2.3. Feed preparation for radioimmu

2.3. Feed preparation for radioimmunoassay (RIA)
For extraction and purification of E2 in the feed, 1g of each diet was
homogenized in 10 mL 0.01 M phosphate buffered saline (PBS, 0.01 M
sodium phosphate, 0.01 M sodium chloride, and 0.01% sodium azide).
Solutions were extracted twice with diethyl ether (Sigma,) and
evaporated in awater bath at 40 °C, followed by drying under a stream
of inert nitrogen. Dried extracts were reconstituted in 80% methanol
followed by 2 volumes of hexane (Sigma). Extracts were centrifuged
and the hexane supernatant removed. The hexane wash was repeated
and aqueous layer was evaporated under vacuum centrifugation
(Jouan, Winchester, VA, USA) at 30 °C. Dried extracts were reconstituted
in 1 mL 20% methanol in 0.1% trifluoroacetic acid (TFA,
Sigma). Sep-Pak C18 light cartridge (Waters Corporation, Milford, MA,
USA) was preconditioned with 2 mL 100% methanol and washed with
2 mL 0.1% TFA. Reconstituted samples were added, followed by
washing with 1 mL 20% methanol then 1 mL 40% methanol. Samples
were eluted with 1 mL 70% methanol then dried under vacuum
centrifugation. Extraction efficiency, determined by spiking feed with
a known amount of 3H-E2,was equivalent in all groups and was 31.3±
0.95% (n=30).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.3. อาหารเตรียมสำหรับ radioimmunoassay (เรีย)1 กรัมของอาหารแต่ละถูกสกัดและทำให้บริสุทธิ์ของ E2 ในตัวดึงข้อมูลhomogenized เป็นกลุ่มใน 10 mL 0.01 M ฟอสเฟต buffered น้ำเกลือ (PBS, 0.01 Mโซเดียมฟอสเฟต โซเดียมคลอไรด์ 0.01 M ก 0.01% โซเดียม azide)โซลูชั่นถูกสกัด ด้วยอีเทอร์ diethyl (ซิก,) สองครั้ง และหายไปในน้ำ awater ที่ 40 ° C ตาม ด้วยการอบแห้งภายใต้กระแสของไนโตรเจน inert สารสกัดแห้งถูก reconstituted ในเมทานอล 80%ตามวอลุ่ม 2 ของเฮกเซน (ซิกมา) มี centrifuged สารสกัดจากและเฮกเซน supernatant ออก ล้างโพลีถูกทำซ้ำและชั้นสเอาท์หายไปภายใต้สุญญากาศ centrifugation(Jouan วินเชสเตอร์ VA สหรัฐอเมริกา) ที่ 30 องศาเซลเซียส สารสกัดแห้งถูก reconstitutedในเมทานอล 20% 1 mL ใน 0.1% กรด trifluoroacetic (TFAซิก) ตลับไฟปาก Sep C18 (บริษัทน้ำ ลฟอร์ด MAสหรัฐอเมริกา) preconditioned กับเมทานอล 100% 2 mL และล้างด้วย0.1 2 mL TFA ตัวอย่าง reconstituted เพิ่ม ตามด้วยซักผ้า ด้วยเมทานอล 20% 1 mL แล้ว 1 mL 40% เมทานอล ตัวอย่างมี eluted มี 1 mL 70% เมทานอลอบแห้งภายใต้สุญญากาศcentrifugation สกัดประสิทธิภาพ ตาม spiking อาหารด้วยจำนวน 3H-E2 รู้จักเทียบเท่าในกลุ่มทั้งหมด และถูก 31.3±0.95% (n = 30)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3 ฟีดเตรียมการสำหรับ radioimmunoassay (RIA)
