส่วนหนึ่งของการทำงานดังกล่าวผสมกับยีนที่น่าสนใจ หลังจาก superinfection ของเซลล์โฮสต์แบคทีเรียด้วยเช่น phagemid เวกเตอร์และผู้ช่วยที่เหมาะสมฟาจ (เช่น Ml3K07, VCS-ML3 หรือ R408) อนุภาคทำลายจุลินทรีย์เหมือนเดิมมีการผลิตจึงทำให้มีเพศสัมพันธ์ทางกายภาพของยีน heterologous เข้ารหัสเพื่อสอดคล้องกันโพลีเปป ไทด์ที่ปรากฏบนพื้นผิว phage (ดูเช่นโลว์, HB (1997) Annu. รายได้ Biophys. Biomol. โครงสร้าง. 26, 401-424, หรือ Rodi, ดีเจและ Makowski ลิตร (1999) ฟี้. Opin. Biotechnol . 10, 87-93). [00130] ยานพาหนะโคลนดังกล่าวสามารถรวมถึงนอกเหนือจากลำดับการกำกับดูแลที่อธิบายข้างต้นและลำดับนิวคลีอิกกรดเข้ารหัสไลโปคาลินมิวทีนของการเปิดเผยการจำลองแบบและลำดับการควบคุม ที่ได้มาจากสายพันธุ์ที่เข้ากันได้กับเซลล์โฮสต์ที่ใช้สำหรับการแสดงออกเช่นเดียวกับการเลือกเครื่องหมายหารือฟีโนไทป์เลือกในการเปลี่ยนหรือเซลล์ transfected จำนวนมากของการโคลนเหมาะเวกเตอร์ s เป็นที่รู้จักกันในงานศิลปะและใช้ได้ในเชิงพาณิชย์. [00131] โมเลกุลดีเอ็นเอเข้ารหัสไลโปคาลินมิวทีนของการเปิดเผยและโดยเฉพาะอย่างยิ่งโคลนเวกเตอร์บรรจุการเข้ารหัส ลำดับเช่นไลโปคาลินมิวทีนสามารถเปลี่ยนเป็นเซลล์โฮสต์ความสามารถในการแสดงของยีน การเปลี่ยนแปลงสามารถทำได้โดยใช้เทคนิคมาตรฐาน ดังนั้นการเปิดเผยเป็นผู้กำกับยังเซลล์โฮสต์ที่มีโมเลกุลของกรดนิวคลีอิกตามที่ได้เปิดเผยในที่นี้. [00132] เซลล์โฮสต์กลายเป็นที่เพาะเลี้ยงภายใต้เงื่อนไขที่เหมาะสมสำหรับการแสดงออกของลำดับเบสเข้ารหัสโปรตีนฟิวชั่นของการเปิดเผย เซลล์โฮสต์ที่เหมาะสมสามารถเป็นโปรคาริโอเช่น Escherichia coli (E. coli) หรือเชื้อ Bacillus subtilis, หรือยูคาริโอเช่น Saccharomyces cerevisiae, Pichia pastoris, SF9 หรือ High5 เซลล์แมลง immortalized เซลล์เลี้ยงลูกด้วยนม (เช่นเซลล์ HeLa หรือเซลล์ CHO) หรือ เซลล์สัตว์หลัก. [00133] ที่การเปิดเผยนอกจากนี้ยังเกี่ยวข้องกับวิธีการสำหรับการผลิตของมิวทีนที่ของการเปิดเผยนั้นโดยที่มิวทีนซึ่งเป็นชิ้นส่วนย่อยของมิวทีนหรือฟิวชั่น โปรตีนของมิวทีนและอื่น ๆ โพลีเปปไทด์ที่ผลิตเริ่มจากการเข้ารหัสกรดนิวคลีสำหรับมิวทีนโดยวิธีการของวิธีทางพันธุวิศวกรรม