96 M.H. Phu Ly et al. / Journal of

96 M.H. Phu Ly et al. / Journal of Clinical Virology 70 (2015) 93 – 96

antibodies in serum or in CSF, but it was proper timing for virus isolation.
To isolate the virus, CSF specimen (10ul) was inoculated onto C6/36 mosquito cells and Vero cells (African green monkey kidney). Cells were observed daily for cytopathic effect (CPE) for seven days, RNA was extracted from culture fluid on day seven by using QIAamp Viral RNA mini kit (QIAGEN) and the presence of DENV3 RNA was confirmed by RT-PCR (Table 2) [16]. The complete envelope nucleotide sequences of this isolate (accession no. KP893717) and the two serum-derived DENV3 isolates from different patients with classical dengue fever in Hai Phong, Vietnam (accession nos. KP893718 and KP893719) were determined and deposited in Genbank. Nucleotides sequences were aligned by using MAFFT version 7.215 [17]. The substitution models were selected by jmodeltest-2.1.7 [18] and GTR+I+G was used as the model. Phylogenetic tree was constructed by FigTree software, version 1.4.0. The envelope sequence of the three strains did not show any difference in nucleotide and amino acid substitutions. However, the ongoing full genome analysis showed Leu-3029-Phe and Thr-4077-Ile mutations in non-structural regions 1 and 2A (NS1 & NS2A) sequences respectively in CSF derived DENV3 strain (data not shown).
Phylogenetic analysis showed the close relationship between this CSF-derived DENV3 and the two serum-derived DENV3 strains and all of them were isolated from different patients in Hai phong, Vietnam in 2013 and were determined to belong to genotype III (Fig. 1). Previously, genotype II had been circulating in Vietnam (Fig. 1). DENV3 genotype III was reported to be continuously circulating in the Indian subcontinent since the 1960s [19]. Since 2005, this genotype III of DENV3 was increasingly found in Bhutan, Thailand,Laos,Cambodia,Pakistan,China,SenegalandCôted’Ivoire [19–22] (Fig. 1). To our knowledge, this is the first report describing the emergence of DENV3 genotype III in Vietnam in 2013.
In conclusion, dengue encephalitis is a rarely reported infection, however, its detection tends to increase the threat to global human health. Despite the unusual manifestations and challenges in diagnosis, DE should be investigated further in all patients with encephalitis regardless of the absence of classical dengue features.
Funding
ThisworkwasfundedbytheGrant-in-AidforScientificResearch (KAKENHI No. 24659210); Global Center of Excellence Program, Ministry of Education, Culture, Sports, Science and Technology, Japan; e-Asia Joint Research Program, Japan Science and Technology Agency (JST), Japan; Japan Initiative for Global Research Network on Infectious Diseases; Research on Emerging and Reemerging Infectious Diseases, JST, Japan (H23-shinkou-ippan-010); and grant(s) in aid for scientific research by the Ministry of Health, Labour and Welfare, Japan.
Competing interests
The authors have declared that no competing interests exist.
Ethical approval
This study was approved by the Institutional Review Board of NIHE, Vietnam (No.15-HDD, January 18, 2011).
