After growth in MRS or LAPTg broth,

After growth in MRS or LAPTg broth, strains were washed 3
times with saline solution (0.85% wt/v NaCl), resuspended in this
solution at the original culture volume, and used to inoculate at 4%
(v/v) folic acid casei medium (FACM, Difco, USA) that were then
incubated without agitation at 30
C for 18 h. After growth, this
washingeresuspension procedure was repeated, and the resulting
LAB suspension was used to inoculate at 2% (v/v) the respective
fresh vitamin-free media. This last step was repeated 7 times with
the cultures showing good growth (observed by increased
turbidity); strains that did not grow in vitamin-free media were not
used in further studies. After the last incubation, 2 samples were
taken to determine the concentration of extracellular and intracellular
folates. A sample (500 mL) of LAB-containing vitamin-free
media was taken, and 500 mL of folate protecting buffer (0.1 mol/L
phosphate buffer, pH 6.8, containing 1.5% (w/v) ascorbic acid) to
prevent vitamin oxidation and degradation was added, mixed and
centrifugated for 5 min at 5000 g. The supernatant was collected
(extracellular sample) and the pellet was resuspended in 500 mL of
protecting buffer (intracellular sample). Both samples were then
boiled (100
C) for 5 min, centrifuged for 6 min at 10 000 g, and
stored at 70
C until used for vitamin determinations.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

หลังจากเติบโตในซุป MRS หรือ LAPTg สายพันธุ์ถูกซัด 3ครั้ง ด้วยเกลือ (0.85% wt/v NaCl), resuspended ในที่นี้เดิมวัฒนธรรมระดับเสียง และใช้ปลูกฝีที่ 4%(v/v) กรดโฟลิกบ้านขนาดกลาง (FACM, Difco สหรัฐอเมริกา) ที่แล้วได้รับการกกโดยไม่ปั่นป่วนที่ 30 C สำหรับ 18 h หลังจากเติบโต นี้กระบวนการ washingeresuspension ซ้ำครั้ง และการส่งผลห้องปฏิบัติการระงับใช้ฉีดยาป้องกัน 2% (v/v) ที่เกี่ยวข้องสื่อฟรีวิตามินสด ขั้นตอนนี้ซ้ำครั้ง 7 ครั้งด้วยวัฒนธรรมการแสดงการเจริญเติบโตดี (สังเกตโดยเพิ่มความขุ่น); สายพันธุ์ที่ไม่ได้มีการเติบโตในสื่อฟรีวิตามินไม่ได้ใช้ในการศึกษาต่อไป หลังจากบ่มครั้งสุดท้าย ตัวอย่างที่ 2 ถูกดำเนินการตรวจสอบความเข้มข้นของสาร และการสกัด intracellularfolates ตัวอย่าง (500 มล.) ของห้องปฏิบัติการที่ประกอบด้วยฟรีวิตามินสื่อถูกถ่าย และ 500 mL ของโฟเลตที่ป้องกันบัฟเฟอร์ (0.1 mol/Lฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 6.8 ประกอบด้วย 1.5% (w/v) กรดแอสคอร์บิค) การป้องกันการเกิดออกซิเดชันของวิตามินและย่อยสลายได้เพิ่ม ผสม และcentrifugated 5 นาทีที่ 5000 g Supernatant รวบรวม(สารตัวอย่าง) และเม็ดถูก resuspended ใน 500 มล.ป้องกันบัฟเฟอร์ (intracellular ตัวอย่าง) ตัวอย่างทั้งสองได้แล้วต้ม (100 C) เหวี่ยงสำหรับที่ 10 000 g, 6 นาที 5 นาที และเก็บไว้ที่ C 70 จนใช้หาวิตามิน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

