Abstract
This study analyzed the effects of four microelemental fertilizers not only on growth rates and sclerotia formation of mycelia, but also the yields, amino acids contents and mineral elements of fruit body from artificially cultivated Morchella conica. Results showed that Fe·EDDHA had the strongest promoting effect on the mycelia growth, sclerotia formation and resulted in the highest yield, while CuSO4·5H2O resulted in an adverse effect. Fe·EDDHA, Nutriagent and ZnSO4·7H2O, respectively, increased the yields of morel's fruit bodies by 63.4%, 59.9% and 25.9% when compared with that of the control, but the yield of CuSO4·5H2O group was reduced by 19.3%. The total amino acids contents of Fe·EDDHA, Nutriagent and ZnSO4·7H2O groups were also f8a significantly increased. Six microelements (Fe, Zn, B, Cu, Mn and Mo) and six heavy metals (Ni, As, Pb, Cr, Cd and Hg) were assayed and the highest Fe content was found in the Fe·EDDHA group, 7.10 times higher than that of the control group.
Keywords
M. conica; Microelement; Mycelia growth; Amino acid; Mineral elements; Heavy metals
1. Introduction
Morels has been highly prized for their medicinal and nutritional qualities, widely consumed as a vegetable or a functional food and used as a medicine to cure some diseases, such as hypercholesterolemia, hypertension and cancer for centuries throughout the world (Elmastas et al., 2007, Wong and Chye, 2009, Gençcelep et al., 2009 and Kanwal and Reddy, 2012). The morel's fruit body yield is highly limited to temperate regions of the Northern Hemisphere, such as Europe, North America and China (O’Donnell et al., 2011 and Du et al., 2012) and the harvesting season is short. Due to increasing popularity and commercial demand, wild morels are cultivated commercially and exported extensively from China, India, Turkey, Mexico and the United States (Pilz et al., 2007 and Taşkin et al., 2010). Meanwhile, wild morels are at risk of accumulating heavy metal content such as arsenic (As), cadmium (Cd), lead (Pb), chromium (Cr), nickel (Ni) and mercury (Hg) from natural habitats (Vetter, 2004, Gençcelep et al., 2009, Gursoy et al., 2009 and Zhu et al., 2011). Therefore, it is very important to study a mature approach to commercially cultivating morels.
Many researchers have attempted to cultivate morels in controlled conditions. Up to now, most reports mainly focus on the development of fruit bodies, modes of reproduction, nutritional sources, life cycle (Pilz et al., 2007), external ultrastructure, sclerotium formation and germination (Masaphy, 2010). Some studies have demonstrated that minerals play an important role in the metabolic processes of mushrooms (Stihi et al., 2011 and Cheung, 2008), and more extensive studies have been published (Vetter, 2004, Ouzouni et al., 2009, 106a Ayaz et al., 2011 and Falandysz et al., 2013). Gursoy et al. (2009) determined the metallic elements content of Morchella conica collected from the Mugla Province in Turkey, and it was found that the morel fruit body was rich in Fe, Zn and Mn. In addition, some nutritional components in mushrooms, such as protein, vitamins, carbohydrate and minerals, could be varied because of categories, anthropogenic factors, soil structure and region ( Szefer, 2007). However, all of these reports were about wild morels, not artificially cultivated ones. In the present study, four fertilizers including zinc sulfate (ZnSO4·7H2O), copper sulfate (CuSO4·5H2O), Fe·EDDHA and Nutriagent, were chosen for analyzing the efficacy of these microelements on the growth of mycelium, the formation of sclerotia and the nutritional value of artificially cultivated M. conica compared with wild M. conica (data of the literature by Liu et al., 2012).
2. Materials and methods
2.1. The strain and chemical agents
The M. conica strain Mc-5 has been isolated and preserved in the authors’ laboratory for 6 years, whose molecular identification results were reported previously by one of the authors ( Li et al., 2013). Zinc sulfate (ZnSO4·7H2O), copper sulfate (CuSO4·5H2O), ethanolamine, disodium edentate dihydrate (EDTA·2Na), manganous sulfate (MnSO4·4H2O), ferrous sulfate (FeSO4·7H2O), ammonium molybdate [(NH4)2MoO4], boracic acid, isopropyl alcohol and other chemical agents were analytically pure and purchased from local reagent chemical companies except Fe·EDDHA, which was purchased from Nobel Azol Co, Ltd.