Acknowledgements
We thank Dr. Ngo Chi Cuong of the Department of Internal Medicine, Institute of Tropical Medicine, Nagasaki, Japan and Bach Mai Hospital, Hanoi, Vietnam for helping in the collection of clinical data. We thank Dr. Mya Myat Ngwe Tun, Dr. Leo Uchida and Mr. Adung’o Ferdinard, who are all members of the Department of Virology, Institute of Tropical Medicine, Nagasaki University, Nagasaki, Japan for providing technical advice. This research is partially supported by from Japan Agency for Medical Research and development, AMED.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

96 M.H. ภูลี et al. / สมุดรายวันของคลินิกชเป็น 70 (2015) 93-96 แอนตี้ ในซีรั่ม หรือ CSF แต่มันเป็นช่วงเวลาที่เหมาะสมสำหรับการแยกไวรัสการแยกเชื้อ สิ่งส่งตรวจ CSF (10ul) ถูก inoculated C6/36 เซลล์ยุงและเซลล์ Vero (ไตลิงเขียวแอฟริกา) เซลล์ได้สังเกตทุกวันสำหรับผล cytopathic (CPE) เจ็ดวัน อาร์เอ็นเอที่สกัดจากน้ำมันวัฒนธรรมในวันเจ็ดโดยอาร์เอ็นเอไวรัส QIAamp ชุดมินิ (QIAGEN) และของอาร์เอ็นเอ DENV3 ได้รับการยืนยัน โดย RT-PCR (ตารางที่ 2) [16] ลำดับนิวคลีโอไทด์ที่สมบูรณ์ซองของแยกนี้ (ทะเบียนไม่ KP893717) และสองมาเซรั่ม DENV3 ที่แยกได้จากผู้ป่วยที่แตกต่างกันมีไข้คลาสสิกไฮพงษ์ เวียดนาม (หมายเลขทะเบียน KP893718 และ KP893719) ได้ถูกกำหนด และฝากใน Genbank มีจัดลำดับนิวคลีโอไทด์ โดยใช้ MAFFT รุ่น 7.215 [17] เลือกรูปแบบแทน โดย jmodeltest-2.1.7 [18] และใช้ GTR + ฉัน + G เป็นรูปแบบ Phylogenetic tree ถูกสร้าง โดยซอฟต์แวร์ FigTree เวอร์ชัน 1.4.0 ลำดับที่ซองจดหมายของสายพันธุ์ที่สามได้แสดงความแตกต่างในนิวคลีโอไทด์และกรดอะมิโนแทน อย่างไรก็ตาม การวิเคราะห์จีโนมอย่างต่อเนื่องเต็มพบเพลือ-3029 และ Thr-4077-เมากลายพันธุ์ในภูมิภาคไม่ใช่โครงสร้างที่ 1 และ 2 เอ (NS1 และ NS2A) ลำดับลำดับใน CSF ได้มาต้องใช้ DENV3 (ข้อมูลไม่แสดง)วิเคราะห์ phylogenetic พบที่ความสัมพันธ์ระหว่าง CSF มาที่ DENV3 และทั้งสองได้รับเซรั่มสายพันธุ์ DENV3 และทั้งหมดของพวกเขาถูกแยกจากผู้ป่วยอื่นใน Hai phong เวียดนามในปี 2013 และถูกกำหนดเป็นลักษณะทางพันธุกรรม III (Fig. 1) ก่อนหน้านี้ ลักษณะทางพันธุกรรม II ได้รับการหมุนเวียนในเวียดนาม (Fig. 1) ลักษณะทางพันธุกรรม DENV3 III เป็นรายงานที่มีอย่างต่อเนื่องหมุนเวียนในอนุทวีปอินเดียตั้งแต่ปี 1960 [19] 