Cytotoxic Activity Assay. The cells

Cytotoxic Activity Assay. The cells (other than HL-60) were inoculated at 5 × 103 cells/well in 96-microwell plates (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ) unless otherwise stated. After 48 h, the medium was removed by suction with an aspirator and replaced with 0.1 mL of fresh medium containing different test compound concentrations. Each test compound was dissolved in DMSO at a concentration of 80 mM. The first well contained 800 µM of the test compound and was sequentially diluted 2-fold, with three replicate wells for each concentration. The cells were incubated for an additional 48 h, and the relative viable cell number was determined by the 3-(4,5- dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) method. Briefly, the cells were washed with phosphate-buffered saline without calcium and magnesium, which was replaced with fresh culture medium containing 0.2 mg/mL MTT, and the cells were incubated for another 4 h. The cells were lysed with 0.1 mL of DMSO, and the absorbance of the cell lysate at 540 nm (A540) was determined using a microplate reader (Biochromatic Labsystem, Helsinki, Finland) (13). The A540 of the control cells was usually in the range from 0.40 to 0.90. The HL- 60 cells were inoculated at 7.5 × 104 cells/0.1 mL in 96-microwell plates, and different concentrations of test compounds were added. After a 48 h incubation, the viable cell number was determined with a hemocytometer under a light microscope after trypan blue staining. The CC50 was determined from the dose-response curve.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

กิจกรรม cytotoxic วิเคราะห์ เซลล์ (ไม่ใช่ HL-60) ได้ inoculated ที่ 5 × 103 เซลล์/ดีในแผ่น 96-microwell (สัน Becton แฟรงคลินทะเลสาบ NJ) เว้นแต่จะระบุเป็นอย่างอื่น หลังจาก 48 h สื่อถูกเอาออก โดยดูดกับ aspirator เป็น แล้วแทนที่ ด้วยของสดขนาดกลางที่มีทดสอบอื่นผสมความเข้มข้น 0.1 มล. สารประกอบแต่ละทดสอบถูกละลายใน DMSO ที่ความเข้มข้น 80 มม. first ดีอยู่ 800 µM ของบริเวณทดสอบ และถูกผสม 2-fold กับบ่อ replicate สามสำหรับแต่ละความเข้มข้นตามลำดับ เซลล์ถูก incubated สำหรับการ h 48 เพิ่มเติม และกำหนดหมายเลขเซลล์แบบสัมพัทธ์ได้ โดยวิธี 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium โบรไมด์ (MTT) Briefly เซลล์ถูกล้าง ด้วยน้ำเกลือ buffered ฟอสเฟต โดยแคลเซียมและแมกนีเซียม ซึ่งถูกแทนที่ ด้วยสดวัฒนธรรมขนาดกลางที่มี 0.2 mg/mL MTT และเซลล์ถูก incubated สำหรับ 4 h อีก เซลล์ถูก lysed กับ 0.1 มล.ของ DMSO, absorbance ของเซลล์ lysate ที่ 540 nm (A540) ถูกกำหนดโดยใช้เครื่องอ่าน microplate (Biochromatic Labsystem เฮลซิงกิ ฟินแลนด์) (13) A540 ของเซลล์ควบคุมมักจะอยู่ในช่วงตั้งแต่ 0.40 ถึง 0.90 เซลล์ HL - 60 ถูก inoculated ที่ 7.5 × 104 เซลล์/0.1 mL ในแผ่น 96 microwell และความเข้มข้นแตกต่างกันของการทดสอบที่มีเพิ่มสาร หลังจากการฟักตัว 48 h หมายเลขเซลล์ทำงานได้ถูกจัดขึ้น ด้วย hemocytometer ภายใต้กล้องจุลทรรศน์แสงหลังจากย้อมสี trypan blue CC50 ถูกกำหนดจากเส้นโค้งการตอบสนองต่อยา