2.2. Preparation of Nutriagent by three-step cheleration
Nutriagent, one of multi-microelement fertilizers chelated by EDTA, was prepared according to the Chinese Patent No. 200710050488.9 (Long et al., 2009). It consists of six microelements (4.43% Fe, 3.85% Zn, 1.80% Mn, 0.06% Mo, 1.28% B and 0.60% Cu, respectively). First, the ethanolamine chelating boron was synthesized by adding 1.0 kg boracic acid (40 mesh) into the pre-heated distilled water (65 °C) and stirring them for 1 h while 3 kg ethanolamine was mixed with them. Then, the mixture was kept reacting under 80 °C for 2 h followed by another 2 h for evaporation at 110–120 °C. Second, the four-microelement complex for iron, zinc, manganese and molybdenum was prepared according to the following formula: 2 kg FeSO4·7H2O, 1.5 kg ZnSO4·7H2O, 0.6 kg MnSO4·4H2O, 0.1 kg (NH4)2MoO4, 3.52 kg EDTA·2Na and 0.5 kg isopropyl alcohol with pure water (w/v = 1:1). These materials were wholly smashed to 40 mesh, and then the mixture was finely mixed with EDTA·2Na until 0.5 kg isopropyl alcohol solution was sprayed onto the mixture. After lying for 24 h under 4 kg/cm2 to solidify, the complex was finely smashed to 40 mesh and its pH value was adjusted to 5.2 by using sodium hydroxide. Third, the amino acid complex chelated copper was prepared by the following method. C f95 opper sulfate (CuSO4·5H2O, 4.2 kg, 60 mesh in diameter) was evenly mixed with 4.8 kg amino acid complex. The mixture was sprayed by 1.0 kg isopropyl alcohol and then dried under the pressure at 3 kg/cm2 for 24 h. Finally, all of the complexes were wholly mixed according to the formula (ethanolamine chelated boron 25%, the four-microelement complex 70%, copper complex 5%), dried until the water content was less than 2% by a 90 °C heat treatment and smashed to 40 mesh. The prepared Nutriagent was stored at room temperature before use.
2.3. Experiments on the growth of mycelium of M. conica
The pure culture was inoculated by using the sterile PDA medium (containing 20% potato, 2% glucose and 1.8% agar) in test-tubes and then was sub-cultured in PDA plates. Each microelement group consisted of four final concentration levels (50, 100, 200, 400 mg/L, respectively) in triplicate, and the same volume of distilled water (dH2O) was added into the medium plates as the control. Mycelia plugs (6 mm in diameter) were prepared from actively cultured mycelia by using PDA medium plate and then were inoculated on Petri dishes (90 mm in diameter) with a PDA medium under 16 °C in dark and natural air conditions for 19 days (Weitz et al., 2001). Sclerotia's color and distribution were observed, and the extension of the mycelia was measured at 24-h intervals with a caliper gauge randomly with three repeats. The mycelia daily growth rate was calculated by the following formula: Mycelia growth rate (mm/day) = (colony diameter − 6)/2 × cultured days.