2548 ลักษณะทางพันธุกรรมนี้ III DENV3 มากขึ้นพบในภูฏาน ไทย ลาว กัมพูชา ปากีสถาน จีน SenegalandCôted'Ivoire [19-22] (Fig. 1) ความรู้ของเรา นี้เป็นรายงานแรกที่อธิบายการเกิดขึ้นของลักษณะทางพันธุกรรม DENV3 III ในเวียดนามในปี 2013เบียดเบียน ไข้เลือดออกโรคไข้สมองอักเสบเป็นการติดเชื้อไม่ค่อยรายงาน อย่างไรก็ตาม การตรวจมีแนวโน้ม เพิ่มภัยคุกคามต่อสุขภาพมนุษย์โลก แม้ มีลักษณะผิดปกติและความท้าทายในการวินิจฉัย เดอควรตรวจสอบเพิ่มเติมในผู้ป่วยโรคไข้สมองอักเสบไม่ขาดของไข้เลือดออกคลาสสิกทั้งหมดจัดหาเงินทุนThisworkwasfundedbytheGrant-ใน-AidforScientificResearch (KAKENHI หมายเลข 24659210); โปรแกรมสากลศูนย์เป็นเลิศ กระทรวงศึกษาธิการ วัฒนธรรม กีฬา วิทยาศาสตร์ และเทคโนโลยี ญี่ปุ่น อีเอเชียร่วมวิจัยโปรแกรม ญี่ปุ่นวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีสำนักงาน (JST), ญี่ปุ่น ญี่ปุ่นนวัตกรรมเครือข่ายวิจัยสากลในโรค วิจัยเกิดใหม่ และโรคติดเชื้อ JST ญี่ปุ่น (H23-shinkou-ippan-010); Reemerging และ grant(s) ในความช่วยเหลือสำหรับงานวิจัยทางวิทยาศาสตร์กระทรวงสุขภาพ แรงงาน และสวัสดิการ ญี่ปุ่นสถานที่แข่งขันผู้เขียนได้ประกาศว่า สนใจการแข่งขันไม่มีอยู่อนุมัติจริยธรรมการศึกษานี้ได้รับการอนุมัติ โดยสถาบันตรวจสอบบอร์ดของ NIHE เวียดนาม (ซาน-HDD, 18 มกราคม 2011)ถาม-ตอบเราขอขอบคุณดร.โงชิกวงแผนกทันตกรรม สถาบัน เวชศาสตร์เขตร้อน นางาซากิ ญี่ปุ่น และโรง พยาบาลเชียงใหม่ Bach ฮานอย เวียดนามสำหรับช่วยในการรวบรวมข้อมูลทางคลินิก เราขอขอบคุณดร. Mya Myat Ngwe ทูน ดร.ลีโอ Uchida และนาย Adung'o Ferdinard ที่มีสมาชิกทั้งหมดของแผนกชเป็น สถาบัน เวชศาสตร์เขตร้อน มหาวิทยาลัยนางาซากิ นางาซากิ ญี่ปุ่นให้คำแนะนำทางเทคนิค งานวิจัยนี้เป็นบางส่วนได้รับการสนับสนุนโดยจากญี่ปุ่นตัวแทนสำหรับการวิจัยทางการแพทย์และการพัฒนา อาเหม็ด

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

96 MH ภู Ly et al, / วารสารคลินิกไวรัสวิทยา 70 (2015) 93-96. แอนติบอดีในซีรั่มหรือในน้ำไขสันหลัง แต่มันก็เป็นช่วงเวลาที่เหมาะสมสำหรับการแยกเชื้อไวรัสเพื่อแยกเชื้อไวรัสตัวอย่างน้ำไขสันหลัง(10ul) ได้รับเชื้อเข้าสู่ C6 / 36 เซลล์ยุงและเซลล์เวโร ( แอฟริกันไตลิงสีเขียว) เซลล์ที่ถูกตั้งข้อสังเกตในชีวิตประจำวันเพื่อให้เกิดผล cytopathic (CPE) เจ็ดวัน RNA ถูกสกัดจากของเหลววัฒนธรรมในวันที่เจ็ดโดยใช้ QIAamp ไวรัส RNA มินิชุด (QIAGEN) และการปรากฏตัวของ DENV3 