Determination of endogenous levels

Determination of endogenous levels of abscisic acid (ABA)
Cucumber plants were immediately frozen using liquid N and
stored at
−80 ◦C before use. Samples were extracted three times
using 80% methanol at 4 ◦C overnight. Methanol was combined
and evaporated in vacuo to get an aqueous residue. The aqueous
solution with deuterium-labeled ABA (d6-ABA) as an internal standard
was adjusted to pH 7 with 1 N NaOH and then partitioned
against ethyl acetate three times. After partitioning, the aqueous
phase was adjusted to pH 2 with 1 N HCl and partitioned against
ethyl acetate three times. The organic phase was combined and
evaporated to dryness. Silica gel thin layer chromatography with
the solvent system of n-hexane:chloroform:ethyl acetate:acetic
acid = 20:8:20:5 (v/v/v/v) was introduced to purify the samples.
The zone corresponding to that of ABA in the chromatogram was
scraped off and extracted with ethyl acetate. After the ethyl acetate
evaporated, a partially purified sample was methylated with ethereal
diazomethane. The total amounts of endogenous ABA were
determined using gas chromatography–mass spectrometry (GCQ,
Finnigan MAT Co.). The retention times of cis, trans-ABA and trans,trans-ABA were 10.1 and 11.0 min, respectively. The areas of mass
spectrometry fragments at m/z 190 (native ABA) and 194 (d6-ABA)
were used for quantification.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ความมุ่งมั่นของ endogenous ระดับของกรดแอบไซซิก (ABA)แตงกวาพืชถูกแช่แข็งทันทีโดยใช้ของเหลว N และเก็บไว้ที่◦C −80 ก่อนใช้ ตัวอย่างที่สกัดสามครั้งใช้เมทานอล 80% ที่ 4 ◦C ค้างคืน เมทานอลถูกรวมและใน vacuo จะได้รับสารตกค้างสเอาท์ที่หายไป อควีด้วยชื่อดิวเทอเรียม ABA (d6-ABA) เป็นการภายในปรับค่า pH 7 กับ 1 N NaOH และกั้นแล้วกับเอทิล acetate สามครั้ง หลังจากแบ่งพาร์ทิชัน สเอาท์ปรับค่า pH 2 ด้วย 1 N HCl และกั้นกับระยะเอทิล acetate สามครั้ง ระยะอินทรีย์ถูกรวม และหายไปกับความแห้งกร้าน ซิลิก้าเจล chromatography บางชั้นมีระบบตัวทำละลายของเอ็น-เฮกเซน: คลอโรฟอร์ม: เอทิล acetate: อะซิติกกรด = 20:8:20:5 (v/v/v/v) ถูกนำมาใช้ต้องทำตัวอย่างนั้นโซนที่สอดคล้องกับของ ABA ใน chromatogram ได้ขูดออก และแยกกับ acetate เอทิล หลังจาก acetate เอทิลหายไป ตัวอย่างบริสุทธิ์บางส่วนถูก methylated กับอากาศธาตุdiazomethane มียอดเงินรวมของ endogenous ABAกำหนดใช้ spectrometry chromatography ก๊าซ – มวล (GCQFinnigan ลื่นจำกัด) เวลาเก็บรักษาของ cis, ABA ธุรกรรม และธุรกรรม ทรานส์ ABA 10.1 และ 11.0 นาที ตามลำดับ พื้นที่ของมวลบางส่วนของ spectrometry ที่ m/z 190 (ABA ดั้งเดิม) และ 194 (d6-ABA)ใช้สำหรับนับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การกำหนดในระดับของ abscisic acid ( ABA )
พืชแตงกวาได้ทันทีโดยใช้ของเหลวแช่แข็งและเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 80 ◦

− C ก่อนใช้ ตัวอย่างที่ 3 ครั้ง
ใช้ 80% เมทานอลที่ 4 ◦ C ในชั่วข้ามคืน เมทานอลระเหยและถูกรวม
ใน vacuo รับกากน้ำ . ในสารละลายที่มีดิวทีเรียม ติดป้าย ABA ( d6

2 ) เป็นมาตรฐานภายในคือค่า pH 7 กับ 1 N NaOH แล้วแบ่ง
กับเอทิลอะซิเตท สามครั้ง หลังจากที่พาร์ทิชัน เฟสโดยปรับพีเอชเป็น 2
1 N HCl และแบ่งกับ
เอทิลอะซิเตท สามครั้ง เฟสสารอินทรีย์รวมและ
ระเหยแห้ง . ซิลิกาเจลบางๆ โครมาโตกราฟีกับ
ระบบตัวทำละลายของบีบ : คลอโรฟอร์ม : ethyl acetate : กรดอะซิติกกรด =
20:8:20 :5 ( v / v / v / v ) แนะนำให้ตัวอย่าง .
โซนที่สอดคล้องกับที่ของ ABA ในโครมาถูก
ขูดออกและสกัดด้วยเอทิลอะซิเทต หลังจากเอทิลอะซิเตต
ระเหยบริสุทธิ์บางส่วนจำนวน methylated กับเบาหวิว
ไดอะโซมีเทน . ปริมาณรวมของโครงสร้าง ABA คือการพิจารณา–
Gas Chromatography Mass Spectrometry ( gcq
ฟินนิกัน , เสื่อ Co . )ในช่วงเวลาของ CIS , trans ABA และ trans trans ABA คือมิน 10.1 และ 11.0 ตามลำดับ พื้นที่ของเศษมวลสาร
M / z 190 ( พื้นเมืองและ ABA ) 194 ( d6
( ABA ) ใช้ปริมาณ .