บทคัดย่อศึกษาวิเคราะห์ผลกระทบของปุ๋ย microelemental 4 ไม่เพียงแต่อัตราการเจริญเติบโตและก่อตัว sclerotia ของ mycelia แต่ยังอัตราผลตอบแทน กรดอะมิโนเนื้อหา และองค์ประกอบแร่ธาตุของร่างกายผลไม้จากป่าปลูกเหือด conica ผลลัพธ์ที่แสดงให้เห็นว่า Fe· EDDHA มีผลส่งเสริมแข็งแกร่งเติบโต mycelia, sclerotia ก่อตัว และส่งผลให้ผลตอบแทนที่สูงที่สุด ในขณะที่ CuSO4·5H2O ทำให้เกิดผลเสียต่อ Fe· EDDHA, Nutriagent และ ZnSO4·7H2O ตามลำดับ อัตราผลตอบแทนของริกโมเรลของผลไม้ร่างกายเพิ่มขึ้นร้อยละ 63.4%, 59.9% และ 25.9% เมื่อเทียบกับค่าของตัวควบคุม แต่ผลตอบแทนของกลุ่ม CuSO4·5H2O ถูกลดลง 19.3% กรดอะมิโนรวมเนื้อหาของ Fe· กลุ่ม EDDHA, Nutriagent และ ZnSO4·7H2O ยังมี f8a เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ หก microelements (Fe, Zn, B, Cu, Mn และ Mo) และโลหะหนักหก (Ni เป็น Pb, Cr, Cd และ Hg) ถูก assayed และ Fe เนื้อหาสูงสุดพบใน Fe· EDDHA กลุ่ม 7.10 ครั้งสูงกว่ากลุ่มควบคุมคำสำคัญม. conica Microelement Mycelia เติบโต กรดอะมิโน แร่องค์ประกอบ โลหะหนัก1. บทนำMorels ถูกสูง prized สำหรับคุณภาพของยา และโภชนาการ อย่างกว้างขวางใช้เป็นผักหรืออาหารที่ทำงาน และใช้เป็นยารักษาโรคบางอย่าง เช่น hypercholesterolemia ความดันโลหิตสูง และโรคมะเร็งสำหรับศตวรรษทั่วโลก (Elmastas et al., 2007 วงและ Chye ปี 2009, Gençcelep et al., 2009 และ Kanwal และ Reddy, 2012) ผลผลิตของริกโมเรลผลไม้ร่างกายจะสูงจำกัดภูมิภาคแจ่มของซีกโลกเหนือ ยุโรป อเมริกาเหนือ และจีน (O'Donnell et al., 2011 และ Du et al., 2012) และฤดู harvesting เป็นระยะสั้น เนื่องจากเพิ่มความนิยมและความต้องการเชิงพาณิชย์ morels ป่ามี cultivated ในเชิงพาณิชย์ และส่งออกไปอย่างกว้างขวางจากประเทศจีน อินเดีย ตุรกี เม็กซิโก และสหรัฐอเมริกา (Pilz et al., 2007 และ Taşkin et al., 2010) ในขณะเดียวกัน morels ป่าเสี่ยงต่อการสะสมโลหะหนักเนื้อหาเช่นสารหนู (เป็น), แคดเมียม (Cd), เป้าหมาย (Pb), โครเมียม (Cr), นิกเกิล (Ni) และปรอท (Hg) จากอยู่อาศัยตามธรรมชาติ (Vetter, 2004, Gençcelep et al., 2009, Gursoy et al., 2009 และ Zhu et al., 2011) ดังนั้น จึงเป็นสิ่งสำคัญมากในการศึกษาวิธีการแบบผู้ใหญ่เพื่อเพาะปลูกในเชิงพาณิชย์ morelsนักวิจัยจำนวนมากได้พยายามฝึกฝน morels ในสภาพควบคุม ถึงตอนนี้ ส่วนใหญ่รายงานส่วนใหญ่มุ่งเน้นการพัฒนาร่างกายผลไม้ วิธีทำ แหล่งโภชนาการ ชีวิต