A total of forty seven isolates wer

A total of forty seven isolates were collected from four red-fruited cultivars showing GLD symptoms in seven different vineyards. Selected isolates were tested by double antibody sandwich (DAS)-ELISA using a commercial kit (Agritest, Valenzano-Bari, Italy). A 332 nucleotide (nt) fragment of the heat shock protein homologue (HSP70h) gene was amplified by one-tube RT-PCR method (Rowhani et al., 2000).
The forward primer (5’-ATAATTCGGCGTACATCCCCACTT-3’) and reverse primer: (5’-
GCCCTCCGCGCAACTAATGACAG-3’) used in RT-PCR were identical to nt 9136-9159 and complementary to nt 9445-9467, respectively, in the sequence of a New York isolate of GLRaV-2 (GenBank Accession # AF039204). The amplicons were cloned into pCR2.1 vector (Invitrogen Corp, Carlsbad, CA). Two independent clones were sequenced from both orientations and a consensus sequence was obtained for each isolate. Nucleotide and predicted amino acid sequences were aligned and compared using Vector NTI Advance10 software (Invitrogen). Multiple sequence alignments were performed using ClustalW (BioEdit version7.0.5.3 [Ibis Therapeutics, Carlsbad, CA]). Phylogenetic analysis was carried out by the neighbor-joining method using PAUP Version4.0b10 software (Sinauer Associates, Inc., Sunderland, MA). Corresponding sequences of GLRaV-2 isolates available in GenBank (AF039204, USA; AY881628, South Africa; Y14131, Italy; Y15890, France) were included in these analyses.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

จำนวนสี่สิบเจ็ดแยกถูกเก็บรวบรวมจากสี่แดง fruited พันธุ์แสดงอาการ GLD ในไร่องุ่นต่าง ๆ 7 แยกเลือกทดสอบ โดยแอนติบอดีคู่แซนวิช (DAS) -ELISA ที่ใช้ชุดพาณิชย์ (Agritest, Valenzano บา อิตาลี) ส่วนนิวคลีโอไทด์ 332 (nt) ของความร้อนช็อกโปรตีน homologue (HSP70h) ยีนถูกขยาย โดยวิธี RT-PCR หนึ่งหลอด (Rowhani et al., 2000) รองพื้นไปข้างหน้า (5'-ATAATTCGGCGTACATCCCCACTT-3') และกลับวัสดุรองพื้น: (5'-GCCCTCCGCGCAACTAATGACAG-3') ใช้ใน RT-PCR ได้เหมือนกับ nt 9136-9159 และเสริมการ nt 9445-9467 ตามลำดับ ในลำดับของนิวยอร์กแยก GLRaV-2 (AF039204 # GenBank ทะเบียน) Amplicons ถูกโคลนเป็นเวกเตอร์ pCR2.1 (Invitrogen Corp คาร์ลส CA) โคลนเป็นอิสระสองถูกเรียงลำดับจากทั้งสองแนว และลำดับมติไม่ได้แยกแต่ละ นิวคลีโอไทด์และกรดอะมิโนคาดการณ์ลำดับสอดคล้อง และเปรียบเทียบโดยใช้ซอฟต์แวร์ Advance10 เวกเตอร์ NTI (Invitrogen) จัดลำดับหลายแนวที่ดำเนินการโดยใช้ ClustalW (BioEdit version7.0.5.3 [Therapeutics ไอบิส คาร์ลส CA]) วิเคราะห์ phylogenetic ถูกดำเนิน โดยรวมใกล้เคียงวิธีการใช้ซอฟต์แวร์ PAUP Version4.0b10 (สมาคม Sinauer, Inc. ซันเดอร์แลนด์ MA) ลำดับที่สอดคล้องกันของ GLRaV-2 แยกใน GenBank (AF039204 สหรัฐอเมริกา AY881628 แอฟริกาใต้ Y14131 อิตาลี Y15890 ฝรั่งเศส) รวมอยู่ในการวิเคราะห์เหล่านี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

