Two grams (fresh weight) of plant roots with rhizosphere soils
were suspended in 50 ml of phosphate buffered saline solution
(10 mMK2HPO4–KH2PO4, 0.15 M NaCl, pH 7.2) and shaken at120 rpm
for 45 min on a rotary shaker (Gyromax Steadyshake 757; Amerex
Instruments, Inc., Lafayette, CA), The upper turbid phase was serially
diluted and plated on nutrient agar (NA; DifcoTM, Becton Dickinson
and Co., Franklin Lakes, NJ) plates, and incubated at 28 C for 3 days in
an incubator (Isotemp 525D; Fisher Scientific, Pittsburgh, PA).
Independent colonies were selected from each plate for PSB
screening on NBRIP agar plates [10 g/l D-glucose, 5 g/l Ca3 (PO4)2,
5 g/l MgCl26H2O, 0.25 g/l MgSO47H2O, 0.2 g/l KCl, 0.1 g/l (NH4)2SO4,
15 g/l agar, pH 7.0 before autoclaving (Nautiyal, 1999)] at 28 C for
7 days. Additionally, modified NBRIP media containing, either FePO4
or AlPO4 as a sole source of P, were also used for the initial screening.
The bacteria growing fast or/and developing clear halo zones around
their colonies on the plate were selected and further purified on NA
plates. Once they are purified, each strain was stored in a glycerol
stock (20%) at
80 C for further experiments.
2 กรัม (น้ำหนักสด) ของรากพืชด้วยดินไรโซสเฟียร์ระงับได้ใน 50 ml ของเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์(10 mMK2HPO4 – KH2PO4, 0.15 M NaCl, pH 7.2) และเขย่า at120 rpmสำหรับ 45 นาทีในการหมุนปั่น (Gyromax Steadyshake 757 Amerexเครื่องมือ Inc. ลาฟาแยต CA), ขั้นตอนด้านบนขุ่นถูก seriallyเจือจาง และชุบบนอาหารวุ้น (นา DifcoTM, Becton สันและ บริษัท ทะเลสาบแฟรงคลิน NJ) แผ่น และได้รับการกกที่ 28 C 3 วันในมีตู้อบ (Isotemp 525D ฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์ พิตส์เบิร์ก PA)เลือกอาณานิคมเป็นอิสระจากแต่ละจานสำหรับ PSBคัดกรองบนแผ่นวุ้น NBRIP [10 g/l D-กลูโคส 5 แยก Ca3 (PO4) 25 แยก MgCl2 6H2O, 0.25 กรัม/ลิตร MgSO4 7H2O, KCl 0.2 g/l, 0.1 g/l (NH4) 2SO4วุ้น 15 g/l ค่า pH 7.0 ก่อนสปอร์ (Nautiyal, 1999)] ที่ 28 C สำหรับ7 วัน นอกจากนี้ แก้ไขสื่อ NBRIP ประกอบด้วย FePO4 อย่างใดอย่างหนึ่งหรือ AlPO4 เป็นแหล่งเดียวของ P นอกจากนี้ยังใช้สำหรับการคัดกรองเบื้องต้นแบคทีเรียเติบโตอย่างรวดเร็ว หรือ / และพัฒนาโซนชัดเจน halo รอบเลือกเหล่าอาณานิคมบนแผ่น และบริสุทธิ์บนนาเพิ่มเติมแผ่น เมื่อพวกเขาจะบริสุทธิ์ แต่ละสายพันธุ์ที่ถูกเก็บไว้ในกลีเซอรอลเป็นสต็อก (20%) ที่80 C สำหรับการทดลองต่อไป
การแปล กรุณารอสักครู่..

สองกรัม (น้ำหนักสด) ของรากพืชกับดินบริเวณราก
ถูกระงับใน 50 มล. ของฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ำเกลือ
(10 mMK2HPO4-KH2PO4 0.15 M NaCl ค่า pH 7.2) และเขย่า AT120 รอบต่อนาที
เป็นเวลา 45 นาทีในเครื่องปั่นแบบหมุน (Gyromax Steadyshake 757 ; Amerex
เครื่องดนตรี, Inc ลาฟาแยต CA) เฟสขุ่นบนถูกลำดับ
เจือจางและชุบสารอาหารในอาหารเลี้ยงเชื้อ (NA; DifcoTM, Becton ดิกคินสัน
และ Co. , แฟรงคลินทะเลสาบ, นิวเจอร์ซีย์) แผ่นและบ่มที่อุณหภูมิ 28 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 3 หรือไม่? วันใน
ศูนย์บ่มเพาะ (Isotemp 525D; Fisher Scientific, Pittsburgh, PA).