อาร์เอ็นเอได้รับการยืนยันโดย RT-PCR (ตารางที่ 2) [ 16] ซองจดหมายลำดับเบสที่สมบูรณ์ของการแยกนี้ (ภาคยานุวัติไม่มี. KP893717) และทั้งสองแยก DENV3 ซีรั่มที่ได้มาจากผู้ป่วยที่แตกต่างกับโรคไข้เลือดออกคลาสสิกในไฮฟองเวียดนาม (เข้า Nos. KP893718 และ KP893719) ได้รับการพิจารณาและฝากไว้ใน Genbank ลำดับนิวคลีโอถูกจัดชิดโดยใช้รุ่น MAFFT 7.215 [17] รุ่นทดแทนได้รับเลือกโดย jmodeltest-2.1.7 [18] และ GTR + I + G ถูกใช้เป็นรูปแบบ Phylogenetic ต้นไม้ที่ถูกสร้างขึ้นโดยซอฟต์แวร์ Figtree รุ่น 1.4.0 ลำดับซองจดหมายของทั้งสามสายพันธุ์ที่ไม่ได้แสดงความแตกต่างในเบื่อหน่ายและอะมิโนกรดแทน อย่างไรก็ตามอย่างต่อเนื่องการวิเคราะห์จีโนมเต็มรูปแบบที่แสดงให้เห็น Leu-3029 เพและการกลายพันธุ์ที่นั่น-4077-Ile ในภูมิภาคที่ไม่ใช่โครงสร้างที่ 1 และ 2A (NS1 และ NS2A) ลำดับตามลำดับในน้ำไขสันหลังได้รับความเครียด DENV3 (ไม่ได้แสดงข้อมูล). การวิเคราะห์วิวัฒนาการแสดงให้เห็นว่า ความสัมพันธ์ใกล้ชิดระหว่างนี้ DENV3 CSF มาและทั้งสองสายพันธุ์ DENV3 ซีรั่มที่ได้มาและพวกเขาทั้งหมดถูกแยกจากผู้ป่วยที่แตกต่างกันใน Hai Phong เวียดนามในปี 2013 และได้รับการพิจารณาจะเป็นพันธุ์ที่สาม (รูปที่ 1). ก่อนหน้านี้จีโนไทป์ครั้งที่สองที่ได้รับการไหลเวียนในเวียดนาม (รูปที่ 1). DENV3 จีโนไทป์ที่สามได้รับการรายงานอย่างต่อเนื่องที่จะหมุนเวียนในอนุทวีปอินเดียตั้งแต่ปี 1960 [19] ตั้งแต่ปี 2005 จีโนไทป์ที่สามของ DENV3 นี้ถูกพบมากขึ้นเรื่อย ๆ ในภูฏาน, ไทย, ลาว, กัมพูชา, ปากีสถาน, จีน, SenegalandCôted'Ivoire [19-22] (รูปที่ 1). เพื่อความรู้ของเรานี้เป็นรายงานแรกที่อธิบายถึงการเกิดขึ้นของจีโนไทป์ DENV3 ที่สามในเวียดนามในปี 2013 สรุปได้ว่าโรคไข้สมองอักเสบโรคไข้เลือดออกเป็นโรคติดเชื้อรายงานไม่ค่อยอย่างไรก็ตามการตรวจสอบที่มีแนวโน้มที่จะเพิ่มขึ้นเป็นภัยคุกคามต่อสุขภาพของมนุษย์ทั่วโลก แม้จะมีอาการผิดปกติและความท้าทายในการวินิจฉัย, DE ควรได้รับการตรวจสอบต่อไปในผู้ป่วยทุกรายที่มีโรคไข้สมองอักเสบโดยไม่คำนึงถึงขาดคุณสมบัติไข้เลือดออกคลาสสิก. เงินทุนThisworkwasfundedbytheGrant ใน AidforScientificResearch (KAKENHI เลขที่ 24659210); ศูนย์ทั่วโลกของโปรแกรมเลิศกระทรวงศึกษาธิการวัฒนธรรมกีฬาวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีญี่ปุ่น E-เอเชียร่วมโครงการวิจัยญี่ปุ่นวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยี (JST) ประเทศญี่ปุ่น Initiative