รอบ (Pilz et al., 2007), ภายนอก ultrastructure กำเนิด sclerotium และการงอก (Masaphy, 2010) บางการศึกษาได้แสดงว่า แร่มีบทบาทสำคัญในกระบวนการเผาผลาญของเห็ด (Stihi et al., 2011 และจาง 2008), และศึกษาเพิ่มเติมอย่างละเอียดได้รับการเผยแพร่ (Vetter, 2004, Ouzouni et al. ปี 2009, 106a Ayaz et al., 2011 และ Falandysz et al., 2013) Gursoy et al. (2009) กำหนดเนื้อหาองค์ประกอบโลหะของ conica ป่าที่รวบรวมจากจังหวัด Mugla ตุรกี และพบว่า ร่างกายผลไม้ริกโมเรลคือ Fe, Zn และ Mn นอกจากนี้ ส่วนประกอบทางโภชนาการบางในเห็ด โปรตีน วิตามิน คาร์โบไฮเดรต และแร่ ธาตุ สามารถหลากหลายประเภท ปัจจัยที่มาของมนุษย์ โครงสร้างดิน และภูมิภาค (Szefer, 2007) อย่างไรก็ตาม รายงานเหล่านี้ทั้งหมดที่เกี่ยวกับป่า morels คนปลูกไม่สมยอม ในการศึกษาปัจจุบัน ปุ๋ยสี่รวมทั้งสังกะสีซัลเฟต (ZnSO4·7H2O), คอปเปอร์ซัลเฟต (CuSO4·5H2O), Fe· EDDHA และ Nutriagent ถูกเลือกสำหรับการวิเคราะห์ประสิทธิภาพของ microelements เหล่านี้ในการเจริญเติบโตของ mycelium การก่อตัวของ sclerotia และคุณค่าทางโภชนาการของ conica M. เหือดปลูกเปรียบเทียบกับป่า conica เมตร (ข้อมูลของวรรณคดีโดยหลิว et al., 2012)2. วัสดุและวิธีการ2.1.ตัวแทนที่ต้องใช้และสารเคมีพันธุ์ conica M. Mc-5 ได้รับแยกต่างหาก และเก็บรักษาไว้ในห้องปฏิบัติการของผู้เขียน 6 ปี ผลลัพธ์ที่มีระบุโมเลกุลมีรายงานก่อนหน้านี้ โดยผู้เขียน (Li et al., 2013) สังกะสีซัลเฟต (ZnSO4·7H2O), คอปเปอร์ซัลเฟต (CuSO4·5H2O), ethanolamine หัว edentate dihydrate (EDTA·2Na), manganous ซัลเฟต (MnSO4·4H2O), ซัลเฟต (FeSO4·7H2O) แอมโมเนีย molybdate [(NH4) 2MoO4], boracic กรด แอลกอฮอล์ isopropyl และตัวแทนอื่น ๆ เคมีถูก analytically บริสุทธิ์ และซื้อจากบริษัทเคมีรีเอเจนต์ภายในยกเว้น Fe· EDDHA ซึ่งถูกซื้อจากโนเบล Azol Co, Ltd.2.2 การเตรียมการของ Nutriagent โดย cheleration สามขั้นNutriagent ปุ๋ยหลาย microelement chelated โดย EDTA อย่างใดอย่างหนึ่งถูกจัดเตรียมตามจีนสิทธิบัตรหมายเลข 200710050488.9 (ลอง et al., 2009) ประกอบด้วยหก microelements (4.43% Fe, 3.85 แถว% Zn, 1.80% Mn, 0.06% Mo ถึง 1.28% B และ 0.60% Cu ตามลำดับ) ครั้งแรก ethanolamine chelating โบรอนถูกสังเคราะห์ โดยการเพิ่ม 1.0 kg boracic กรด (40 ตาข่าย) เข้าก่อนอุ่นกลั่นน้ำ (65 ° C) และกวนให้สำหรับ h 1 ขณะ 3 กก. ethanolamine ถูกผสมกับพวกเขา แล้ว