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

cytotoxic กิจกรรม Assay เซลล์ (นอกเหนือ HL-60) เป็นเชื้อที่ 5 × 103 เซลล์ / ดีในแผ่น 96 microwell (Becton ดิกคินสัน, แฟรงคลินเลคส์, นิวเจอร์ซีย์) เว้นแต่จะระบุไว้ หลังจาก 48 ชั่วโมง, สื่อที่ถูกลบออกโดยการดูดกับเครื่องช่วยหายใจและแทนที่ด้วย 0.1 มิลลิลิตรขนาดกลางที่มีความเข้มข้นสดสารทดสอบที่แตกต่างกัน แต่ละการทดสอบสารถูกละลายใน DMSO ที่ความเข้มข้น 80 มม สายแรกที่ดีที่มีอยู่ 800 ไมครอนของสารทดสอบและได้รับการปรับลดตามลำดับ 2 เท่าด้วยซ้ำสามหลุมสำหรับความเข้มข้นของแต่ละคน เซลล์ที่ถูกบ่มสำหรับอีก 48 ชั่วโมงและจำนวนเซลล์ที่มีชีวิตญาติได้รับการกำหนดโดย 3 (4,5- dimethylthiazol-2-YL) โบรไมด์ -2,5-diphenyltetrazolium (MTT) วิธีการ Brie ชั้น y ที่เซลล์ถูกล้างด้วยน้ำเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์โดยไม่มีแคลเซียมและแมกนีเซียมซึ่งถูกแทนที่ด้วยอาหารเลี้ยงเชื้อสดที่มี 0.2 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร MTT และเซลล์ถูกบ่มอีก 4 ชั่วโมง เซลล์ถูก lysed 0.1 มิลลิลิตร DMSO และการดูดกลืนแสงของ lysate เซลล์ที่ 540 นาโนเมตร (A540) ถูกกำหนดโดยใช้เครื่องอ่าน microplate (Biochromatic Labsystem เฮลซิงกิฟินแลนด์) (13) A540 ของเซลล์ที่ควบคุมคือมักจะอยู่ในช่วง 0.40-0.90 HL- 60 เซลล์ที่ถูกเชื้อ 7.5 × 104 เซลล์ / 0.1 มิลลิลิตรในแผ่น 96 microwell และความเข้มข้นที่แตกต่างกันของสารทดสอบที่ถูกเพิ่ม หลังจากบ่ม 48 ชั่วโมงจำนวนเซลล์ที่มีชีวิตถูกกำหนดด้วย hemocytometer ภายใต้กล้องจุลทรรศน์แสงหลังจากการย้อมสี Trypan สีฟ้า CC50 ถูกกำหนดจากเส้นโค้งการตอบสนองยา

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ทกิจกรรมการทดสอบ เซลล์ ( นอกจาก hl-60 ) เป็นเชื้อที่ 5 × 103 เซลล์ในแผ่น ( 96 microwell เบคตอนดิกคินสัน Franklin Lakes , NJ ) เว้นแต่ที่ระบุไว้เป็นอย่างอื่น หลังจาก 48 ชั่วโมง กลางจะถูกลบออกโดยการดูดด้วยเครื่องช่วยหายใจ และแทนที่ด้วย 0.1 มิลลิลิตรอาหารเลี้ยงเชื้อที่มีสารประกอบที่แตกต่างกันการทดสอบสดเข้มข้นทดสอบแต่ละชนิดละลายใน DMSO ที่ความเข้มข้น 80 มม. จึงมีµ RST คือ 800 เมตร และเป็นแบบผสมเจือจางถึง 3 บ่อ , ทำซ้ำสำหรับแต่ละความเข้มข้น เซลล์ที่ถูกบ่มในอีก 48 ชั่วโมง และเทียบเบอร์ได้ถูกกำหนดจาก 3 - ( 4 , 5 - dimethylthiazol-2-yl ) - 2,5-diphenyltetrazolium โบรไมด์ ( MTT ) วิธีบรี fl Y , เซลล์ที่ถูกล้างด้วยเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์โดยแคลเซียมและแมกนีเซียม ซึ่งถูกแทนที่ด้วยสดสื่อวัฒนธรรมที่มี 0.2 mg / ml MTT และเซลล์ก็บ่มต่ออีก 4 ชั่วโมง เซลล์ก็ lysed 0.1 ml ของ DMSO และการดูดกลืนแสงของเซลล์ lysate 540 nm ( a540 ) คือ การพิจารณาพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย ( อ่าน biochromatic labsystem , เฮลซิงกิ , ฟินแลนด์ ) ( 13 )การ a540 ของเซลล์การควบคุมเป็นปกติในช่วงตั้งแต่ 0.40 ถึง 0.90 . ที่ HL - 60 เซลล์ปลูกเชื้อที่ 7.5 × 104 เซลล์ / 0.1 มล. ใน microwell 96 แผ่น และระดับความเข้มข้นของสารทดสอบเพิ่ม หลังจากบ่ม 48 ชั่วโมง เบอร์ที่ทำงาน ตั้งใจกับ hemocytometer ภายใต้กล้องจุลทรรศน์แสงหลังจากไตรแพนสีฟ้า stainingโดยพิจารณาจาก cc50 ความคิดเห็น

โค้ง