Filters were washed at hybridizatio

Filters were washed at hybridization temperature twice for
5 min in a first washing solution (2  SSC, 300 mM NaCl, 30 mM
citrate de sodium, 0.1% w/v SDS) and twice for 5 min in a second
washing solution (0.1  SSC, 15 mM NaCl, 1.5 mM Sodium Citrate,
0.1% w/v SDS). Filters were then incubated in a washing buffer
(150 mM NaCl, 100 mM TriseHCl, pH 7.5) for 1 min at room
temperature (RT) and transferred in blocking solution (150 mM
NaCl, 100 mM TriseHCl, pH 7.5, 0.5% blocking powder [Roche
Diagnostics, Meylan, France]) for 30 min at RT. Stock anti-DIGlabeled
alkaline phosphatase (Roche Diagnostics) was diluted
5000 times in washing buffer (150 mM NaCl, 100 mM TriseHCl, pH
7.5) and each filter was then incubated with 10 mL of diluted anti-
DiG-labeled alkaline phosphatase solution for 30 min, and washed
twice in washing buffer for 15 min. The signal was detected by
using CDP-Star Chemiluminescence substrate (Roche Diagnostics)
in 0.13 mM detection buffer (100 mM NaCl, 100 mM TriseHCl, pH
9.5) per 100 cm2 filter and incubated in plastic bags for 5 min in the
dark. Positive signal were detected by imprint on Lumi-film
chemiluminescent detection film (Roche Diagnostics) after
a 10 min exposition.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ตัวกรองถูกล้างที่อุณหภูมิ hybridization สองครั้งสำหรับ5 นาทีในการแก้ปัญหาการซักครั้งแรก (2 SSC, 300 มม. NaCl, 30 มม.โซเดียมซิเตรต de, 0.1% w/v SDS) และครั้งที่สอง 5 นาทีล้างโซลูชั่น (0.1 SSC, 15 มม. NaCl โซเดียมซิเตรต 1.5 มม.0.1% w/v SDS) ตัวกรองได้รับการกกแล้วในบัฟเฟอร์ซักผ้า(150 มม NaCl, 100 มม. TriseHCl, pH 7.5) 1 นาทีที่ห้องอุณหภูมิ (RT) และโอนย้ายในโซลูชั่นการบล็อค (150 มม.NaCl, TriseHCl, pH 7.5, 100 mM 0.5% บล็อกผง [โรชการวินิจฉัย Meylan ฝรั่งเศส]) สำหรับ 30 นาทีเวลาสต็อก rt.ต่อต้าน-DIGlabeledด่าง phosphatase (Roche วินิจฉัย) ถูกเจือจาง5000 ครั้งในล้างบัฟเฟอร์ (150 มม. NaCl, 100 มม. TriseHCl, pH7.5) และแต่ละตัวกรองแล้วมี incubated มี 10 mL เจือจางป้องกัน-ป้ายขุดด่าง phosphatase โซลูชันสำหรับ 30 นาที และล้างในบัฟเฟอร์ซัก 15 นาที สัญญาณตรวจพบใช้พื้นผิวดาว CDP Chemiluminescence (Roche วินิจฉัย)ในบัฟเฟอร์ตรวจ 0.13 มม. (100 มม. NaCl, 100 มม. TriseHCl, pH9.5) ต่อ 100 cm2 กรองและรับการกกในถุงพลาสติกสำหรับ 5 นาทีในการมืด ตรวจพบสัญญาณบวก โดยประทับบน Lumi-ฟิล์มตรวจจับ chemiluminescent ฟิล์ม (Roche วินิจฉัย) หลังจากนิทรรศการเป็น 10 นาที