ถูกเก็บส่วนผสมปฏิกิริยาต่ำกว่า 80 ° C สำหรับ 2 h ตาม ด้วย h อื่น 2 การระเหยที่ 110 – 120 องศาเซลเซียส สอง คอมเพล็กซ์ 4 microelement เหล็ก สังกะสี แมงกานีส และโมลิบดีนัมที่เตรียมตามสูตรต่อไปนี้: กก. 2 FeSO4·7H2O, 1.5 กก. ZnSO4·7H2O, 0.6 kg MnSO4·4H2O, 0.1 kg (NH4) 2MoO4, 3.52 กก. EDTA·2Na และแอลกอฮอล์ isopropyl 0.5 กิโลกรัมน้ำบริสุทธิ์ (w/v = 1:1) วัสดุเหล่านี้ได้ทั้งหมดซึ่งได้ถูกทุบเพื่อตาข่าย 40 แล้ว ผสมได้ประณีตผสมกับ EDTA·2Na จนกว่า 0.5 กก.แอลกอฮอล์ isopropyl โซลูชันถูกฉีดพ่นลงบนส่วนผสม หลังจากนอนใน 24 ชมภายใต้ 4 kg/cm2 จะแข็ง ประณีตได้ซึ่งได้ถูกทุบซับซ้อนกับตาข่าย 40 และค่า pH ถูกปรับปรุง 5.2 โดยใช้โซเดียมไฮดรอกไซด์ ที่สาม กรดอะมิโนคอมเพล็กซ์ chelated ทองถูกเตรียม โดยวิธีต่อไปนี้ C f95 opper ซัลเฟต (CuSO4·5H2O, 4.2 กก. ตาข่าย 60 เส้นผ่านศูนย์กลาง) ได้เท่า ๆ กันผสมกับกรดอะมิโน 4.8 กก.ซับซ้อน ส่วนผสมฉีดพ่น ด้วยแอลกอฮอล์ isopropyl 1.0 กก. และอบแห้งภายใต้ความดันที่ 3 kg/cm2 สำหรับ 24 ชม ในที่สุด ทั้งหมดของสิ่งอำนวยความสะดวกถูกทั้งหมดผสมตามสูตร (ethanolamine chelated โบรอน 25%, 4 microelement ซับซ้อน 70%, 5% ทองแดงซับซ้อน), แห้งจนกว่าปริมาณน้ำน้อยกว่า 2% โดยรักษาความร้อน 90 ° C และซึ่งได้ถูกทุบเพื่อตาข่าย 40 Nutriagent เตรียมไว้ถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้องก่อนใช้2.3 การทดลองในการเติบโตของ mycelium conica เมตรวัฒนธรรมบริสุทธิ์ inoculated โดยใส่ PDA สื่อ (ประกอบด้วย 20% มันฝรั่ง น้ำตาลกลูโคส 2% และ 1.8% agar) ในหลอดทดสอบ และจากนั้น ถูกย่อยอ่างในแผ่น PDA แต่ละกลุ่ม microelement ประกอบด้วยระดับความเข้มข้นสุดท้ายสี่ (50, 100, 200, 400 mg/L ตามลำดับ) ใน triplicate และปริมาตรของน้ำกลั่น (dH2O) เดียวกันถูกเพิ่มเข้าไปในแผ่นขนาดเท่ากับตัวควบคุม ปลั๊ก mycelia (เส้นผ่านศูนย์กลาง 6 มิลลิเมตร) เตรียมจาก mycelia อ่างอย่างแข็งขัน โดยใช้จานขนาด PDA แล้ว มี inoculated บนจาน Petri (เส้นผ่านศูนย์กลาง 90 mm) กับสื่อ PDA ต่ำกว่า 16 ° C ในสภาพอากาศที่มืด และธรรมชาติ 19 วัน (ไวทซ์และ al., 2001) สังเกตสีและการกระจายของ sclerotia และส่วนขยายของ mycelia ถูกวัดในช่วงเวลา 24 h กับวัดปั้มแบบสุ่มกับทำซ้ำสาม Mycelia ประจำวันอัตราการเติบโตที่คำนวณตามสูตรต่อไปนี้: อัตราการเติบโต Mycelia (mm/วัน) = (โคโลนีเส้นผ่าศูนย์กลาง− 6) / อ่าง 2 ×วัน
การแปล กรุณารอสักครู่..
