To measure the concentration of est

To measure the concentration of estradiol-17b (E2), 11-ketotestosterone (11-KT), and testosterone (T) in the serum of fish,
ELISA was used as described byAsahina et al. (1995)with some
modifications. Briefly, circulating blood was collected from the
caudal vein of fish using a 1-ml heparinized syringe (Terumo,
Japan) and centrifuged at 12,000 rpm for 10 min, and the serum
stored at30C until analysis. Affinity-purified goat antibody to
rabbit IgG (Jackson ImmunoResearch Lab. INC., Baltimore, MD,
USA) was diluted in 50 mM sodium carbonate buffer (pH 9.4)
and dispensed at 100lL per well into 96-well ELISA micro titer
plates (Iwaki glass Co. Ltd., Japan) followed by incubation at 4C
for two days. The plates were then washed three times with
0.85% saline, blocked with 200lL per well of 0.1% BSA in PBS overnight. Steroid hormones were extracted three times by diethyl
ether extraction method and were diluted in 0.05 M borate buffer
containing 0.5% BSA (assay buffer). Commercial purified E2, 11-KT
and T (Sigma–Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) were diluted serially from 50 to 25,600 pg/mL in assay buffer and used as
standard samples (ten standards) to establish a standard curve.
The assay was performed in a total volume of 90lL, composed of
30lL of sample, 30lL of antibody [rabbit anti-6-oxo-estradiol-6-CMO-BSA polyclonal antibody (for E2), Rabbit anti 11-oxoTestosterone-3-CMO-BSA (for 11-KT) and Rabbit anti
Testosterone-3(E)-CMO-BSA (for T)] (Cosmo Bio Co., Ltd. Tokyo,
Japan) diluted 1:100,000 in assay buffer, and 30lLofE2, 11-KT
and T labeled with HRP (Cosmo Bio Co., Ltd. Tokyo, Japan) diluted
1:250,000 in assay buffer. All samples were tested in duplicate. The
plates were incubated overnight at 4C. After the washing step,
90lL of 200 mM citrate buffer (pH 4.5) includingo-phenylenediamine (Sigma) and H2O2was added to the wells. The plate was
kept in the dark for 10–20 min at 20C for color development, followed by the addition of 30lL6NH2SO4to stop the color development. Optical density was measured at 492 nm using a micro
plate reader (MTP-300; CORONA electric Co., Ltd., Japan). The E2,
11-KT and T concentrations in the diluted serum samples were

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การวัดความเข้มข้นของ estradiol-17b (E2), 11-ketotestosterone (11-KT), และฮอร์โมนเพศชาย (T) ในซีรั่มของปลาใช้ ELISA เป็นอธิบาย byAsahina et al. (1995) กับปรับเปลี่ยน หมุนเวียนเลือดรวบรวมจากสั้น ๆ การหลอดเลือดดำ caudal ของปลาที่ใช้เป็นเข็ม heparinized 1 ml (Terumoญี่ปุ่น และ centrifuged ที่ 12000 rpm 10 นาที และซีรั่มเก็บไว้ที่ 30 C จนถึงการวิเคราะห์ แอนติบอดีแพะบริสุทธิ์ความเกี่ยวข้องกับกระต่าย IgG (inc.ห้องปฏิบัติการ ImmunoResearch Jackson บัลติมอร์ MDสหรัฐอเมริกา) ถูกทำให้เจือจางใน 50 mM โซเดียมคาร์บอเนตบัฟเฟอร์ (pH 9.4)และคำที่ 100lL ต่อดีเป็น titer ไมโคร ELISA 96-ดีแผ่น (อิวากิแก้ว จำกัด ญี่ปุ่น) ตาม ด้วยคณะทันตแพทยศาสตร์ที่ 4 Cสองวัน แผ่นถูกล้างครั้งที่สามแล้วด้วยน้ำเกลือ 0.85% ถูกบล็อค ด้วย 200lL ต่อดีบีเอสเอ 0.1% ใน PBS ค้างคืน สเตอรอยด์ฮอร์โมนถูกสกัดสามครั้ง โดย diethylวิธีสกัดอีเทอร์ และถูกผสมในบัฟเฟอร์ 0.05 M borateประกอบด้วย 0.5% บีเอสเอ (วิเคราะห์บัฟเฟอร์) ไทยพาณิชย์บริสุทธิ์ E2, 11-KTและ T (ซิก-Aldrich เคมี Co., St. Louis, MO สหรัฐอเมริกา) ถูกผสม serially จาก 50 ไป 25,600 pg/mL ในบัฟเฟอร์การวิเคราะห์ และใช้เป็นอย่างมาตรฐาน (มาตรฐานที่ 10) เพื่อสร้างเส้นโค้งมาตรฐานทำการวิเคราะห์ปริมาณรวมของ 90lL ประกอบด้วย30lL ของตัวอย่าง 30lL ของแอนติบอดี [แอนติบอดี polyclonal anti-6-oxo-estradiol-6-CMO-BSA กระต่าย (สำหรับ E2), กระต่ายกระต่ายป้องกันการป้องกัน 11-oxoTestosterone-3-CMO-บีเอสเอ (สำหรับ 11-KT)ฮอร์โมนเพศชาย-3 (E) - CMO - บีเอสเอ (ตัว T)] (โตเกียวคอสโมไบโอ Co., Ltd.1:100,000 วิเคราะห์บัฟเฟอร์ และ 30lLofE2, 11 KT ยกเว้นญี่ปุ่น)และติดป้าย HRP (คอสโมไบโอ Co., Ltd. โตเกียว ญี่ปุ่น) ผสม T1:250,000 ในบัฟเฟอร์วิเคราะห์ ทดสอบตัวอย่างทั้งหมดในซ้ำ ที่แผ่นที่ incubated ค้างคืนที่ซี 4 หลังจากขั้นตอนการซักผ้า90lL 200 mM ซิเตรตบัฟเฟอร์ (pH 4.5) includingo-phenylenediamine (ซิกมา) และ H2O2was เพิ่มเข้าไปในบ่อ จานได้เก็บในมืดสำหรับ 10-20 นาทีที่ 20 C สีพัฒนา ตาม ด้วยการเพิ่ม 30lL6NH2SO4to หยุดพัฒนาสี มีวัดความหนาแน่นออปติคอลที่ 492 nm ใช้เป็นไมโครอ่านแผ่น (MTP-300 โคโรนาไฟฟ้า Co., Ltd. ญี่ปุ่น) E211-KT และ T ความเข้มข้นในตัวอย่างซีรั่มที่แตกออก