วิธีที่สามารถดำเนินการได้ในร่างกายที่มิวทีนสามารถยกตัวอย่างเช่นมีการผลิตในแบคทีเรียหรือสิ่งมีชีวิต eukaryotic และโฮสต์ที่แยกได้จากสิ่งมีชีวิตแล้วโฮสต์นี้หรือวัฒนธรรมของตน นอกจากนี้ยังเป็นไปได้ที่จะผลิตโปรตีนในหลอดทดลองเช่นโดยการใช้ในหลอดทดลองระบบการแปล. [00134] เมื่อผลิตมิวทีนในร่างกายเข้ารหัสกรดนิวคลีอิกมิวทีนของการเปิดเผยจะถูกนำเข้าสู่ สิ่งมีชีวิตที่โฮสต์แบคทีเรียหรือยูคาริโอที่เหมาะสมโดยวิธีการของเทคโนโลยีดีเอ็นเอ (ตามที่ระบุไว้แล้วข้างต้น) เพื่อจุดประสงค์นี้เซลล์จะเปลี่ยนเป็นครั้งแรกที่มีการโคลนเวกเตอร์ที่รวมถึงโมเลกุลของกรดนิวคลีอิกเข้ารหัสมิวทีนของการเปิดเผยที่จัดตั้งขึ้นโดยใช้วิธีการมาตรฐาน เซลล์โฮสต์เลี้ยงแล้วภายใต้เงื่อนไขซึ่งจะช่วยให้การแสดงออกของดีเอ็นเอ heterologous และทำให้การสังเคราะห์ที่สอดคล้องโพลีเปปไทด์ ต่อจากนั้นโพลีเปปไทด์มีการกู้คืนทั้งจากมือถือหรือจากสื่อการเพาะปลูกที่. [00,135] ในบางฉีกขาดไลโปคาลินมิวทีนของการเปิดเผย, ธรรมชาติ occumng พันธบัตรซัลไฟด์ระหว่าง Cys 61 และ Cys 153 จะถูกลบออก ดังนั้นเช่นมิวทีน (หรือฉีกขาดอื่น ๆ ไลโปคาลินมิวทีนที่ไม่ได้รวมถึงพันธบัตรซัลไฟด์ภายในโมเลกุล) สามารถผลิตได้ในช่องเซลล์ที่มีการลดสภาพแวดล้อมอกซ์, ตัวอย่างเช่นในพลาสซึม ของแบคทีเรียแกรมลบ ในกรณีที่ไลโปคาลินมิวทีนของการเปิดเผยรวมถึงพันธบัตรซัลไฟด์ภายในโมเลกุลก็อาจจะต้องการที่จะนำพึ่งโพลีเปปไทด์ที่จะช่องเซลล์ที่มีสภาพแวดล้อมปฏิกิริยาออกซิไดซ์โดยใช้ลำดับสัญญาณที่เหมาะสม . สภาพแวดล้อมดังกล่าวอาจจะถูกออกซิไดซ์จัดไว้ให้โดย periplasm ของแบคทีเรียแกรมลบเช่นเชื้อ E. coli ในสภาพแวดล้อมนอกของแบคทีเรียแกรมบวกหรือในลูเมนของร่างแห endoplasmatic ของเซลล์ยูคาริโอและมักจะโปรดปรานการก่อตัวของพันธบัตรซัลไฟด์โครงสร้าง . มันเป็น แต่ยังเป็นไปได้ในการผลิตมิวทีนของการเปิดเผยในเซลล์ของเซลล์โฮสต์เช่นเชื้อ E. coli ในกรณีนี้โพลีเปปไทด์ทั้งสามารถโดยตรงที่ได้รับอยู่ในสภาพที่ละลายน้ำได้และพับหรือการกู้คืนในรูปแบบของร่างกายรวมตามด้วยการกลับคืนสู่สภาพธรรมชาติในหลอดทดลอง ตัวเลือกต่อไปคือการใช้สายพันธุ์ที่โฮสต์เฉพาะการมีสภาพแวดล้อมภายในเซลล์ออกซิไดซ์ซึ่งอาจจะทำให้อัล