บทคัดย่อ
การศึกษาครั้งนี้การวิเคราะห์ผลกระทบของการใช้ปุ๋ยสี่ microelemental ไม่เพียง แต่ในอัตราการเจริญเติบโตและการก่อตัวของเส้นใย sclerotia แต่ยังอัตราผลตอบแทนเนื้อหากรดอะมิโนและแร่ธาตุของร่างกายจากการเพาะปลูกผลไม้เทียม Morchella CONICA ผลการศึกษาพบว่าเฟ· EDDHA มีการส่งเสริมที่แข็งแกร่งผลกระทบต่อการเจริญเติบโตของเส้นใยก่อ sclerotia และส่งผลให้อัตราผลตอบแทนที่สูงที่สุดในขณะที่ CuSO 4 · 5H2O ส่งผลให้เกิดผลกระทบ เฟ· EDDHA, Nutriagent และ ZnSO4 · 7H2O ตามลำดับเพิ่มขึ้นอัตราผลตอบแทนของร่างกายผลไม้มอเรลโดย 63.4%, 59.9% และ 25.9% เมื่อเทียบกับที่ของการควบคุม แต่ผลผลิตของ CuSO 4 ·กลุ่ม 5H2O ลดลง 19.3% เนื้อหากรดอะมิโนรวมของเฟ· EDDHA, Nutriagent และ ZnSO4 ·กลุ่ม 7H2O ยัง f8a เพิ่มขึ้นอย่างมาก หกธาตุ (เฟ Zn, B, Cu, Mn และโม) และโลหะหนักหก (Ni ในฐานะที่เป็นตะกั่วโครเมียมแคดเมียมและปรอท) ถูก assayed และเนื้อหาเฟสูงสุดที่พบในเฟ·กลุ่ม EDDHA, 7.10 ครั้ง สูงกว่ากลุ่มควบคุม. คำเมตร CONICA; Microelement; การเจริญเติบโตของเส้นใย; กรดอะมิโน; แร่ธาตุ; โลหะหนัก1 บทนำMorels ได้รับผลตอบแทนสูงสำหรับคุณภาพยาและโภชนาการของพวกเขาบริโภคกันอย่างแพร่หลายเป็นผักหรืออาหารที่ทำงานและใช้เป็นยาเพื่อรักษาโรคบางอย่างเช่นไขมันในเลือดสูงความดันโลหิตสูงและโรคมะเร็งมานานหลายศตวรรษทั่วโลก (Elmastas et al., 2007, วงศ์และ Chye 2009 Gençcelep et al., 2009 และ Kanwal และเรดดี้ 2012) ผลผลิตผลไม้ร่างกายมอเรลเป็นอย่างมากที่จะ จำกัด เขตอบอุ่นของซีกโลกเหนือเช่นยุโรปอเมริกาเหนือและประเทศจีน (ดอนเนลล์ et al., 2011 และ Du et al., 2012) และฤดูเก็บเกี่ยวสั้น เนื่องจากความนิยมที่เพิ่มขึ้นและความต้องการในเชิงพาณิชย์ morels ป่าที่ปลูกในเชิงพาณิชย์และการส่งออกอย่างกว้างขวางจากจีน, อินเดีย, ตุรกี, เม็กซิโกและสหรัฐอเมริกา (Pilz et al., 2007 และ Taskin et al., 2010) ในขณะเดียวกัน morels ป่าที่มีความเสี่ยงของการสะสมปริมาณโลหะหนักเช่นสารหนู (As) แคดเมียม (Cd), ตะกั่ว (Pb), โครเมียม (Cr) นิกเกิล (Ni) และปรอท (Hg) จากแหล่งที่อยู่อาศัยตามธรรมชาติ (Vetter 2004 , Gençcelep et al., 2009 Gursoy et al., 2009 และจู้ et al., 2011) ดังนั้นจึงเป็นสิ่งสำคัญมากที่จะศึกษาวิธีการที่จะเป็นผู้ใหญ่ในเชิงพาณิชย์ปลูกฝัง morels. นักวิจัยหลายคนได้พยายามที่จะปลูกฝัง morels ในสภาวะควบคุม ถึงตอนนี้รายงานมากที่สุดส่วนใหญ่มุ่งเน้นไปที่การพัฒนาของร่างกายผลไม้รูปแบบของการทำสำเนาแหล่งโภชนาการวงจรชีวิต (Pilz et al., 2007) ultrastructure