อาณานิคมอิสระได้รับการคัดเลือกจากแต่ละจาน PSB
การตรวจคัดกรองใน NBRIP แผ่นวุ้น [10 g / l D-กลูโคส 5 g / l Ca3 (PO4) 2,
5 g / l MgCl2? 6H2O, 0.25 กรัม / ลิตร MgSO4? 7H2O 0.2 g / l โพแทสเซียมคลอไรด์ 0.1 g / l (NH4) 2SO4,
15 g / l วุ้นพีเอช 7.0 ก่อนที่จะนึ่งฆ่าเชื้อ (Nautiyal, 1999)] วันที่ 28 องศาเซลเซียส สำหรับ
7 วัน นอกจากนี้การปรับเปลี่ยนสื่อ NBRIP มีทั้ง FePO4
หรือ AlPO4 เป็นแหล่งเดียวของ P ยังถูกนำมาใช้สำหรับการตรวจคัดกรองเบื้องต้น.
แบคทีเรียเติบโตอย่างรวดเร็วและ / หรือการพัฒนาโซนรัศมีที่ชัดเจนรอบ
อาณานิคมของพวกเขาบนจานได้รับการคัดเลือกและต่อบริสุทธิ์นา
แผ่น เมื่อพวกเขาจะบริสุทธิ์แต่ละสายพันธุ์ที่ถูกเก็บไว้ในกลีเซอรอล
หุ้น (20%) ที่
? 80? C สำหรับการทดลองต่อไป
การแปล กรุณารอสักครู่..

สองกรัมน้ำหนักสดของรากพืชกับดินรอบรากหยุดชั่วคราวในฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ำเกลือ 50 มิลลิลิตร( 10 mmk2hpo4 – kh2po4 0.15 M NaCl , pH 7.2 ) และเขย่า at120 รอบต่อนาที45 นาทีบนเครื่องปั่น Rotary ( ไกโรแมกซ์ steadyshake amerex 757 ;เครื่องมือ , อิงค์ , ลาฟาแยต , CA ) , ระยะชั้นบนเป็นล.เจือจาง และชุบบน NUMB3RS ( นา ; difcotm เบคตอนดิค ,และบริษัท Franklin Lakes , NJ ) แผ่นและบ่มที่อุณหภูมิ 28 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 3 วันตู้ฟักไข่ ( isotemp 525d ; ฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์ , Pittsburgh , PA )อาณานิคมอิสระได้รับเลือกจากแต่ละชนิดแผ่นสำหรับการคัดกรองใน nbrip วุ้นแผ่น [ 10 กรัม / ลิตร ดี กูลโคส 5 กรัมต่อลิตร ca3 ( po4 ) 25 กรัม / ลิตร mgcl26h2o 0.25 กรัม / ลิตร mgso47h2o 0.2 กรัม / ลิตรปริมาณ 0.1 กรัม / ลิตร 2so4 ( NH4 ) ,15 กรัม / ลิตรวุ้น , pH 7.0 ก่อนอัตราส่วนโฟกัส ( nautiyal , 1999 ) ที่อุณหภูมิ 28 องศาเซลเซียส ]7 วัน นอกจากนี้ nbrip สื่อที่มีการแก้ไขให้ fepo4หรือ alpo4 เป็นแหล่งที่มา แต่เพียงผู้เดียวของ P , ยังใช้สำหรับการเริ่มต้นแบคทีเรียที่เติบโตอย่างรวดเร็ว และ / หรือการพัฒนาเขตรัศมีชัดเจน รอบ ๆอาณานิคมของพวกเขาบนแผ่นและให้เลือกอีกนาแผ่น เมื่อพวกเขาจะบริสุทธิ์ แต่ละสายพันธุ์ที่ถูกเก็บไว้ในกลีเซอรอลหุ้น ( 20% )80 C สำหรับการทดลองต่อไป
การแปล กรุณารอสักครู่..