Japan สำหรับเครือข่ายการวิจัยระดับโลกด้านโรคติดเชื้อ; งานวิจัยเกี่ยวกับอุบัติใหม่และอุบัติซ้ำโรคติดเชื้อ JST ญี่ปุ่น (H23-shinkou-ippan-010); และทุน (s) ในการช่วยเหลือการวิจัยทางวิทยาศาสตร์โดยกระทรวงสาธารณสุขแรงงานและสวัสดิการญี่ปุ่น. การแข่งขันผลประโยชน์ของผู้เขียนได้ประกาศว่าไม่มีความสนใจที่แข่งขันอยู่. อนุมัติจริยธรรมศึกษาครั้งนี้ได้รับการอนุมัติจากคณะกรรมการสถาบันของ NIHE เวียดนาม ( 15-HDD 18 มกราคม 2011). กิตติกรรมประกาศเราขอขอบคุณดร. โงจิ Cuong ของกรมอายุรศาสตร์สถาบันเวชศาสตร์เขตร้อนนางาซากิประเทศญี่ปุ่นและโรงพยาบาลบาคเชียงใหม่กรุงฮานอยประเทศเวียดนามในการช่วยให้การเก็บเงินจากคลินิก ข้อมูล. เราขอขอบคุณดร. ม Myat Ngwe Tun, ดร. ลีโอดะและนาย Adung'o Ferdinard ที่เป็นสมาชิกทั้งหมดของกรมวิทยาสถาบันเวชศาสตร์เขตร้อนมหาวิทยาลัยนางาซากินางาซากิประเทศญี่ปุ่นในการให้คำแนะนำทางเทคนิค งานวิจัยนี้ได้รับการสนับสนุนบางส่วนจากหน่วยงานจากประเทศญี่ปุ่นเพื่อการวิจัยทางการแพทย์และการพัฒนา, การประชุม AMED ครั้ง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

96 m.h. ฝูลี่ et al . / วารสารคลินิกไวรัสวิทยา 70 ( 2015 ) 93 – 96

แอนติบอดีในซีรั่ม หรือในน้ำ แต่มันคือเวลาที่เหมาะสมสำหรับการแยกเชื้อไวรัส .
เพื่อแยกไวรัสตัวควบแน่น ( 10ul ) เป็นเชื้อเข้าสู่เซลล์ C6 / 36 ยุงเวโรเซลล์ ( ลิงเขียวแอฟริกันและไต ) เซลล์ที่พบในชีวิตประจำวัน cytopathic Effect ( CPE ) สำหรับ 7 วันซึ่งสกัดจากวัฒนธรรมของของไหลในเจ็ดวัน โดยใช้ qiaamp ไวรัส RNA ขนาดเล็กชุด ( เพิ่ม ) และการแสดงตนของ denv3 RNA ถูกยืนยันโดยวิธี RT-PCR ) ( ตารางที่ 2 ) [ 16 ] ลำดับของนิวคลีโอไทด์ที่สมบูรณ์ ซองนี้แยก ( หนังสือไม่ kp893717 ) และสองระดับที่แยกได้จากผู้ป่วยได้ denv3 แตกต่างกับคลาสสิกไข้เลือดออกในไฮฟอง , เวียดนาม ( ภาคยานุวัติ NOSkp893718 kp893719 ) และวิเคราะห์และฝากบริเวณ ลำดับนิวคลีโอไทด์ ชิด โดยใช้ mafft รุ่น 7.215 [ 17 ] ทดแทนรุ่น จำนวน jmodeltest-2.1.7 [ 18 ] และ GTR ฉัน G ถูกใช้เป็นแบบจำลอง phylogenetic ต้นไม้ถูกสร้างขึ้นโดยซอฟต์แวร์ ฟิ๊กทรี รุ่น : .ซองจดหมายลำดับ 3 สายพันธุ์ไม่มีความแตกต่างในลำดับเบสและกรดอะมิโนแทนได้ อย่างไรก็ตาม การวิเคราะห์จีโนมเต็มอย่างต่อเนื่องพบ leu-3029-phe และการกลายพันธุ์ thr-4077-ile ไม่ใช่โครงสร้างภาค 1 และ 2A ( 1 & ns2a ) ลำดับตามลำดับในน้ำไขสันหลังได้ denv3 สายพันธุ์ ( ข้อมูลไม่แสดง ) .