ภายนอกก่อ Sclerotium และการงอก (Masaphy 2010) บางการศึกษาแสดงให้เห็นว่าแร่ธาตุที่มีบทบาทสำคัญในกระบวนการเผาผลาญอาหารของเห็ด (Stihi et al., 2011 และ Cheung, 2008) และการศึกษาอย่างกว้างขวางมากขึ้นได้รับการตีพิมพ์ (Vetter 2004 Ouzouni et al., 2009, 106A Ayaz et al., 2011 และ Falandysz et al., 2013) Gursoy et al, (2009) กำหนดธาตุโลหะเนื้อหาของ Morchella CONICA เก็บรวบรวมจากจังหวัดมูกในตุรกีและพบว่าผลไม้ร่างกายมอเรลเป็นที่อุดมไปด้วยเฟ, สังกะสีและแมงกานีส นอกจากนี้ยังมีส่วนประกอบทางโภชนาการในเห็ดเช่นโปรตีนวิตามินคาร์โบไฮเดรตและแร่ธาตุที่อาจจะแตกต่างกันเพราะประเภทปัจจัยมนุษย์โครงสร้างดินและภูมิภาค (Szefer 2007) แต่ทั้งหมดของรายงานเหล่านี้เป็นเรื่องเกี่ยวกับ morels ป่าไม่ได้คนปลูกเทียม ในการศึกษาปัจจุบันสี่รวมทั้งปุ๋ยสังกะสีซัลเฟต (ZnSO4 · 7H2O) คอปเปอร์ซัลเฟต (CuSO 4 · 5H2O) ·เฟ EDDHA และ Nutriagent, ได้รับการแต่งตั้งในการวิเคราะห์ประสิทธิภาพของธาตุเหล่านี้ต่อการเจริญเติบโตของเส้นใยการก่อตัวของ sclerotia และ คุณค่าทางโภชนาการของเทียมปลูก CONICA เมตรเมื่อเทียบกับป่า CONICA เมตร (ข้อมูลของวรรณกรรมโดย Liu et al., 2012). 2 วัสดุและวิธีการ2.1 ความเครียดและสารเคมีเมตร CONICA ความเครียด Mc-5 ได้รับการแยกและเก็บรักษาไว้ในห้องปฏิบัติการของผู้เขียนเป็นเวลา 6 ปีที่ผ่านมามีผลการระบุโมเลกุลได้รับรายงานก่อนหน้านี้โดยหนึ่งในผู้เขียน (Li et al., 2013) สังกะสีซัลเฟต (ZnSO4 · 7H2O) คอปเปอร์ซัลเฟต (CuSO 4 · 5H2O) ethanolamine, disodium edentate dihydrate (EDTA · 2NA) ซัลเฟต manganous (MnSO4 · 4H2O) เหล็กซัลเฟต (FeSO4 · 7H2O), แอมโมเนียมโมลิบ [(NH4) 2MoO4 ] กรด boracic แอลกอฮอล์ isopropyl และสารเคมีอื่น ๆ ที่บริสุทธิ์และการวิเคราะห์ที่ซื้อมาจาก บริษัท เคมีสารท้องถิ่นยกเว้นเฟ· EDDHA ซึ่งได้รับรางวัลโนเบลที่ซื้อมาจาก Azol จำกัด2.2 จัดทำโดย Nutriagent cheleration สามขั้นตอนNutriagent หนึ่งของปุ๋ยหลาย microelement คี EDTA โดยได้รับการจัดทำขึ้นตามสิทธิบัตรของจีนฉบับที่ 200,710,050,488.9 (Long et al., 2009) มันประกอบด้วยหกธาตุ (4.43% เฟ 3.85% Zn, Mn 1.80%, 0.06% Mo, 1.28% และ 0.60 B% Cu ตามลำดับ) ครั้งแรกที่โบรอนคีเลต ethanolamine ถูกสังเคราะห์โดยการเพิ่ม 1.0 กิโลกรัมกรด boracic (40 ตาข่าย) ลงในน้ำกลั่นก่อนอุ่น (65 ° C) และกวนพวกเขาเป็นเวลา 1 ชั่วโมงในขณะที่ 3 กก. ethanolamine ผสมกับพวกเขา จากนั้นผสมปฏิกิริยาถูกเก็บไว้ภายใต้ 80 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 