EPS synthesis was preliminarily det

EPS synthesis was preliminarily determined in triplicate by growing cell colonies on MRS-sucrose agar plates containing modified MRS medium with 50 g/l sucrose. Cell suspension (OD600 = 0.3) was prepared in M17 broth by growing the isolates for 24 h at 30 °C. Cells from 0.5ml of culture were harvested by centrifugation (3,260 g, 5 min), washed with 1 ml of sterile water and resuspended in 0.2 ml of sterile water. Inoculation was performed by spotting 2 ll of bacterial suspension (about 5 9 107 bacteria, 10 spots/plate) on MRS (which contains glucose) and MRS-sucrose agar media.After incubation at 30 °C for 24–48 h, the isolates which produced slimy colonies were recorded as capable of producing EPS and classified according to visual appear- ance (compact, creamy or liquid slime). The diameter of the zone of the bacterial growth was also measured [31].LAB were inoculated on Ruthenium Red Milk agar plate and incubated at 30 °C for 48 h. The isolates which pro- duced white coloured colonies were recorded as ropy [32].For EPS yield determination, all isolates were grown in MRS broth medium containing 5 % sucrose. After 24 h of incubation at 37 °C, cultures were centrifuged at 8,000 g for 10 min to remove cells, 3 volumes of cold anhydrous ethanol was added to 1 volume of culture supernatants and the mixtures were stored overnight at 4 °C. After ethanol precipitation and centrifugation, precipitates were resus- pended in distilled water to the original volume [33]. Total amount of EPS was determined as the total carbohydrate content of the precipitates by the phenol–sulphuric acid method using glucose as standard [34]. A (1 ml) aliquot

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การสังเคราะห์ EPS ถูกกำหนดหาเบื้องต้นเป็นสามเท่าโดยการปลูกโคโลนีของเซลล์บนเพลตวุ้น MRS-ซูโครสที่มีอาหารเลี้ยงเชื้อ MRS ดัดแปลงด้วยซูโครส 50 กรัม/ลิตร สารแขวนลอยเซลล์ (OD600 = 0.3) เตรียมในน้ำซุป M17 โดยการปลูกเชื้อที่แยกได้เป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่ 30 °C เก็บเกี่ยวเซลล์จากการเพาะเลี้ยง 0.5 มิลลิลิตรโดยการปั่นเหวี่ยง (3,260 กรัม 5 นาที) ล้างด้วยน้ำปลอดเชื้อ 1 มิลลิลิตร และแขวนลอยอีกครั้งในน้ำปลอดเชื้อ 0.2 มิลลิลิตร การฉีดวัคซีนดำเนินการโดยการตรวจพบสารแขวนลอยของแบคทีเรีย 2 ll (แบคทีเรียประมาณ 5 9 107 ตัว 10 จุด/จาน) บน MRS (ซึ่งประกอบด้วยกลูโคส) และสื่อวุ้น MRS-ซูโครส หลังจากการฟักตัวที่อุณหภูมิ 30 °C เป็นเวลา 24–48 ชั่วโมง ไอโซเลตที่สร้างโคโลนีที่เป็นเมือกจะถูกบันทึกว่าสามารถสร้าง EPS และจำแนกตามลักษณะที่มองเห็นได้ (เมือกขนาดกะทัดรัด เนื้อครีม หรือของเหลว) วัดเส้นผ่านศูนย์กลางของโซนการเจริญเติบโตของแบคทีเรียด้วย [31] LAB ได้รับการเพาะเชื้อบนจานวุ้นนมแดงรูทีเนียม และบ่มที่ 30 °C เป็นเวลา 48 ชั่วโมง ไอโซเลตที่ผลิตโคโลนีสีขาวถูกบันทึกเป็นโรปี [32] สำหรับการพิจารณาผลผลิตต่อหุ้น เชื้อทั้งหมดจะถูกปลูกในอาหารเลี้ยงเชื้อ MRS ที่มีซูโครส 5 % หลังจากการฟักตัวที่ 37 °C เป็นเวลา 24 ชั่วโมง การเพาะเลี้ยงถูกปั่นเหวี่ยงที่ 8,000 กรัมเป็นเวลา 10 นาทีเพื่อเอาเซลล์ออก, เติมเอทานอลแอนไฮดรัสเย็น 3 ปริมาตรลงในส่วนลอยเหนือตะกอนของการเพาะเลี้ยง 1 ปริมาตร และของผสมถูกเก็บไว้ข้ามคืนที่ 4 °C หลังจากการตกตะกอนและการหมุนเหวี่ยงเอทานอล การตกตะกอนจะถูกแขวนลอยในน้ำกลั่นกลับคืนสู่ปริมาตรเดิม [33] ปริมาณ EPS ทั้งหมดถูกกำหนดโดยปริมาณคาร์โบไฮเดรตทั้งหมดของตะกอนโดยวิธีกรดฟีนอล-ซัลฟิวริกโดยใช้กลูโคสเป็นมาตรฐาน [34] ส่วนลงตัว (1 มล.)