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การวัดความเข้มข้นของ estradiol-17b (E2) 11 ketotestosterone (11-KT) และฮอร์โมนเพศชาย (T) ในซีรั่มของปลา
ELISA ถูกนำมาใช้ตามที่อธิบายไว้ byAsahina et al, (1995) กับบางส่วน
ปรับเปลี่ยน สั้น ๆ , การไหลเวียนของเลือดที่เก็บมาจาก
หลอดเลือดดำหางของปลาโดยใช้เข็มฉีดยา heparinized 1 มล. (Terumo,
ญี่ปุ่น) และหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10 นาทีและซีรั่ม
ที่เก็บไว้ที่ 30 องศาเซลเซียสจนการวิเคราะห์ แอนติบอดีแพะ Affinity บริสุทธิ์เพื่อ
IgG กระต่าย (แจ็คสัน ImmunoResearch Lab. INC. บัลติมอร์
สหรัฐอเมริกา) ถูกเจือจางใน 50 มิลลิโซเดียมคาร์บอเนตบัฟเฟอร์ (pH 9.4)
และจ่ายต่อ 100LL ที่ดีใน 96 หลุม ELISA titer ไมโคร
แผ่น (Iwaki แก้ว จำกัด ประเทศญี่ปุ่น) ตามด้วยการบ่มที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส
เป็นเวลาสองวัน แผ่นถูกล้างแล้วสามครั้งด้วย
น้ำเกลือ 0.85% ปิดกั้นด้วย 200lL ต่อกันดีของบีเอสเอ 0.1% ในพีบีเอสในชั่วข้ามคืน เตียรอยด์ฮอร์โมนสกัดสามครั้งโดย diethyl
วิธีการสกัดอีเทอร์และเจือจางใน 0.05 M บัฟเฟอร์ borate
ที่มี 0.5% BSA (บัฟเฟอร์ทดสอบ) พาณิชย์บริสุทธิ์ E2, 11-KT
และ T (Sigma-Aldrich Chemical Co. , เซนต์หลุยส์, MO, USA) ได้รับการปรับลดลำดับจาก 50 25,600 pg / มิลลิลิตรในบัฟเฟอร์ทดสอบและใช้เป็น
ตัวอย่างมาตรฐาน (สิบมาตรฐาน) เพื่อสร้าง กราฟมาตรฐาน.
การทดสอบที่ได้รับการดำเนินการในปริมาณรวมของ 90lL ประกอบด้วย
30lL ของตัวอย่าง 30lL แอนติบอดี [กระต่ายป้องกัน-6-โอเอ็กซ์โอ-estradiol-6-CMO-BSA แอนติบอดีโพลี (สำหรับ E2) กระต่ายป้องกัน 11 oxoTestosterone -3-CMO-BSA (11-KT) และกระต่ายต่อต้าน
ฮอร์โมนเพศชาย-3 (E) -CMO-BSA (สำหรับ T)] (ไบโอคอสโม จำกัด โตเกียว
ญี่ปุ่น) เจือจาง 1: 100,000 ในบัฟเฟอร์ทดสอบ, และ 30lLofE2 11-KT
และ T กำกับด้วย HRP (ไบโอคอสโม จำกัด กรุงโตเกียวประเทศญี่ปุ่น) เจือจาง
1: 250,000 ในบัฟเฟอร์ทดสอบ ตัวอย่างทั้งหมดได้รับการทดสอบในที่ซ้ำกัน
แผ่นถูกบ่มค้างคืนที่ 4 องศาเซลเซียส หลังจากขั้นตอนการซักผ้า,
90lL 200 มิลลิซิเตรทบัฟเฟอร์ (pH 4.5) includingo-Phenylenediamine (ซิกม่า) และ H2O2was เพิ่มลงในหลุม แผ่นที่ถูก
เก็บไว้ในที่มืดเป็นเวลา 10-20 นาทีที่ 20 องศาเซลเซียสสำหรับการพัฒนาสีตามด้วยนอกเหนือจาก 30lL6NH2SO4to หยุดการพัฒนาสี ความหนาแน่นของออปติคอลได้รับการวัดที่ 492 นาโนเมตรโดยใช้ไมโคร
อ่านแผ่น (MTP-300; CORONA ไฟฟ้า จำกัด ญี่ปุ่น) E2,
11-KT และความเข้มข้นของ T ในตัวอย่างซีรั่มปรับลดได้