ชั่วโมงตามมาด้วยอีก 2 ชั่วโมงระเหยที่ 110-120 องศาเซลเซียส ประการที่สองการที่ซับซ้อนสี่ microelement เหล็กสังกะสีแมงกานีสและโมลิบดีนัมถูกจัดทำขึ้นตามสูตรต่อไปนี้: 2 กก FeSO4 · 7H2O, 1.5 กก ZnSO4 · 7H2O 0.6 กก. MnSO4 · 4H2O 0.1 กิโลกรัม (NH4) 2MoO4, 3.52 กก. EDTA · 2NA และ 0.5 กก. เครื่องดื่มแอลกอฮอล์ isopropyl ด้วยน้ำบริสุทธิ์ (w / v = 1: 1) วัสดุเหล่านี้ถูกทุบในเครือถึง 40 ตาข่ายแล้วผสมผสมเป็นอย่างประณีตด้วย EDTA · 2NA จนถึง 0.5 กก. แก้ปัญหาเครื่องดื่มแอลกอฮอล์ isopropyl พ่นลงบนส่วนผสม หลังจากนอนเป็นเวลา 24 ชั่วโมงอายุต่ำกว่า 4 กก. / cm2 แข็งซับซ้อนถูกทุบละเอียดถึง 40 ตาข่ายและค่าพีเอชที่ได้รับการปรับให้ 5.2 โดยใช้โซเดียมไฮดรอกไซ ประการที่สามคีทองแดงกรดอะมิโนที่ซับซ้อนถูกจัดทำขึ้นโดยวิธีดังต่อไปนี้ F95 C ซัลเฟต Opper (CuSO 4 · 5H2O 4.2 กก., 60 ตาข่ายในเส้นผ่าศูนย์กลาง) ผสมสม่ำเสมอด้วย 4.8 กก. อะมิโนกรดที่ซับซ้อน ส่วนผสมที่ถูกพ่น 1.0 กก. เครื่องดื่มแอลกอฮอล์ isopropyl และแห้งแล้วภายใต้ความกดดันที่ 3 กก. / cm2 เป็นเวลา 24 ชั่วโมง ในที่สุดทั้งหมดของคอมเพล็กซ์ถูกผสมทั้งหมดตามสูตร (โบรอนคี ethanolamine 25% สี่ microelement ซับซ้อน 70% ทองแดงซับซ้อน 5%) แห้งจนปริมาณน้ำน้อยกว่า 2% โดย 90 ° C ความร้อน การรักษาและการทุบถึง 40 ตาข่าย เตรียม Nutriagent ถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้องก่อนการใช้งาน. 2.3 การทดลองเกี่ยวกับการเจริญเติบโตของเส้นใยของเอ็ม CONICA วัฒนธรรมบริสุทธิ์เชื้อโดยใช้สื่อที่ผ่านการฆ่าเชื้อ PDA (ที่มีมันฝรั่ง 20% กลูโคส 2% และ 1.8% วุ้น) ในการทดสอบหลอดแล้วก็ย่อยที่เลี้ยงในแผ่นพีดีเอ แต่ละกลุ่ม microelement ประกอบด้วยสี่ระดับความเข้มข้นสุดท้าย (50, 100, 200, 400 มิลลิกรัม / ลิตรตามลำดับ) ในเพิ่มขึ้นสามเท่าและปริมาณเดียวกันของน้ำกลั่น (dH2O) ถูกบันทึกลงในแผ่นกลางเป็นตัวควบคุม ปลั๊กเส้นใย (6 มม) ได้รับการจัดทำขึ้นจากเส้นใยเพาะเลี้ยงอย่างแข็งขันโดยใช้แผ่นกลาง PDA แล้วถูกเชื้อในจานเลี้ยงเชื้อ (90 มม) ที่มีขนาดกลาง PDA อายุต่ำกว่า 16 องศาเซลเซียสในสภาพอากาศที่มืดและเป็นธรรมชาติสำหรับ 19 วัน ( Weitz et al., 2001) สี sclerotia และถูกตั้งข้อสังเกตการจัดจำหน่ายและการขยายตัวของเส้นใยวัดในช่วงเวลา 24 ชั่วโมงกับคาลิเปอร์แบบสุ่มมาตรวัดที่มีสามซ้ำ อัตราการเติบโตของเส้นใยทุกวันที่คำนวณได้จากสูตรต่อไปนี้: Mycelia อัตราการเจริญเติบโต (มม / วัน) = (เส้นผ่าศูนย์กลางอาณานิคม - 6) / 2 ×วันที่เพาะเลี้ยง
การแปล กรุณารอสักครู่..