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การสังเคราะห์ EPS เบื้องต้นผ่านการเพาะเลี้ยงเซลล์บนแผ่น MRS sucrose agar ที่มีสาร MRS ที่ปรับปรุงแล้วซูโครส 50 กรัมต่อลิตร การระงับเซลล์ (OD600 = 0.3) เตรียมในน้ำซุป M17 โดยการเพาะเลี้ยงสารแยกที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง เก็บเกี่ยวเซลล์จากวัฒนธรรม 0.5 มล. โดยการหมุนเหวี่ยง (3260g, 5 นาที) ล้างด้วยน้ำปลอดเชื้อ 1 มล. และแขวนหนักในน้ำปลอดเชื้อ 0.2 มล. การฉีดวัคซีนจะดำเนินการโดยการจุด 2 l ระงับแบคทีเรีย (ประมาณ 5 9 107 แบคทีเรีย, 10 จุด/แผ่น) บน MRS (กลูโคส) และ MRS ซูโครสวุ้นสื่อ
หลังจากการเพาะปลูกที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียส 24-48 ชั่วโมง สายพันธุ์ที่แยกได้ซึ่งสร้างอาณานิคมเหนียวจะถูกบันทึกว่าสามารถผลิต EPS และจัดเรียงตามลักษณะที่ปรากฏ (หนาแน่น ครีม หรือเมือกเหลว) นอกจากนี้ยังมีการวัดขนาดเส้นผ่าศูนย์กลางของพื้นที่การเจริญเติบโตของแบคทีเรีย [31]
ฉีดวัคซีน LAB บนแผ่นวุ้นนมแดงรูทีเนียมและบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 48 ชั่วโมง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การสังเคราะห์EPSได้รับการตรวจพบเบื้องต้นโดยการเพาะเลี้ยงเซลล์บนแผ่นแบนMRS-glucosaccharideที่มีพอลิเมอร์ที่มีซูโครส50กรัมต่อลิตร การระงับเซลล์( OD600 =0.3 )ถูกเตรียมไว้ในซุปm 17โดยการเพาะเลี้ยงที่อุณหภูมิ30°Cเป็นเวลา24ชั่วโมง เซลล์ถูกเก็บรวบรวมจากวัฒนธรรม0.5มิลลิลิตรโดยการหมุนเหวี่ยง( 3,260กรัม5นาที)ล้างด้วยน้ําปลอดเชื้อ1มิลลิลิตรและระงับใหม่ในน้ําปลอดเชื้อ0.2มิลลิลิตร การฉีดวัคซีนได้ดําเนินการโดยการระงับแบคทีเรีย2ll (แบคทีเรียประมาณ5,9,107ชนิด,10จุดต่อแผ่น)ในMRS (มีกลูโคส)และMRS-ซูโครส
หลังจากการเพาะเลี้ยงที่อุณหภูมิ30องศาเซลเซียสเป็นเวลา24-48ชั่วโมงการแยกของอาณานิคมของเมือกจะถูกบันทึกว่าสามารถผลิตEPSและจําแนกตามลักษณะภาพ(หนาแน่นไขมันหรือของเหลว) เส้นผ่าศูนย์กลางของพื้นที่การเจริญเติบโตของแบคทีเรียได้รับการวัด[ 31 ]
การฉีดวัคซีนLABบนแผ่นวัวสีแดงและเลี้ยงที่อุณหภูมิ30องศาเซลเซียสเป็นเวลา48ชั่วโมง การแยกที่สร้างอาณานิคมสีขาวถูกบันทึกไว้อย่างหนืด[ 32 ]
เพื่อวัดผลผลิตEPSสายพันธุ์ที่แยกได้ทั้งหมดเติบโตขึ้นในอาหารที่มีซูโครส5 % หลังจากการเพาะเลี้ยงที่อุณหภูมิ37องศาเซลเซียสเป็นเวลา24ชั่วโมงวัฒนธรรมถูกหมุนเหวี่ยงเป็นเวลา8,000กรัมเป็นเวลา10นาทีเพื่อลบเซลล์เอทานอลเย็นและไม่มีน้ํา3ปริมาณถูกเพิ่มลงในสารละลายบนพื้นผิว1ปริมาณและส่วนผสมถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ4องศาเซลเซียสในชั่วข้ามคืน หลังจากการตกตะกอนของเอทานอลและแรงเหวี่ยงตะกอนจะถูกระงับใหม่ในน้ํากลั่นไปยังปริมาณเดิม[ 33 ] EPSทั้งหมดถูกกําหนดโดยวิธีฟีนอล-กรดซัลฟิวริกโดยใช้กลูโคสเป็นมาตรฐาน[ 34 ]เป็นปริมาณคาร์โบไฮเดรตทั้งหมดของตะกอน สําเนา( 1มิลลิลิตร)ของตัวอย่างที่เท่ากัน