In vitro Production of Extracellula

In vitro Production of Extracellular Matrix and Scanning Electron Microscopy To observe the production of extracellular material, P. s. pv. aesculi PD4818 and its pMP4655 harbouring derivative were cultured at 20uC in either LB or minimal medium containing 20 mM NaCl, 20 mM phosphate buffer, 10 mM (NH4)2 SO4, 5 mM MgSO4, 10 mM fructose and 10 mM mannitol (pH 6.1) [50,51]. After 2–3 days, cultures were observed by fluorescence microscopy as described above or prepared for scanning electron microscopy by fixing 1 mL samples with 3% v/v glutaraldehyde
dissolved in the appropriate medium. Droplets of the sample were brought on Poly-L-lysine hydrobromide (Sigma) coated, circular cover slips (Menzel). After rinsing with water, the samples were dehydrated in series of acetone solutions and subsequently critical point dried with carbon dioxide using a BalTec CPD 030. Samples were sputter coated with 5 nm platinum in a dedicated preparation chamber (CT 1500 HF, Oxford Instruments) and analysed with a JEOL 6300F field emission scanning electron microscope. Images were digitally recorded using an Orion 6 PCI interface (Eli SPRL) and processed with Adobe Photoshop 8 CS.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ในหลอดทดลองการผลิตของสารเคลือบและการสแกนชาวดัตช์เพื่อสังเกตการผลิตของสารวัสดุ P. ปา pv อนุพันธ์ของ harbouring pMP4655 และ aesculi PD4818 ถูกล้างที่ 20uC ปอนด์หรือน้อยที่สุดกลางที่ประกอบด้วย 20 มม. NaCl บัฟเฟอร์ฟอสเฟต 20 มม. 10 มม. (NH4) 2 SO4, MgSO4 5 มม. 10 มม.ฟรักโทส และ mannitol 10 มม. (pH 6.1) [50,51] หลังจาก 2-3 วัน วัฒนธรรมที่สังเกต ด้วยกล้องจุลทรรศน์เรืองแสงตามที่อธิบายไว้ข้างต้น หรือเตรียมไว้สำหรับการสแกนชาวดัตช์โดยแก้ตัวอย่าง 1 มิลลิลิตร 3% v/v glutaraldehydeละลายในตัวกลางที่เหมาะสม หยดตัวอย่างถูกนำมาจากโพลี-L-ไลซีน hydrobromide (Sigma) สลิปกเคลือบ วงกลม (Menzel) หลังจากล้างด้วยน้ำ ตัวอย่างถูกอบแห้งในชุดของโซลูชั่นของอะซีโตนและจุดวิกฤติที่แห้ง ด้วยก๊าซคาร์บอนไดออกไซด์ที่ใช้เป็น BalTec CPD 030 ตัวอย่างถูก sputter เคลือบ ด้วย 5 nm แพลทินัมในห้องเตรียมเฉพาะ (CT 1500 HF เครื่องอ๊อกซฟอร์ด) และวิเคราะห์กับ JEOL 6300F การปล่อยกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องกราด มีบันทึกภาพแบบดิจิทัลโดยใช้อินเทอร์เฟซ Orion 6 PCI (Eli SPRL) และประมวลผล ด้วย Adobe Photoshop 8 CS

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ในการผลิตหลอดทดลองของเมทริกซ์และกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนในการสังเกตการผลิตวัสดุสารพีเอ PV aesculi PD4818 และ pMP4655 มันเยิ้มอนุพันธ์ได้รับการเพาะเลี้ยงที่ 20uC ทั้งใน LB หรือขนาดกลางที่น้อยที่สุดที่มี 20 มิลลิเมตรโซเดียมคลอไรด์, 20 มิลลิเมตรฟอสเฟตบัฟเฟอร์ 10 มิลลิเมตร (NH4) 2 SO4 5 มิลลิ MgSO4 10 ฟรักโทสมมขนาด 10 MM แมนนิทอล (pH 6.1) [50,51] หลังจาก 2-3 วันวัฒนธรรมถูกตั้งข้อสังเกตโดยใช้กล้องจุลทรรศน์เรืองแสงตามที่อธิบายไว้ข้างต้นหรือเตรียมไว้สำหรับกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนโดยการแก้ไข 1 ตัวอย่างมิลลิลิตร 3% v / V glutaraldehyde
ละลายในสื่อที่เหมาะสม หยดของกลุ่มตัวอย่างที่ถูกนำขึ้นมาบนโพลี-L-ไลซีน hydrobromide (ซิกม่า) เคลือบปกใบกลม (Menzel) หลังจากล้างด้วยน้ำตัวอย่างมีการคายน้ำในซีรีส์ของการแก้ปัญหาอะซีโตนและจุดสำคัญต่อมาอบด้วยก๊าซคาร์บอนไดออกไซด์โดยใช้ CPD BalTec 030. ตัวอย่างถูกเคลือบปะทุ 5 นาโนเมตรลาตินั่มในห้องเตรียมทุ่มเท (CT 1500 HF, ฟอร์ด Instruments) และ วิเคราะห์ด้วย JEOL 6300F ข้อมูลการปล่อยก๊าซกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบ ภาพที่ถูกบันทึกไว้ในระบบดิจิตอลโดยใช้อินเตอร์เฟซ PCI Orion 6 (อีไล SPRL) และการประมวลผลด้วยโปรแกรม Adobe Photoshop CS 8

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ในการผลิตหลอดทดลองของ extracellular เมทริกซ์ และกล้องจุลทรรศน์อิเลคตรอนแบบส่องกราด เพื่อดูการผลิตและวัสดุ , PS PV . aesculi pd4818 และ pmp4655 กับอนุพันธ์เพาะเลี้ยงที่ 20uc ทั้งปอนด์ หรืออาหารที่มีเกลือน้อย 20 มม. , 20 มม. ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ 10 มม. ( NH4 ) 2 ปา MgSO4 ใ 5 มม. , 10 มม. และ 10 มม. 4 , 5 ( pH 6.1 ) [ 50,51 ] หลังจาก 2 - 3 วัน วัฒนธรรมที่พบด้วยกล้องจุลทรรศน์เรืองแสงตามที่อธิบายไว้ข้างต้น หรือเตรียมไว้สำหรับกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องกราด โดยการแก้ไข 1 ml จำนวน 3 % v / v กลูตารัลดีไฮด์ละลายอยู่ในระดับที่เหมาะสม หยดตัวอย่างถูกนำมาจากใน poly-l-lysine ( Sigma ) เคลือบ , ปกวงกลมหลุด ( Menzel ) หลังจากล้างด้วยน้ำจำนวนน้ำในชุด สำหรับโซลูชั่นและต่อมาจุดวิกฤติแห้งกับก๊าซคาร์บอนไดออกไซด์โดยใช้ baltec CPD 030 . จำนวนมิดหมีเคลือบ 5 nm แพลทินัมในโดยเฉพาะการเตรียมห้อง ( CT , HF , Oxford เครื่องมือ ) และวิเคราะห์กับจอล 6300f สนามจากกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน บันทึกภาพแบบดิจิทัลโดยใช้อินเตอร์เฟซ PCI ธรรมดา 6 ( อีไล sprl ) และประมวลผลด้วยโปรแกรม Adobe Photoshop 8 cs