Figure 1. Inhibition of TRPM8 curre

Figure 1. Inhibition of TRPM8 currents by scPPX1 in whole-cell patch clamp. Upper panels: Whole-cell patch clamp measurements of menthol-induced currents were performed at −60 mV in the whole-cell configuration on HEK cells expressing TRPM8, in nominally Ca2+-free solution (NCF), to avoid desensitization. Menthol pulses (500 μM) were applied in the first 3–5 min after establishment of whole-cell configuration: HEK-293 cells were transiently transfected with TRPM8 (0.4 μg) and co-transfected with GFP clone (0.2 μg) to allow detection of transfected cells. Panel A: the control. Panel B: the pipette solution was supplemented with 2.3 μg/ml scPPX1. Midle panels: Whole-cell patch clamp was performed on HEK-293 TRPM8 stable cell line, which was transiently transfected with GFP (0.2 μg) alone (panel D) or with scPPX1 clone (0.4 μg) and GFP (0.2 μg) (panel E). The summaries are shown in panel F. The protocol of experiment is the same as for the measurements in the upper panel. Lower panels: Current/Voltage relationships of TRPM8 channels obtained in whole-cell patch clamp performed at −100 +100 mV voltage ramps for HEK-293 TRPM8 stable cell line, which was transiently transfected with GFP (0.2 μg) alone (panel G) or with scPPX1 clone (0.4 μg) and GFP (0.2 μg) (panel H). The summaries are shown in panel I at −100 and +100 mV.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

รูปที่ 1 การยับยั้งกระแส TRPM8 โดย scPPX1 ในแพทช์ทั้งเซลล์แคลมป์ แผงด้านบน: เซลล์ทั้งแพทช์แคลมป์วัดกระแสเกิดจากอินเดียดำเนินใน mV −60 ในการกำหนดค่าของเซลล์ทั้งหมดในเซลล์ HEK แสดง TRPM8 ในนาม Ca2 + -ฟรีโซลูชั่น (NCF), หลีกเลี่ยงการ desensitization อินเดียกะพริบ (500 μM) ใช้ในนาที 3-5 ครั้งแรกหลังจากก่อตั้งกำหนดค่าทั้งหมดเซลล์: เซลล์ HEK-293 transiently ได้ transfected กับ TRPM8 (0.4 μg) และ transfected ร่วมกับโคลน GFP (0.2 μg) ให้ตรวจหาเซลล์ transfected A:แผงควบคุม แผง b:โซลูชันเปตต์ถูกเสริม ด้วย 2.3 μg/ml scPPX1 แผง Midle: แคลมป์แพทช์ทั้งเซลล์ทำบรรทัด HEK 293 TRPM8 เซลล์มั่นคง ซึ่งถูก transiently transfected GFP (0.2 μg) เพียงอย่างเดียว (ใส่ D หรือ scPPX1 โคลน (0.4 μg) และ GFP (0.2 μg) (แผงอี) สรุปการแสดงในแผงเอฟ โพรโทคอลทดลองเป็นเหมือนกับวัดในแผงด้านบน ลดการติดตั้ง: กระแส/แรงดันไฟฟ้าความสัมพันธ์ของช่อง TRPM8 ได้ในแพทช์ทั้งเซลล์แคลมป์ดำเนิน −100 100 mV แรงดันไฟฟ้าทางลาดสำหรับ HEK-293 TRPM8 เซลล์มั่นคงบรรทัด ซึ่งถูก transiently transfected GFP (0.2 μg) เพียงอย่างเดียว (ใส่ G หรือ scPPX1 โคลน (0.4 μg) และ GFP (0.2 μg) (แผง H) สรุปการแสดงในแผงผมที่ −100 และ 100 mV