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัดความเข้มข้นของ estradiol-17b ( E2 ) , 11 ketotestosterone ( 11-kt ) , และฮอร์โมนเพศชาย ( T ) ในซีรั่มของปลา
) ใช้อธิบาย byasahina et al . ( 1995 ) กับบาง
การปรับเปลี่ยน สั้น ๆ หมุนเวียนเลือดที่เก็บจาก
เวนหางปลา โดยใช้เข็มฉีดยา 1-ml กลุ่มบริษัท
, ญี่ปุ่น ) และระดับที่ 12 , 000 รอบต่อนาที เป็นเวลา 10 นาที และเซรั่ม
เก็บไว้ที่  30  C จนถึงการวิเคราะห์ โดยใช้แอนติบอดี IgG บริสุทธิ์แพะ

กระต่าย ( แจ็คสัน immunoresearch แล็บ อิงค์ , บัลติมอร์ , MD ,
USA ) เจือจางใน 50 มิลลิเมตรโซเดียม คาร์บอเนตบัฟเฟอร์ pH 7.5 )
และจ่ายที่ 100ll ต่อใน 96 ด้วย ELISA ไมโคร :
( อิวากิจานแก้ว จำกัด ประเทศญี่ปุ่น ) รองลงมา คือ บ่มที่ 4  C
เป็นเวลาสองวัน จานถูกล้างสามครั้งกับ
น้ำเกลือ 0.85 เปอร์เซ็นต์ ,บล็อก 200ll ต่อด้วย 0.1 % BSA ใน PBS ในชั่วข้ามคืน สเตอรอยด์ฮอร์โมนสกัด 3 ครั้ง โดยวิธีการสกัดไดเอทิลอีเธอร์
และเจือจางใน 0.05 M บอเรตบัฟเฟอร์
ที่มี 0.5% BSA ( ( บัฟเฟอร์ ) พาณิชย์และ E2 , 11-kt
T ( ซิกม่า Aldrich และเคมี . , St . Louis , MO , USA ) ลดจาก 50 เป็น 25600 pg / ml ในบัฟเฟอร์และใช้เป็น
3ตัวอย่างมาตรฐาน ( 10 มาตรฐาน ) เพื่อสร้างกราฟมาตรฐาน .
( แสดงในปริมาตรรวมของ 90ll ประกอบด้วย
30ll ของตัวอย่าง 30ll แอนติบอดี [ กระต่าย anti-6-oxo-estradiol-6-cmo-bsa ใช้แอนติบอดี ( E2 ) , กระต่ายต่อต้าน 11-oxotestosterone-3-cmo-bsa ( 11-kt ) และกระต่ายกัน
testosterone-3 ( E ) - cmo-bsa ( ที ) ] ( Cosmo Bio Co . ,
ญี่ปุ่น จำกัด โตเกียว เจือจาง 1 : 100 ) ,000 ราย บัฟเฟอร์ และ 30llofe2 11-kt
T , และป้ายชื่อ HRP ( คอสโม ไบโอ จำกัด บริษัท ญี่ปุ่น โตเกียว ที่เจือจาง 1 : 250 , 000 (
) ในบัฟเฟอร์ ตัวอย่างข้อมูลที่ซ้ำกัน
แผ่นถูกบ่มค้างคืนที่ 4  C หลังจากล้างขั้นตอน
90ll 200 มม. ซิเตรตบัฟเฟอร์ pH 4.5 ) includingo ฟีนิลีนไดอะมีน ( Sigma ) และ h2o2was เพิ่มเข้าไปในเวลส์ จาน
เก็บไว้ในที่มืด ประมาณ 10 – 20 นาทีที่ 20  C การพัฒนาสี ตามด้วย นอกจาก 30ll6nh2so4to หยุดการพัฒนา สี ความหนาแน่นของแสง คือ วัดที่ 492 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องอ่านแผ่นไมโคร
( mtp-300 ; โคโรน่าไฟฟ้า Co . , Ltd . , ญี่ปุ่น ) ส่วน E2 T
11-kt ความเข้มข้นและเจือจางตัวอย่างซีรั่ม