Total RNA (12 lg per track) was siz

Total RNA (12 lg per track) was size-fractionated on a 1.2% (w/v) agarose–formaldehyde gel and blotted onto nylon membranes (Hybond-N, Amersham Biosciences, Buckinghamshire, UK), which were hybridized with [32P]DNA-labelled homologous probes of PpACO1, LIM, polygalacturonase (PG), PpExp1, and pectatelyase (PL) genes according to Ziosi et al. (2006). PpACO1, PG, PpExp1, and PL probes were obtained as previously described (Ruperti et al., 2001; Trainotti et al., 2003); for LIM, an expressed sequence tag (PPLea0021C04) obtained from Clemson University (SC, USA) was used. Following hybridization, membranes were washed and exposed to an imaging plate (Fujifilm, Tokyo, Japan) for 30 min (PpACO1) and 4 h (LIM, PG, PpExp1, and PL) at room temperature. The images were then acquired with an IP-fluorescent Reader FLA-3000 series (Fujifilm). Equal loading of gels was verified by ethidium bromide staining of RNA

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

อาร์เอ็นเอทั้งหมด (12 lg ต่อติดตาม) ได้แบ่งขนาดบนเจ 1.2% (w/v) agarose – ฟอร์มาลดีไฮด์ และ blotted บนเยื่อหุ้มไนลอน (Hybond N, Amersham เวลาออก บักกิงแฮมเชอร์ อังกฤษ), ซึ่งเป็นกับ [32P] ดีเอ็นเอมัน homologous คลิปปากตะเข้ PpACO1, LIM, polygalacturonase (PG), PpExp1 และ pectatelyase (PL) ยีนตาม Ziosi et al. (2006) คลิปปากตะเข้ PpACO1, PG, PpExp1 และ PL ได้รับมาเป็นอธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Ruperti และ al., 2001 Trainotti และ al., 2003); สำหรับริม ถูกใช้เป็นป้ายแสดงลำดับ (PPLea0021C04) ได้รับจากมหาวิทยาลัย Clemson (SC, USA) ต่อ hybridization เยื่อหุ้มถูกล้าง และสัมผัสกับการถ่ายภาพจาน (มาก ๆ โตเกียว ญี่ปุ่น) 30 นาที (PpACO1) และ 4 h (LIM, PG, PpExp1 และ PL) ที่อุณหภูมิห้อง ภาพได้แล้วมากับชุดข้อมูล IP-ฟลูออเรสเซนต์อ่านสัมภาษณ์ของสมาคม-3000 (มาก ๆ) โหลดเท่าของเจถูกตรวจสอบ โดย ethidium โบรไมด์ย้อมสีของอาร์เอ็นเอ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

รวมอาร์เอ็นเอ (12 LG ต่อแทร็ค) เป็นขนาด fractionated บน 1.2% (w / v) เจล agarose-ลดีไฮด์และเปื้อนบนเยื่อไนลอน (Hybond-N, Amersham ชีววิทยาศาสตร์ Buckinghamshire สหราชอาณาจักร) ซึ่งเป็นไฮบริดด้วย [32P] ดีเอ็นเอที่มีข้อความโพรบคล้ายคลึงกันของ PpACO1, LIM, polygalacturonase (PG) PpExp1 และ pectatelyase (PL) ยีนตาม Ziosi et al, (2006) PpACO1, PG, PpExp1 และฟิวส์ PL ที่ได้รับตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Ruperti et al, 2001;.. Trainotti, et al, 2003); สำหรับ LIM, ป้ายแสดงลำดับ (PPLea0021C04) ที่ได้รับจากมหาวิทยาลัยเคลมสัน (เซาท์แคโรไลนาสหรัฐอเมริกา) ถูกนำมาใช้ ต่อไปนี้การผสมพันธุ์เยื่อถูกล้างและสัมผัสกับการถ่ายภาพแผ่น (Fujifilm, กรุงโตเกียวประเทศญี่ปุ่น) เป็นเวลา 30 นาที (PpACO1) และ 4 h (LIM, PG, PpExp1 และ PL) ที่อุณหภูมิห้อง ภาพที่ได้รับมาแล้วที่มีผู้อ่าน IP-เรืองแสงชุด FLA-3000 (Fujifilm) โหลดเท่ากันของเจลได้รับการตรวจสอบโดยการย้อมสีโบรไมด์ ethidium ของอาร์เอ็นเอ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

อาร์เอ็นเอทั้งหมด ( 12 ) ต่อติดตาม ) ถูกพบในขนาด 1.2 % ( w / v ) และฟอร์มาลดีไฮด์เจล , และเยื่อไนลอน ( hybond-n เปื้อนลงบนชาม ชีววิทยาศาสตร์ , บัคคิงแฮมเชอร์ , UK ) ซึ่งเป็น DNA ที่มีความคล้ายคลึงกับ [ 32p ] ฟิวส์ของ ppaco1 ลิม เอนไซม์ polygalacturonase ( PG ) , ppexp1 , และ pectatelyase ( PL ) ยีนตาม ziosi et al . ( 2006 ) ppaco1 ppexp1 PG ,ที่คุณใช้และได้รับตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( รูเปิร์ทตี้ et al . , 2001 ; trainotti et al . , 2003 ) ; สำหรับลิม , แสดงลำดับแท็ก ( pplea0021c04 ) ที่ได้รับจากมหาวิทยาลัยเคลมสัน ( SC , USA ) คือใช้ ต่อไปนี้ probes membranes ถูกล้างและตากภาพจาน ( Fujifilm , โตเกียว , ญี่ปุ่น ) สำหรับ 30 นาที ( ppaco1 ) 4 H ( ลิม , PG , ppexp1 และ PL ) ที่อุณหภูมิห้องรูปแล้วได้มากับ IP เรืองแสงอ่าน fla-3000 ชุด ( Fujifilm ) โหลดเท่าเจลถูกตรวจสอบความถูกต้องโดยคู่ bromide staining .