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

รูปที่ 1 การยับยั้งกระแส TRPM8 โดยยึด scPPX1 ในแพทช์ทั้งเซลล์ แผงบน: เซลล์ทั้งวัดยึดแพทช์ของเมนทอลกระแสที่เกิดขึ้นได้รับการดำเนินการที่ -60 mV ในการกำหนดค่าทั้งเซลล์เซลล์ HEK แสดง TRPM8 ในนาม Ca2 + ปราศจากการแก้ปัญหา (NCF) เพื่อหลีกเลี่ยงการ desensitization พัเมนทอล (500 ไมครอน) ถูกนำไปใช้ในครั้งแรก 3-5 นาทีหลังจากที่สถานประกอบการตั้งค่าทั้งเซลล์ HEK-293 เซลล์ถูก transfected transiently กับ TRPM8 (0.4 ไมโครกรัม) และผู้ร่วม transfected กับ GFP โคลน (0.2 ไมโครกรัม) เพื่อให้การตรวจสอบ ของเซลล์ transfected แผง A: การควบคุม แผง B: การแก้ปัญหาปิเปตที่ถูกเสริมด้วย 2.3 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร scPPX1 แผง Midle: เซลล์ทั้งยึดแพทช์ได้รับการดำเนินการเกี่ยวกับ HEK-293 TRPM8 เซลล์ที่มีเสถียรภาพซึ่ง transfected transiently กับ GFP (0​​.2 ไมโครกรัม) เพียงอย่างเดียว (แผง D) หรือ scPPX1 โคลน (0.4 ไมโครกรัม) และ GFP (0​​.2 ไมโครกรัม) (แผง E) สรุปที่แสดงอยู่ในแผงเอฟโปรโตคอลการทดลองเป็นเช่นเดียวกับการวัดในแผงบน แผงล่าง: ปัจจุบัน / ความสัมพันธ์กับแรงดันไฟฟ้าของช่องทางที่ได้รับใน TRPM8 ยึดแพทช์ทั้งเซลล์ดำเนินการใน 100 -100 mV ทางลาดสำหรับแรงดันไฟฟ้า HEK-293 TRPM8 เซลล์ที่มีเสถียรภาพซึ่ง transfected transiently กับ GFP (0​​.2 ไมโครกรัม) เพียงอย่างเดียว (แผง G) หรือ scPPX1 โคลน (0.4 ไมโครกรัม) และ GFP (0​​.2 ไมโครกรัม) (แผง H) สรุปที่แสดงอยู่ในแผงที่ฉัน -100 และ 100 mV

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

รูปที่ 1 การยับยั้ง trpm8 กระแสทั้งในเซลล์โดย scppx1 patch clamp แผงบนทั้ง Patch Clamp : เซลล์วัดเมนทอลชักนำกระแสแสดงที่− 60 เพลงในการตั้งค่าทั้งเซลล์ในเซลล์ hek แสดง trpm8 ในนามแคลเซียม -- โซลูชั่นฟรี ( ncf ) เพื่อหลีกเลี่ยงการขจัดความรู้สึก .เมนทอลกะพริบ ( 500 μ M ) มาใช้ครั้งแรก 3 – 5 นาทีหลังจากการปรับแต่งทั้งเซลล์ : hek-293 เซลล์มีบุคคลหรือสิ่งที่อยู่ชั่วคราว transfected กับ trpm8 ( μ 0.4 กรัม ) และ CO transfected ด้วยโคลน ( GFP μ 0.2 กรัม ) เพื่อให้ตรวจสอบ transfected เซลล์ แผง : การควบคุม แผง B : ปิเปตสารละลายอาหาร 2.3 μ g / ml scppx1 . แผงกลาง :แผ่นหนีบทั้งเซลล์มีการ hek-293 trpm8 ไพรทีที่มั่นคง ซึ่งเป็นบุคคลหรือสิ่งที่อยู่ชั่วคราว transfected กับ GFP ( μ 0.2 กรัม ) อยู่คนเดียว ( แผง D ) หรือ scppx1 โคลน ( μ 0.4 กรัม ) และ GFP ( μ 0.2 กรัม ) ( แผง E ) สรุปจะแสดงในแผง F โปรโตคอลการทดลองก็เหมือนวัดในแผงด้านบน แผงล่าง :ความสัมพันธ์ในปัจจุบัน / แรงดันไฟฟ้าได้ในช่อง trpm8 ทั้งเซลล์ยึดปฏิบัติในแพทช์− 100 100 หาบแรงดันไฟฟ้าทางลาดสำหรับ hek-293 trpm8 ไพรทีที่มั่นคง ซึ่งเป็นบุคคลหรือสิ่งที่อยู่ชั่วคราว transfected กับ GFP ( μ 0.2 กรัม ) อยู่คนเดียว ( แผงกรัม ) หรือ scppx1 โคลน ( μ 0.4 กรัม ) และ GFP ( μ 0.2 กรัม ) ( แผง H ) . สรุปจะแสดงในแผงผมที่− 100 MV