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ครอบคลุมทั้งหมดกรดนิวคลีอิกลำดับนิวคลีโอไทด์เป็นโมเลกุลที่รวมถึงมิวทีนฟังก์ชันการเข้ารหัส ทั้งนี้ ปัจจุบันมีการเปิดเผยกรดนิวคลีอิกดังนี้ ( ดังแสดงใน seq id : 36-61 72-81 , 86 -
89 ) มิวทีนไลโปคาลินบางอย่างของการเปิดเผยการเข้ารหัส .



[ 00122 ] ดังนั้นการการเปิดเผยปัจจุบันรวมถึงเป็นกรดนิวคลีอิกลำดับการเข้ารหัสมิวทีน
ลำดับกรดอะมิโนตำแหน่ง 26-34 56-58 , 80 , 83 ; 104-106 และ 108 ของลำดับโพลีเปปไทด์เชิงเส้นของไลโปคาลินเต็มวัยน้ำตามนุษย์ ,โดยที่ที่โคดอน s เข้ารหัสอย่างน้อยหนึ่งของเรซิดิวซิสเทอีนลำดับตำแหน่งที่ 61 และ 153 ของลำดับโพลีเปปไทด์เชิงเส้นของเต็มวัยน้ำตามนุษย์ไลโปคาลินได้กลายพันธุ์การเข้ารหัสอื่น ๆเรซิดิวกรดแอมิโน ใน embodiments บางเพิ่มเติมการลำดับดีเอ็นเอการเข้ารหัสมิวทีนตามการการเปิดเผยที่มีการกลายพันธุ์ที่อย่างน้อยหนึ่งโคดอนของใด ๆของลำดับกรดอะมิโนตำแหน่ง 79 , 92 และ 105 ของลำดับโพลีเปปไทด์เชิงเส้นของไลโปคาลินน้ำตามนุษย์เต็มวัย .

[ 00123 ] การเปิดเผยเป็นที่เปิดเผยในที่นี้ก็รวมถึงโมเลกุลของกรดนิวคลีอิกฉีกไลโปคาลินมิวทีนของการเปิดเผยการเข้ารหัส ซึ่งรวมถึงการกลายพันธุ์เพิ่มเติมนอกระบุลำดับตำแหน่งของทดลองการก่อกลายพันธุ์ . การกลายพันธุ์ดังกล่าวมักจะยอมรับค็อคสามารถพิสูจน์ให้เป็นประโยชน์ตัวอย่างเช่นถ้าพวกเขาจะช่วยปรับปรุงประสิทธิภาพของเซรั่มพับ , เสถียรภาพ , เสถียรภาพต่อความร้อนค็อคลิแกนด์ผูกแอฟฟินิตี้ของมิวทีน

[ 00124 ] กรดนิวคลีอิกโมเลกุลเปิดเผยในโปรแกรมนี้อาจจะ " operably เชื่อมโยง " เป็นลำดับ ( ลำดับกฎระเบียบหรือข้อบังคับ ) เพื่อให้สำนวนนี้

[ โมเลกุลของกรดนิวคลีอิก . 00125 ] กรดนิวคลีอิกโมเลกุลเช่น ดีเอ็นเอ จะเรียกว่า " สามารถแสดงโมเลกุลของกรดนิวคลีอิก " ค็อคความสามารถ " เพื่อให้การแสดงออกของลำดับนิวคลีโอไทด์ " ถ้ามันรวมถึงลำดับองค์ประกอบซึ่งประกอบด้วยข้อมูลเกี่ยวกับ particle และ / หรือระเบียบภาพและลำดับ " operably เชื่อมโยง " กับลำดับนิวคลีโอไทด์ที่โพลีเปปไทด์การเข้ารหัสมีการเชื่อมโยงคือการเชื่อมโยงฉากซึ่งในองค์ประกอบด้านขั้นตอนและลำดับมีการเชื่อมต่อในลักษณะที่ช่วยให้การแสดงออกของยีน ลักษณะที่ชัดเจนของบริเวณกฎระเบียบที่จำเป็นสำหรับการแสดงออกของยีนอาจแตกต่างกันไปตามชนิด แต่โดยทั่วไปเหล่านี้บริเวณ S รวมถึงการซึ่งในโปรคาริโอทส์ประกอบด้วยตัวส่งต่อ SE , เช่นดีเอ็นเอองค์ประกอบกำกับการถอดความเป็นองค์ประกอบของดีเอ็นเอและอาร์เอ็นเอ ซึ่งเมื่อเข้าไปจะส่งสัญญาณเริ่มต้นของการแปล เช่นการบริเวณปกติรวมถึง 5 ' ไม่ดับนะครับ มีส่วนร่วมในการเริ่มต้นของการถอดความและแปล เช่น - 35 / 10 กล่องและแดลการ์โน่ท้าองค์ประกอบในโพรคาริโค็อคกล่องทาทา caat ลำดับและ 5 ' - สูงสุดองค์ประกอบในยูแคริโอต . เหล่านี้บริเวณ S ยังสามารถรวมถึง Enhancer ค็อคผู้ควบคุมธาตุ รวมทั้งแปลสัญญาณ และ ผู้นำลำดับสำหรับเป้าหมายโพลีเปปไทด์พื้นเมืองช่องเฉพาะของเซลล์โฮสต์ 00126
[ 3 ] นอกจากนี้ ไม่ใช่นะครับ ลำดับอาจประกอบด้วยองค์ประกอบด้านการมีส่วนร่วม M ลอง ,