การวิเคราะห์ phylogenetic พบความสัมพันธ์ระหว่างนี้ได้มา denv3 CSF และ 2 เซรั่มได้ denv3 และทั้งหมดของพวกเขาเป็นสายพันธุ์ที่แยกได้จากผู้ป่วยที่แตกต่างกันในไฮฟอง , เวียดนาม ในปี 2013 และได้มาอยู่ใน genotype III ( รูปที่ 1 ) ก่อนหน้านี้ จีโนไทป์ II ได้หมุนเวียนในเวียดนาม ( รูปที่ 1 )denv3 genotype III รายงานอย่างต่อเนื่องหมุนเวียนในคาบสมุทรอินเดีย ตั้งแต่ปี 1960 [ 19 ] ตั้งแต่ 2005 , จีโนไทป์ 3 denv3 มากขึ้นพบในภูฏาน คือ ไทย ลาว กัมพูชา ปากีสถาน จีน senegalandc เป็นการ ted'ivoire [ 19 – 22 ] ( รูปที่ 1 ) ความรู้ของเรา นี่เป็นครั้งแรกที่อธิบายการเกิดขึ้นของรายงาน denv3 genotype III ในเวียดนามใน 2013 .
สรุปโรคไข้เลือดออก โรคไข้สมองอักเสบเป็นรายงานไม่ค่อยการติดเชื้อ อย่างไรก็ตามการตรวจสอบมีแนวโน้มที่จะเพิ่มภัยคุกคามต่อสุขภาพของมนุษย์ทั่วโลก แม้จะมีลักษณะอาการที่ผิดปกติและความท้าทายในการวินิจฉัย เดอ ควรจะมีการศึกษาเพิ่มเติมในผู้ป่วยสมองอักเสบไม่ขาดคุณสมบัติคลาสสิกไข้เลือดออก .

thisworkwasfundedbythegrant เงินทุนใน aidforscientificresearch ( kakenhi ไม่24659210 ) ; ศูนย์ทั่วโลกของโปรแกรมที่เป็นเลิศ ของกระทรวงศึกษาธิการ วัฒนธรรม กีฬา วิทยาศาสตร์ และเทคโนโลยี ประเทศญี่ปุ่น โปรแกรมวิจัยร่วม e-asia สำนักงานวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีประเทศญี่ปุ่น ( JST ) ญี่ปุ่น สำหรับการริเริ่มเครือข่ายงานวิจัยทั่วโลกเกี่ยวกับโรคติดเชื้อที่เกิดขึ้นใหม่และการวิจัยในประเทศญี่ปุ่น reemerging โรคติดเชื้อ JST , ญี่ปุ่น ( h23-shinkou-ippan-010 )และให้ ( s ) ในการช่วยเหลือเพื่อการวิจัยทางวิทยาศาสตร์โดยกระทรวงสาธารณสุขแรงงานและสวัสดิการญี่ปุ่น .

สนใจการแข่งขันได้ประกาศว่าไม่มีผู้แข่งขันผลประโยชน์อยู่

จริยธรรมอนุมัติการศึกษานี้ได้รับการอนุมัติโดยคณะกรรมการของสถาบัน nihe , เวียดนาม ( no.15-hdd , 18 มกราคม 2011
กิตติกรรมประกาศ )
เราขอขอบคุณ ดร. โงชิเกืของภาควิชาอายุรศาสตร์สถาบันเวชศาสตร์เขตร้อน นางาซากิ ญี่ปุ่น และ โรงพยาบาล บาค ฮานอย เวียดนาม เพื่อช่วยในการเก็บรวบรวมข้อมูลทางคลินิก ขอขอบคุณ ดร. เมียะมัธ ngwe ตุน ดร. สิงห์ อุชิดะ และนาย adung'o ferdinard ที่มีสมาชิกทั้งหมดของภาควิชาไวรัสวิทยา สถาบันเวชศาสตร์เขตร้อนมหาวิทยาลัยนางาซากิ , นางาซากิ , ญี่ปุ่น สำหรับการให้คำแนะนำทางเทคนิคงานวิจัยนี้ได้รับการสนับสนุนจากหน่วยงานบางส่วนจากญี่ปุ่นเพื่อการวิจัยทางการแพทย์และการพัฒนา
กัน .