รวมสี่สิบเจ็ดสายพันธุ์ที่ถูกเก็บรวบรวมจากสี่สายพันธุ์สีแดง fruited แสดงอาการ GLD เจ็ดไร่องุ่นที่แตกต่างกัน เลือกสายพันธุ์ที่ได้รับการทดสอบโดยแซนวิชแอนติบอดีคู่ (DAS) -ELISA โดยใช้ชุดการค้า (Agritest, Valenzano-บารี, อิตาลี) 332 เบื่อหน่าย (เอ็นที) ส่วนของการช็อกความร้อนโปรตีนที่คล้ายคลึงกันนี้ (HSP70h) ยีนถูกขยายโดยหนึ่งหลอดวิธี RT-PCR (Rowhani et al., 2000).
ไพรเมอร์ไปข้างหน้า (5'-ATAATTCGGCGTACATCCCCACTT-3) และย้อนกลับ ไพรเมอร์ (5'-
GCCCTCCGCGCAACTAATGACAG-3 ') ที่ใช้ใน RT-PCR เหมือนกับเอ็นที 9136-9159 และประกอบกับเอ็นที 9445-9467 ตามลำดับในลำดับของแยกนิวยอร์ก GLRaV-2 (GenBank ภาคยานุวัติ # AF039204 ) amplicons ถูกโคลนเป็นเวกเตอร์ pCR2.1 (Invitrogen คอร์ป, คาร์ลส, แคลิฟอร์เนีย) สองโคลนอิสระมีลำดับขั้นตอนจากทั้งทิศทางและลำดับความเห็นเป็นเอกฉันท์ที่ได้รับสำหรับแยกแต่ละ เบื่อหน่ายและคาดการณ์ลำดับกรดอะมิโนถูกจัดชิดและเมื่อเทียบกับการใช้ซอฟแวร์เวกเตอร์ NTI Advance10 (Invitrogen) การจัดแนวลำดับหลายได้รับการดำเนินการโดยใช้ ClustalW (BioEdit version7.0.5.3 [บำบัดไอบิส, คาร์ลส, CA]) การวิเคราะห์วิวัฒนาการได้ดำเนินการโดยวิธีการที่เพื่อนบ้านเข้าใช้ซอฟต์แวร์ PAUP Version4.0b10 (Sinauer Associates, Inc, ซันเดอร์ MA) ที่สอดคล้องกับลำดับของ GLRaV-2 แยกที่มีอยู่ใน GenBank (AF039204 สหรัฐอเมริกา; AY881628, แอฟริกาใต้; Y14131 อิตาลี; Y15890 ฝรั่งเศส) ถูกรวมอยู่ในการวิเคราะห์เหล่านี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

จำนวน 47 ไอโซเลตเป็นจำนวนสี่แดง ผลไม้พันธุ์ที่แสดงอาการ GLD ในเจ็ดไร่องุ่นที่แตกต่างกัน เลือกสายพันธุ์ทดสอบโดยดับเบิ้ลแอนติบอดีแซนวิช ( DAS ) - ELISA โดยใช้ชุดพาณิชย์ ( agritest valenzano , บารี , อิตาลี ) เป็นพวกนิวคลีโอไทด์ ( NT ) ส่วนของฮีตช็อกโปรตีนผิว ( hsp70h ) ยีนที่ถูกขยายโดยวิธี RT-PCR ( หนึ่งหลอด rowhani et al . ,2000 )
รองพื้นไปข้างหน้า ( 5 ' - ataattcggcgtacatccccactt-3 ' ) และ reverse primer ( 5 ' -
gccctccgcgcaactaatgacag-3 ' ) ที่ใช้ในนี้ได้เหมือนกัน 9136-9159 NT และประกอบกับ NT 9445-9467 ตามลำดับในลำดับของนิวยอร์กและ glrav-2 ( ขนาดเข้า# af039204 ) การ amplicons ถูกโคลนเข้าไปในเวกเตอร์ pcr2.1 ( Invitrogen Corp , Carlsbad , CA )สองโคลนอิสระคือ ลำดับจากทั้งสองทิศทางและได้รับฉันทามติลำดับแต่ละไอโซเลท ลำดับเบสและลำดับกรดอะมิโนที่คาดการณ์ ชิดและเปรียบเทียบโดยใช้เวกเตอร์ซอฟแวร์ advance10 NTI ( Invitrogen ) การลำดับหลาย โดยใช้ clustalw ( bioedit version7.0.5.3 ไอบิสคาร์ลสแบด , แคลิฟอร์เนีย ) [ , ] )การวิเคราะห์ ซึ่งกระทำโดยเพื่อนบ้านร่วมโดยใช้ซอฟต์แวร์ version4.0b10 ยาจก ( sinauer Associates , Inc , ซันเดอร์แลนด์ , MA ) ที่ลำดับของ glrav-2 สายพันธุ์ที่มีอยู่ในขนาด ( af039204 สหรัฐอเมริกา ; ay881628 แอฟริกาใต้ ; y14131 , อิตาลี ; y15890 , ฝรั่งเศส ) ถูกรวมอยู่ในการศึกษาเหล่านี้