The genomic DNA of the isolates was

The genomic DNA of the isolates was extracted using the SDS method [24]. To characterize strains, the 16S rRNA-encoding gene unit was amplified by the polymerase chain reaction (PCR) using universal primers 8F and 1492R(s) [25] and [26]. The PCR reaction mixture (20 μl) had 15–30 ng of each template DNA, 0.01 μM of each primers, 200 μM of each dNTP, 2 μl of 5× Taq buffer and 3U of Taq DNA polymerase. Amplification was carried out with a preliminary denaturation step at 94 °C for 5 min followed by 35 cycles of denaturation (94 °C for 1 min), primer annealing (55 °C for 1 min) and extension (72 °C for 2 min). After 35 cycles of PCR amplification, the PCR products were screened by electrophoresis and the eluted products were subjected to Sanger's dideoxy sequencing for species identification. The similarity search for sequences was carried out using the BLAST (N) option and sequences were deposited in NCBI Genbank

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ดีเอ็นเอ genomic ของแยกถูกสกัดโดยใช้วิธี SDS [24] การกำหนดลักษณะสายพันธุ์ 16S rRNA เข้ารหัสยีนหน่วยถูกขยาย โดยพอลิเมอเรสปฏิกิริยาลูกโซ่ (PCR) โดยใช้ไพรเมอร์สากล 8F และ 1492R(s) [25] [26] และ ส่วนผสมปฏิกิริยา PCR (20 μl) มี ng 15 – 30 ของแต่ละแม่แบบดีเอ็นเอ μM ของไพรเมอร์แต่ละ 0.01, μM 200 ของ dNTP แต่ละ μl 2 5 × Taq บัฟเฟอร์และ 3U Taq DNA พอลิเมอเรส ขยายได้ดำเนินเป็นขั้นตอน denaturation เบื้องต้นที่ 94 ° C สำหรับ 5 นาทีตาม ด้วยรอบ 35 denaturation (94 องศาเซลเซียสใน 1 นาที) พื้นการอบเหนียว (55 องศาเซลเซียสใน 1 นาที) และส่วนขยาย (72 ° C สำหรับ 2 นาที) หลังจากรอบ 35 ของ PCR ขยาย ผลิตภัณฑ์ PCR ได้ฉาย โดย electrophoresis และผลิตภัณฑ์ eluted ถูกต้องของ Sanger dideoxy ลำดับสำหรับการระบุชนิด ทำการค้นหาความคล้ายคลึงกันสำหรับลำดับออกใช้ตัวระเบิด (N) และลำดับที่ฝากใน NCBI Genbank

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ดีเอ็นเอจีโนมของเชื้อที่ถูกสกัดโดยวิธี SDS [24] ลักษณะสายพันธุ์ที่ 16S rRNA เข้ารหัสหน่วยยีนถูกขยายโดยวิธี Polymerase chain reaction (PCR) โดยใช้ไพรเมอร์สากล 8F และ 1492R (s) [25] และ [26] ผสมปฏิกิริยา PCR (20 ไมโครลิตร) มี 15-30 นาโนกรัมของแต่ละดีเอ็นเอแม่แบบ 0.01 ไมครอนของไพรเมอร์แต่ละ 200 ไมครอนของแต่ละ dNTP 2 ไมโครลิตร 5 ×บัฟเฟอร์ Taq และ 3U ของดีเอ็นเอโพลิเมอร์ Taq ขยายได้ดำเนินการด้วยขั้นตอน denaturation เบื้องต้นที่ 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีตามด้วย 35 รอบของการสูญเสียสภาพธรรมชาติ (94 ° C เป็นเวลา 1 นาที) หลอมไพรเมอร์ (55 ° C เป็นเวลา 1 นาที) และการขยาย (72 ° C เป็นเวลา 2 นาที ) หลังจาก 35 รอบของการขยาย PCR ผลิตภัณฑ์ PCR ได้รับการคัดเลือกจากอิเล็กและผลิตภัณฑ์ชะถูกยัดเยียดให้ลำดับ dideoxy แซงเจอร์สำหรับการระบุสายพันธุ์ การค้นหาความคล้ายคลึงกันสำหรับลำดับได้รับการดำเนินการโดยใช้ระเบิด (N) และลำดับตัวเลือกที่ถูกฝากไว้ใน NCBI Genbank

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ดีเอ็นเอจีโนมของเชื้อถูกสกัดโดยใช้ SDS ) [ 24 ] ลักษณะสายพันธุ์ , เบส 16S rRNA ยีนหน่วยขยายการเข้ารหัสโดยปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอร์เรส ( PCR ) โดยใช้ไพรเมอร์ 8f สากลและ 1492r ( S ) [ 25 ] และ [ 26 ] การตรวจปฏิกิริยาผสม ( 20 μ L ) มี 15 – 30 นาโนแต่ละแม่แบบดีเอ็นเอ μ 0.01 M ของแต่ละชนิดของแต่ละ dntp 200 μ M ,2 μ L 5 ×ทัค บัฟเฟอร์ และ 3U ของดีเอ็นเอพอลิเมอเรสได้ดี . ( ครั้งนี้มีขั้นตอนเบื้องต้นที่ 94 ° C ( 5 นาทีตามด้วย 35 รอบ ( 94 ° C ( 1 นาที ) , ไพรเมอร์อบ 55 ° C เป็นเวลา 1 นาที ) และนามสกุล ( 72 ° C เป็นเวลา 2 นาที ) หลังจากรอบของ PCR ( 35 ,มีผลิตภัณฑ์ PCR โดยวิธีอิเล็กโทรโฟรีซีสและตัวอย่างผลิตภัณฑ์ที่ถูกต้องของ dideoxy แซงเจอร์ลำดับสำหรับจำแนกชนิดได้ การค้นหายีน คือ ความเหมือน โดยใช้ระเบิด ( N ) เลือกและลำดับฝากเงินใน ncbi ขนาด