Since the cloning was done into a s

Since the cloning was done into a single restriction site, the insertion of the fragment was not orientated. The orientation (+), for which the gene is in the proper direction regarding the tipApromoter, will lead to the expression of I-SceI gene in S. ambofaciens whereas the orientation (-) will not. To determine the orientation of the insert, a PCR was carried out with a set of three primers annealing on and beside the insert (Fig 2A). The results showed that all the 49 clones analysed carried the I-SceI gene in the opposite direction of the tipA promoter (Fig 2B, orientation -). In order to put aside a genetic background issue, the same cloning assay was performed in JM101 cells, which have already been used to clone a gene encoding I-SceI under the tac promoter

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เนื่องจากการโคลนภายในไซต์เดียวจำกัด การแทรกส่วนไม่เปลี่ยนแปลง การวางแนว (+), ซึ่งยีนอยู่ในทิศทางที่เหมาะสมเกี่ยวกับ tipApromoter จะนำไปสู่ค่าของยีน-SceI ใน S. ambofaciens ในขณะที่การวางแนว (-) จะไม่ เพื่อกำหนดแนวของการแทรก PCR ถูกดำเนินการกับชุดของไพรเมอร์สามการอบเหนียว และ ข้างแทรก (ฟิก 2A) ผลพบว่า โคลน 49 ทั้งหมดที่ analysed ทำยีน-SceI ในทิศทางตรงกันข้ามของโปรโมเตอร์ทิพา (ฟิก 2B ปฐมนิเทศ-) การวางเฉยปัญหาพันธุกรรมพื้นหลัง งานวิเคราะห์ cloning เดียวในเซลล์ JM101 ซึ่งได้ถูกใช้แล้วการโคลนยีนการเข้ารหัสฉัน-SceI ภายใต้โปรโมเตอร์มาตรวัด

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ตั้งแต่โคลนได้ทำลงไปในเว็บไซต์ข้อ จำกัด เดียวแทรกของชิ้นส่วนที่ไม่ได้รับการปรับ ปฐมนิเทศ (+) ซึ่งยีนที่อยู่ในทิศทางที่ถูกต้องเกี่ยวกับการ tipApromoter ที่จะนำไปสู่​​การแสดงออกของยีน I-SCEI ในขณะที่เอส ambofaciens การวางแนวทางที่ (-) จะไม่ การตรวจสอบการวางแนวของการแทรกเป็น PCR ได้ดำเนินการกับชุดของสามหลอมไพรเมอร์บนและด้านข้างแทรก (รูปที่ 2A) ผลการศึกษาพบว่าทุก 49 โคลนวิเคราะห์ดำเนินการ I-SCEI ยีนในทิศทางที่ตรงข้ามของโปรโมเตอร์ทิพา (รูปที่ 2B ปฐมนิเทศ -) เพื่อที่จะใส่กันเป็นปัญหาพื้นหลังทางพันธุกรรมการทดสอบโคลนเดียวกันดำเนินการใน JM101 เซลล์ซึ่งได้รับการใช้ในการโคลนยีน I-SCEI ภายใต้การก่อการแทค

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เนื่องจากการกระทำในเว็บไซต์ข้อ จำกัด เดียวแทรกของชิ้นส่วนที่ไม่ได้วางแผน การปฐมนิเทศ ( ) ซึ่งยีนนั้นในทิศทางที่เหมาะสมเกี่ยวกับ tipapromoter จะนำไปสู่การแสดงออกของยีน i-scei ใน S . ambofaciens ในขณะที่ปฐมนิเทศ ( - ) จะไม่ เพื่อกำหนดทิศทางของแทรกเป็นวิธีดำเนินการกับชุดสามชนิดอ่อน และข้างๆ แทรก ( รูปที่ 2A ) พบทั้งหมด 49 คนแบก i-scei โคลนยีนในทิศทางที่ตรงข้ามของโปรโมเตอร์ ( รูปที่ 2B หรือปฐมนิเทศ , - ) เพื่อที่จะใส่กันพื้นฐานทางพันธุกรรม ( ยีนเดียวกันปัญหาในการปฏิบัติ jm101 เซลล์ซึ่งได้ใช้ในการโคลนยีน i-scei ภายใต้บริษัทผู้สนับสนุน