สำหรับการสกัดและการทำให้บริสุทธิ์ของ E2 ในอาหาร, 1g ของแต่ละอาหารถูก
หดหายใน 10 มล 0.01 M ฟอสเฟตน้ำเกลือบัฟเฟอร์ (พีบีเอส, 0.01 M
โซเดียมฟอสเฟต, 0.01 M โซเดียมคลอไรด์และโซเดียมเอไซด์ 0.01%) .
โซลูชั่นมาสกัดเป็นครั้งที่สองกับอีเทอร์ (Sigma) และ
ระเหยในอ่าง Awater ที่ 40 ° C ตามด้วยการอบแห้งภายใต้กระแส
ของไนโตรเจนเฉื่อย สารสกัดแห้งถูกสร้างขึ้นในเมทานอล 80%
ตามมาด้วย 2 เล่มของเฮกเซน (Sigma) สารสกัดถูกปั่น
และสารละลายเฮกเซนออก ล้างเฮกเซนซ้ำ
และชั้นน้ำที่ถูกระเหยภายใต้การหมุนเหวี่ยงสูญญากาศ
(Jouan วินเชสเตอร์, VA, USA) ที่ 30 ° C สารสกัดแห้งถูกสร้างขึ้น
ใน 1 มิลลิลิตรเมทานอล 20% 0.1% กรด Trifluoroacetic (TFA,
Sigma) ก.ย. ปาก C18 ตลับแสง (วอเตอร์คอร์ปอเรชั่นฟอร์ด, MA,
USA) ได้รับการ preconditioned มี 2 มิลลิลิตรเมทานอล 100% และล้างด้วย
2 มิลลิลิตร 0.1% TFA ตัวอย่างสร้างถูกเพิ่มตามด้วย
การล้างด้วย 1 มิลลิลิตรเมทานอล 20% แล้วเมทานอล 1 มิลลิลิตร 40% ตัวอย่าง
ถูกชะด้วย 1 มิลลิลิตรเมทานอล 70% แห้งแล้วภายใต้สูญญากาศ
การหมุนเหวี่ยง ประสิทธิภาพการสกัดกำหนดโดย spiking ฟีดที่มี
จำนวนเงินที่รู้จักกันดีของ 3H-E2 เป็นเทียบเท่าในทุกกลุ่มและเป็น 31.3 ±
0.95% (n = 30)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.3 การเตรียมอาหารสำหรับ radioimmunoassay ( RIA )
สำหรับการสกัดและการทำให้บริสุทธิ์ของ E2 ในอาหาร , 1G ของแต่ละอาหารที่ถูกบดใน 0.01 M
10 มล. เกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ( PBS 0.01 M
โซเดียมฟอสเฟต 0.01 M โซเดียมคลอไรด์และโซเดียม 0.01 % ไซด์ )
2 โซลูชั่นถูกสกัดด้วยอีเทอร์ ( ซิกม่า )
ระเหยในนํ้า awater ที่ 40 ° C ตามด้วยการอบแห้งภายใต้กระแส
ไนโตรเจนเป็นก๊าซเฉื่อย สารสกัดแห้งถูกสร้างใน 80% เมทานอล
ตามด้วย 2 เล่มของเฮกเซน ( Sigma ) สารสกัดจากถูกไฟฟ้า
และเฮกเซนที่นำออก การล้างฤทธิ์กัน

และชั้นน้ำระเหยภายใต้สุญญากาศ ( 3 jouan , วินเชสเตอร์ , VA , USA ) ที่ 30 องศา อบแห้ง สารสกัดจากธรรมชาติ ใน 1
1 มิลลิลิตร 20 % เมทานอลใน 0.1% กรดไตรฟลูออโรอะซิติก ( กรดไขมัน
, Sigma )ก.ย. ปาก c18 ตลับ ( น้ำไฟ บริษัท มิลฟอร์ด , MA ,
สหรัฐอเมริกา ) คือ preconditioned 2 ml 100 % เมทานอลและล้างด้วย
2 + 0.1% ในระดับ . สร้างจำนวนเพิ่มตาม
ล้างด้วยเมทานอล 20% 1 มิลลิลิตร 1 ml 40% เมทานอล มีตัวอย่างตัวอย่าง
1 เลี้ยง 70 % เมทานอลแห้งภายใต้สูญญากาศ ดังนี้

การสกัด โดยกำหนดให้อาหารที่มีแอลกอฮอล์
รู้จักจำนวน 3h-e2 , เทียบเท่าในกลุ่มคือ 31.3 ±
0.95 % ( n = 30 )