was harvested at 10,000 rpm for 10

was harvested at 10,000 rpm for 10 min and resuspended in 3 ml of lysis buffer (50 mM Tris, 7.4 pH, 150 mM NaCl, 0.1% tritonX-100,
1% lysozyme, 1 mM PMSF, 5 mM DTT, 2% glycerol) and incubated at 30 C for 15 min. It was then sonicated using Sonicator Adva (Lark Innovative Fine Teknowledge, Chennai, India) with 25% amplitude for 10 sec ON and 15 sec OFF cycle on ice for a total of
7 min. Cell lysate was centrifuged at 10,000 rpm for 10 min. The pellet obtained was solubilized in 50 mM sodium carbonate buffer (pH 10.2) containing 10 mM DTT. The un-solubilized proteins were removed by centrifugation at 10,000 rpm for 10 min at 4 C. Next
1 binding buffer (4 M NaCl, 160 mM Tris-HCl, 40 mM imidazole, pH 7.9) was added to the supernatant. His Bind Column was equi- librated with 1 binding buffer and the solubilized protein was loaded on it. The entire volume was allowed to flow through col-
umn with a flow rate of 100 ll/min. The column was washed with
1 Wash Buffer (4 M NaCl, 480 mM imidazole, 160 mM Tris-HCl, pH 7.9). Finally, protein was eluted with 1 Elution buffer (4 M imidazole, 2 M NaCl, 80 mM Tris-HCl, pH 7.9). The purified protein was analyzed by SDS PAGE (Laemmli, 1970) and stored at 20 C for further use

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เก็บเกี่ยวที่ 10,000 rpm 10 นาที และ resuspended ใน 3 ml lysis บัฟเฟอร์ (50 มม.ทริสเรทติ้ง pH 7.4, 150 มม. NaCl, 0.1% tritonX-1001% lysozyme, 1 มม. PMSF, 5 มม. DTT กลีเซอรอล 2%) และรับการกก 30 c เป็นเวลา 15 นาที แล้วมันถูก sonicated ด้วย Adva Sonicator (Lark นวัตกรรม Teknowledge ดี เจนไน อินเดีย) คลื่น 25% ใน 10 วินาทีและ 15 วินาทีปิดวงจรบนน้ำแข็งรวม7 นาทีเซลล์ lysate ของถูกจากที่ 10,000 rpm 10 นาที เม็ดได้ถูก solubilized ใน 50 มม.โซเดียมคาร์บอเนตบัฟเฟอร์ (pH 10.2) ที่ประกอบด้วย 10 มม. DTT โปรตีน solubilized ไม่ถูกเอาออก โดยการหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 rpm 10 นาทีที่ 4 c ถัดไปsupernatant ที่ถูกผูก 1 บัฟเฟอร์ (pH 7.9, 4 M NaCl, 160 มม.ทริสเรทติ้ง HCl อิมิดาโซล 40 mM) คอลัมน์ของเขาผูกกับบัฟเฟอร์ 1 ผูก librated equi- และโปรตีน solubilized ถูกโหลดไว้ ปริมาณที่ได้รับอนุญาตให้ไหลผ่านคอลัมน์-umn ด้วยอัตราการไหล 100 ll/นาที คอลัมน์ถูกล้างด้วย1 ล้างบัฟเฟอร์ (4 M NaCl อิมิดาโซล 480 mM, 160 มม.ทริสเรทติ้ง HCl, pH 7.9) ในที่สุด โปรตีนถูก eluted กับบัฟเฟอร์ชะ 1 (ม. 4 อิมิดาโซล 2 M NaCl, 80 มม.ทริสเรทติ้ง HCl, pH 7.9) โปรตีนบริสุทธิ์ถูกวิเคราะห์ โดย SDS หน้า (Laemmli, 1970) และเก็บที่ 20 C สำหรับใช้เพิ่มเติม