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ฟิลเตอร์ถูกล้างที่อุณหภูมิผสมพันธุ์สองครั้งสำหรับ
5 นาทีในการแก้ปัญหาการซักครั้งแรก (2? SSC, 300 มิลลิเมตรโซเดียมคลอไรด์, 30 มิลลิเมตร
ซิเตรทโซเดียม, 0.1% w / v SDS) และครั้งที่สองเป็นเวลา 5 นาทีในสอง
วิธีการแก้ปัญหาซักผ้า (0.1? SSC, 15 มมโซเดียมคลอไรด์ 1.5 มิลลิโซเดียมซิเตรต,
0.1% w / v SDS) ฟิลเตอร์ถูกบ่มแล้วในบัฟเฟอร์ซักผ้า
(150 มิลลิเมตรโซเดียมคลอไรด์, 100 มิลลิเมตร TriseHCl ค่า pH 7.5) เป็นเวลา 1 นาทีที่ห้อง
อุณหภูมิ (RT) และย้ายในการแก้ปัญหาการปิดกั้น (150 มิลลิเมตร
โซเดียมคลอไรด์, 100 มิลลิเมตร TriseHCl พีเอช 7.5, 0.5% ผงปิดกั้น [Roche
Diagnostics, เมย์ลัน, ฝรั่งเศส]) เป็นเวลา 30 นาทีที่ RT หุ้นต่อต้าน DIGlabeled
อัลคาไลน์ฟอสฟา (Roche Diagnostics) ถูกเจือจาง
5000 ครั้งในบัฟเฟอร์ซักผ้า (150 มิลลิเมตรโซเดียมคลอไรด์, 100 มิลลิเมตร TriseHCl ค่า pH
7.5) และตัวกรองแต่ละตัวถูกบ่มแล้วกับ 10 มิลลิลิตรเจือจางต่อต้าน
การแก้ปัญหา phosphatase ขุดป้ายกำกับอัลคาไลน์ 30 นาทีและล้าง
สองครั้งในบัฟเฟอร์ซักผ้านาน 15 นาที สัญญาณที่ถูกตรวจพบโดย
ใช้ CDP-Star chemiluminescence สารตั้งต้น (Roche Diagnostics)
ใน 0.13 มิลลิบัฟเฟอร์การตรวจสอบ (100 มิลลิเมตรโซเดียมคลอไรด์, 100 มิลลิเมตร TriseHCl ค่า pH
9.5) ต่อ 100 cm2 กรองและบ่มในถุงพลาสติกเป็นเวลา 5 นาทีใน
ที่มืด สัญญาณบวกถูกตรวจพบโดยประทับบน Lumi ฟิล์ม
ภาพยนตร์การตรวจสอบ chemiluminescent (Roche Diagnostics) หลังจากที่
การแสดงออก 10 นาที

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ตัวกรองที่ถูกล้างที่อุณหภูมิทำสองครั้ง5 นาทีในน้ำยาซักผ้าก่อน ( 2 SSC 300 มม. ขนาด 30 มม.โซเดียมซิเตรท เดอ 0.1 % W / V SDS ) และสองครั้งเป็นเวลา 5 นาทีในวินาทีการแก้ไข ( 0.1 mM NaCl SSC , 15 , โซเดียมซิเตรต 1.5 มม.0.1 % W / V SDS ) กรองแล้ว ) ล้างบัฟเฟอร์( 150 mM NaCl 100 มม. trisehcl pH 7.5 ) เป็นเวลา 1 นาที ที่ห้องอุณหภูมิ ( RT ) และย้ายบล็อกโซลูชั่น ( 150 มม.ขนาด 100 มิล trisehcl pH 7.5 , 0.5% ปิดผง [ โรชการวินิจฉัย , เมย์ลัน , ฝรั่งเศส ) สำหรับ 30 นาทีที่หุ้นกัน diglabeled RT .อัลคาไลน์ฟอสฟาเตส ( โรชวินิจฉัย ) เจือจาง5 , 000 ครั้งในการบัฟเฟอร์ ( 150 mM NaCl 100 มม. trisehcl , พีเอช7.5 ) และตัวกรองแต่ละถูกบ่มกับ 10 มล. เจือจาง ต่อต้านขุดติดระโยงระยางโซลูชั่นสำหรับ 30 นาที แล้วล้างสองครั้งในการบัฟเฟอร์เป็นเวลา 15 นาที สัญญาณที่ตรวจพบโดยใช้ CDP ระดับพื้นผิว ( โรชวินิจฉัย ) เคมีลูมิเนสเซนในบัฟเฟอร์การตรวจหา 0.13 มม. ( 100 mM NaCl 100 มม. trisehcl , พีเอช9.5 ) ต่อ 100 cm2 กรองและบ่มในถุงพลาสติกเป็นเวลา 5 นาทีในมืด สัญญาณบวกถูกตรวจพบโดยรอยบนฟิล์ม ลูมิภาพยนตร์ตรวจสอบ chemiluminescent ( โรชวินิจฉัย ) หลังจาก10 นาที ปกรณ์