หลังจากที่การเจริญเติบโตใน MRS หรือ LAPTg น้ำซุปสายพันธุ์ถูกล้าง 3
ครั้งด้วยน้ำเกลือ (0.85% WT / V NaCl) resuspended ในการ
แก้ปัญหาในระดับเสียงวัฒนธรรมเดิมและใช้ในการฉีดวัคซีนที่ 4%
(v / v) กรด casei โฟลิค กลาง (FACM, Difco, สหรัฐอเมริกา) ที่ถูกแล้ว
บ่มโดยไม่ต้องกวนวันที่ 30? C เป็นเวลา 18 ชั่วโมง หลังจากที่การเจริญเติบโตนี้
ขั้นตอน washingeresuspension ซ้ำและส่งผลให้เกิด
การระงับ LAB ถูกใช้ในการฉีดวัคซีนที่ 2% (v / V) ตามลำดับ
สื่อวิตามินฟรีสด ขั้นตอนสุดท้ายนี้ซ้ำ 7 ครั้งกับ
วัฒนธรรมแสดงการเจริญเติบโตที่ดี (สังเกตจากที่เพิ่มขึ้น
ความขุ่น); สายพันธุ์ที่ไม่ได้เติบโตในสื่อวิตามินฟรีไม่ได้ถูก
นำมาใช้ในการศึกษาต่อไป หลังจากการบ่มที่ผ่านมา 2 ตัวอย่างที่ถูก
นำมาใช้เพื่อตรวจสอบความเข้มข้นของสารภายในเซลล์และ
โฟเลต ตัวอย่าง (500 มิลลิลิตร) ของวิตามินฟรีห้องปฏิบัติการที่มี
สื่อถูกนำและ 500 มลโฟเลตปกป้องบัฟเฟอร์ (0.1 mol / L
ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ค่า pH 6.8 ที่มี 1.5% (w / v) วิตามินซี) เพื่อ
ป้องกันไม่ให้วิตามินออกซิเดชัน และการย่อยสลายเสริมผสมและ
centrifugated เป็นเวลา 5 นาทีที่ 5000 กรัม ใสถูกเก็บรวบรวม
(ตัวอย่าง extracellular) และเม็ดถูก resuspended ใน 500 มล
ปกป้องบัฟเฟอร์ (ตัวอย่างเซลล์) กลุ่มตัวอย่างทั้งสองถูกแล้ว
ต้ม (100? C) เป็นเวลา 5 นาที, หมุนเหวี่ยง 6 นาทีที่ 10 000 กรัมและ
เก็บไว้ที่ 70 องศาเซลเซียสจนใช้สำหรับการหาความวิตามิน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

หลังจากการ laptg คุณนายหรือซุป , ล้าง 3 สายพันธุ์ครั้งด้วยน้ำเกลือ ( 0.85 % wt / V NaCl ) , resuspended ในนี้โซลูชั่นที่หมวดวัฒนธรรมเดิม และใช้ในการฉีดวัคซีนที่ 4 %( v / v ) กรดโฟลิค casei ขนาดกลาง ( facm difco , USA ) ที่เป็นแล้วบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียส โดยไม่มีการกวน 18 ชั่วโมง หลังจากการเติบโตนี้ทำซ้ำขั้นตอน washingeresuspension และผลห้องปฏิบัติการการระงับใช้ปลูกฝีที่ 2% ( v / v ) นั้นๆวิตามินสดสื่อฟรี ขั้นตอนสุดท้ายคือ 7 ครั้งด้วยซ้ำวัฒนธรรมที่แสดงการเติบโตดี ( สังเกตได้จากการเพิ่มขึ้นความขุ่น ; สายพันธุ์ที่ไม่ได้เติบโตในวิตามินสื่อฟรีไม่ได้ที่ใช้ในการศึกษา หลังจากบ่มเพาะสุดท้าย 2 กลุ่มตัวอย่างวัดความเข้มข้นภายในเซลล์สำคัญโฟเลต . ตัวอย่าง ( 500 มล. ) ของห้องปฏิบัติการที่มีวิตามินฟรีสื่อไป และ 500 มิลลิลิตร โฟเลตป้องกันบัฟเฟอร์ ( 0.1 โมล / ลิตรฟอสเฟตบัฟเฟอร์พีเอช 6.8 ที่มี 1.5 % ( w / v ) กรดแอสคอร์บิค )ป้องกันไม่ให้เกิดออกซิเดชัน วิตามิน และการเพิ่ม , รวมcentrifugated เป็นเวลา 5 นาทีที่ 5 , 000 กรัมนำรวบรวม( ภายนอกเซลล์ตัวอย่าง ) และในการผลิต resuspended 500 มิลลิลิตรการบัฟเฟอร์ ( ชนิดตัวอย่าง ) ทั้งสองแล้วต้ม ( 100 C ) เป็นเวลา 5 นาที ระดับ 6 นาทีที่ 10 000 กรัมและที่อุณหภูมิ 70 องศาเซลเซียส จนกระทั่งใช้รวมทั้งวิตามิน