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เก็บเกี่ยวที่ 10,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10 นาทีและ resuspended ใน 3 มลของบัฟเฟอร์สลาย (50 mM Tris 7.4 ค่า pH, 150 มิลลิเมตรโซเดียมคลอไรด์, 0.1% tritonX-100,
1% lysozyme 1 มิ PMSF 5 มิลลิ DTT, 2% กลีเซอรอล) และบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 15 นาที มันก็ sonicated ใช้ Sonicator Adva (Lark นวัตกรรมดี Teknowledge เชนไนอินเดีย) ที่มีความกว้าง 25% เป็นเวลา 10 วินาที ON และ 15 วินาทีปิดวงจรบนน้ำแข็งรวมเป็น
7 นาที lysate เซลล์หมุนเหวี่ยงที่ 10,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10 นาที เม็ดที่ได้ถูกละลายในขนาด 50 มมบัฟเฟอร์โซเดียมคาร์บอเนต (pH 10.2) ที่มีขนาด 10 MM DTT โปรตีนยกเลิกการละลายถูกถอดออกโดยการหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียสถัดไป
1 ผูกพันบัฟเฟอร์ (4 M NaCl 160 mM Tris-HCl, 40 มิลลิเมตร imidazole ค่า pH 7.9) ถูกบันทึกอยู่ในสารละลาย คอลัมน์ของเขาถูกผูก librated equi- 1 บัฟเฟอร์ผูกพันและโปรตีนที่ละลายถูกโหลดกับมัน ปริมาณทั้งหมดได้รับอนุญาตให้ไหลผ่านจะเก็บรวบรวม
UMN มีอัตราการไหล 100 LL / นาที คอลัมน์ถูกล้างด้วย
1 ล้างบัฟเฟอร์ (4 M NaCl 480 มิลลิ imidazole 160 มิลลิ Tris-HCl ค่า pH 7.9) สุดท้ายโปรตีนชะ 1 Elution บัฟเฟอร์ (4 M imidazole 2 M NaCl 80 มิลลิ Tris-HCl ค่า pH 7.9) โปรตีนบริสุทธิ์ได้รับการวิเคราะห์โดยวิธี SDS PAGE (Laemmli, 1970) และเก็บไว้ที่ 20 องศาเซลเซียสเป็นเวลาใช้งานต่อไป

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เก็บเกี่ยวใน 10 , 000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10 นาที และ resuspended 3 มิลลิลิตร ( 50 มม. โดยการสลายบัฟเฟอร์ pH 7.4 mM NaCl , 150 , tritonx-100 0.1 % ,1% ไลโซไซม์ PMSF 1 mm , 20 , 5 มม. , 2% กลีเซอรอล ) และบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 15 นาที จากนั้นใช้เครื่องเขย่าแบบเสียง sonicated adva ( ลาร์คนวัตกรรมดี teknowledge , เชนไน , อินเดีย ) กับ 25% ของ 10 วินาที และ 15 วินาที ปิดรอบบนน้ำแข็งสำหรับทั้งหมด7 นาที เซลล์ lysate คือระดับที่ 10 , 000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10 นาที เม็ดได้ถูกสร้างใน 50 มิลลิเมตรโซเดียม คาร์บอเนตบัฟเฟอร์ pH 10.2 ) ที่มีส่วน 10 มิลลิเมตร สหประชาชาติซึ่งโปรตีนถูกเอาออกโดยการเหวี่ยงแยกที่ 10 , 000 รอบต่อนาที เป็นเวลา 10 นาทีที่ 4 C ต่อไป1 กันชนผูกพัน ( 4 M NaCl , 160 มม. หรือ HCl 40 มม. อิมิดาโซล pH 7.9 ) เพิ่มเพื่อนำ . เขาผูกคอลัมน์เท่ากัน librated 1 ผูก บัฟเฟอร์ และสารละลายโปรตีนถูกโหลดบน ไดรฟ์ข้อมูลทั้งหมดได้รับอนุญาตให้ไหลผ่านคอลัมน์ -อืม ด้วยอัตราการไหล 100 จะ / นาทีล้างด้วยคอลัมน์1 ล้างบัฟเฟอร์ ( 4 M NaCl 480 มิลลิเมตรอิมิดาโซล 160 มม. โดยกรดไฮโดรคลอริก pH 7.9 ) ในที่สุด โปรตีนตัวอย่าง 1 ( บัฟเฟอร์ ( 4 M อิมิดาโซล 2 M NaCl , 80 มม. โดยกรดไฮโดรคลอริก pH 7.9 ) โปรตีนบริสุทธิ์โดยใช้ SDS หน้า ( laemmli , 1970 ) และเก็บรักษาที่อุณหภูมิ 20 C เพื่อใช้ต่อไป