Viral Infection and Immunoprecipita

Viral Infection and Immunoprecipitation of 32P-Labeled
Calreticulin from Cell Extracts. Vero 76 cells were infected
with RV M33 strain as described (5). Approximately 5 x 106
infected and uninfected cells were grown in 100-mm dishes in
Dulbecco's modified Eagle's medium, incubated for 2 hr with
[32P]orthophosphoric acid (New England Nuclear) at 0.5
mCi/ml (specific activity =8000 Ci/mmol; 1 Ci = 37 GBq) in
phosphate-free medium. Cells were lysed with NET buffer
(10 mM Tris-HCl, pH 7.4/150 mM NaCl/0.1% Triton X-100)
containing phosphatase inhibitors (1 mM sodium orthovanadate/
G.1 AM okadaic acid), in addition to protease inhibitors
[25 AM p-nitrophenyl p'-guanidinobenzoate/leupeptin (10
,ug/ml)]. Preparation of cytolysate and immunoprecipitation
of calreticulin was performed as described (7).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การติดเชื้อไวรัสและ immunoprecipitation ของ calreticulin 32P ติดฉลาก
จากสารสกัดจากเซลล์ vero 76 เซลล์มีการติดเชื้อที่มีสายพันธุ์
M33 RV ตามที่อธิบายไว้ (5) ประมาณ 5 x 106
เซลล์ที่ติดเชื้อและไม่ติดเชื้อได้รับการปลูกในจาน 100 มม. ใน
กลางอินทรีแก้ไข Dulbecco ของการบ่มเป็นเวลา 2 ชั่วโมงด้วย
[32P] กรด orthophosphoric (นิวเคลียร์อังกฤษใหม่) ที่ 0.5
mci / ml (กิจกรรมที่เฉพาะเจาะจง = 8000 CI / มิลลิโมล;1 CI = 37 GBq) ใน
กลางฟอสเฟตฟรี เซลล์ถูก lysed ด้วยตาข่ายบัฟเฟอร์
(10 มิลลิเมตร tris-hcl, ph 7.4/150 มม. nacl/0.1% ไทรทัน x-100)
ที่มีสารยับยั้งการ phosphatase (1 มม. โซเดียม orthovanadate /
g.1 am กร​​ด okadaic) นอกเหนือไปจาก น้ำย่อยโปรตีน
[25 am-p Nitrophenyl p'-guanidinobenzoate / leupeptin (10
, ไมโครกรัม / มล. )] การเตรียมความพร้อมของ cytolysate และ immunoprecipitation
ของ calreticulin ได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ (7)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ติดเชื้อไวรัสและ Immunoprecipitation ของป้าย 32P
Calreticulin จากเซลล์สารสกัดจาก มีการติดเชื้อเซลล์ Vero 76
กับ RV M33 ต้องใช้อธิบาย (5) ประมาณ 5 x 106
ติดเชื้อ และเซลล์เชื้อเติบโตในอาหาร 100 mm
ของดุลเบกโกแก้ไขอินทรีของกลาง incubated สำหรับ 2 ชั่วโมงด้วย
[32P] orthophosphoric กรด (นิวอิงแลนด์นิวเคลียร์) ที่ 0.5
mCi/ml (กิจกรรม = 8000 Ci/mmol 1 Ci = 37 GBq) ใน
สื่อฟรีฟอสเฟต เซลล์ถูก lysed กับบัฟเฟอร์สุทธิ
(10 มม.ทริสเรทติ้ง HCl ค่า pH 7.4/150 มม. NaCl/0.1% ไตรตั้น X-100)
ประกอบด้วยฟอสฟาเตส inhibitors (1 mM โซเดียม orthovanadate/
G.1 AM okadaic กรด), นอกจาก inhibitors รติเอส
[25 AM p nitrophenyl p'-guanidinobenzoate/leupeptin (10
, ยู จี/ml)] การเตรียมการของ cytolysate และ immunoprecipitation
ของ calreticulin ถูกทำอธิบายไว้ (7)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การติดเชื้อเป็นไวรัสและ immunoprecipitation ของ 32 P - มีข้อความ
calreticulin จากเซลล์สารสกัดจากสาหร่าย. 76 เซลล์ Vero Beach - Oceanside มีเวิร์มติดความเมื่อยล้า
พร้อมด้วยรถ RV ม. 33 ที่ระบุไว้( 5 ) ประมาณ 5 x 106
ผู้ติดเชื้อและ uninfected เซลล์ได้เติบโตใน 100 มม.อาหารใน
dulbecco แก้ไขของนกอินทรีของขนาดกลาง, incubated สำหรับ 2 ชั่วโมงพร้อมด้วย
][ 32 P orthophosphoric กรด( New England นิวเคลียร์)ที่ 0.5
MCI / ML (เฉพาะกิจกรรม= 8000 CI /มิลลิโมล;1 CI = 37 gbq )ในขนาดกลาง
ฟอสเฟต - แบบไม่เสียค่าบริการ เซลล์เป็น lysed พร้อมด้วยสุทธิบัฟเฟอร์
( 10 มม.ผลิตไฟฟ้าราชบุรี - HCL /, pH 4.7/150 มม. NaCl / 0.1% Triton X - 100 )
ประกอบด้วย phosphatase ผลลัพธ์โรคหลอดเลือดสมองแตก( 1 มม.( orthovanadate /
. G . 1 โมงเช้า okadaic กรด),รวมถึง protease ผลลัพธ์โรคหลอดเลือดสมองแตก
[ 25 โมงเช้า P - nitrophenyl P ' - guanidinobenzoate / leupeptin ( 10
, UG / ML )] การเตรียมการของ cytolysate และ immunoprecipitation
ตามมาตรฐานของ calreticulin ได้ดำเนินการตามที่ได้อธิบายไว้( 7 )