The Turner BioSystems TD-700 Labora

The Turner BioSystems TD-700 Laboratory Fluorometer in combination with Molecular Probes' LIVE/DEAD® BacLightTM Bacterial Viability Kit provides a novel two-color fluorescence assay of bacterial viability that allows researchers to quantitatively distinguish live and dead bacteria in minutes, even in a mixed population containing a range of bacterial types. Conventional direct-count assays of bacterial viability are based on metabolic characteristics or membrane integrity. However, methods relying on metabolic characteristics often only work for a limited subset of bacterial groups,(1) and methods for assessing bacterial membrane integrity commonly have high levels of background fluorescence.(2) Both types of determinations suffer from being very sensitive to growth and staining conditions.(3,4)

Materials Required

Turner BioSystems TD-700 Laboratory Fluorometer with standard PMT (P/N 7000-009)
Quartz-halogen lamp (P/N 7000-930)
13 mm round test tube adapter (P/N 7000-981)
Two pairs of filters are required: First pair includes: EX 486 nm filter (P/N 034-0486), EM 520 nm filter (P/N 034-0520). Second pair includes: EX 520 nm filter (P/N 034-0520), EM 325-700 nm (P/N 10-058R) and greater than 610 nm filter (P/N 10-054R).
Filter o-rings (P/N 7000-949)
13 mm x 100 mm borosilicate glass test tubes (P/N 10-031)
LIVE/DEAD® BacLight(TM) Bacterial Viability Kit (catalog number L-7012), supplied by Molecular Probes, Inc., Eugene, OR. This kit consists of three components: Component A, 300 µL of 3.34 mM SYTO 9 in anhydrous DMSO, Component B, 300 µL of 20 mM propidium iodide in anhydrous DMSO, and Component C, 10 mL of BacLight mounting oil (this component is not used in the fluorometric assay described here). One kit is sufficient for analysis of about 65 samples using this protocol. Handling, storage and the use of the reagents should be performed in accordance with the product information sheet supplied by Molecular Probes.
Staphylococcus aureus suspension containing approximately 1 × 10-7 bacteria/mL. To adjust the concentration of the bacterial suspension, take a 3 mL sample in a 10 mm × 10 mm cuvette and measure the optical density at 670 nm (OD670) using a spectrophotometer. 1 × 10-7 bacteria/mL corresponds to OD670 ~0.15. Microcentrifuge (SUREspin(TM) Model 7040, Helena Labs, Beaumont, TX).
Isopropyl alcohol.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เทอร์เนอร์ BioSystems TD-700 ห้องปฏิบัติ Fluorometer ร่วมกับโมเลกุล Probes' LIVE/ตาย ® BacLightTM แบคทีเรียชีวิตชุดช่วยให้การวิเคราะห์นวนิยายสองสี fluorescence ของชีวิตแบคทีเรียที่ช่วยให้นักวิจัย quantitatively แยกแยะแบคทีเรียอยู่ และตายในนาที แม้ในประชากรผสมประกอบด้วยหลากหลายชนิดของแบคทีเรีย ปกติ assays ตรงจำนวนของแบคทีเรียนี้ขึ้นอยู่กับลักษณะที่เผาผลาญหรือเมมเบรนความ อย่างไรก็ตาม วิธีการอาศัยลักษณะเผาผลาญมักจะทำการย่อยของแบคทีเรีย groups,(1) จำกัดและวิธีการประเมินความสมบูรณ์ของเมมเบรนของแบคทีเรียโดยทั่วไปมีพื้น fluorescence ระดับสูง(2) ประสบ determinations ทั้งสองชนิดมีความสำคัญมากในการเจริญเติบโต และสภาพการย้อมสี(3, 4)

วัสดุที่จำเป็น

เทอร์เนอร์ BioSystems Fluorometer TD-700 ห้องปฏิบัติการกับมาตรฐาน PMT (P/N 7000-009)
ควอตซ์เจน (P/N 7000-930)
13 มม.ปัดเศษหลอดทดสอบการ์ด (P/N 7000-981)
สองคู่ของตัวกรองจำเป็น: คู่แรกรวม: EX 486 nm กรอง (P/N 034-0486), EM 520 nm ตัวกรองข้อมูล (P/N 034-0520) คู่ที่สองมี: EX 520 nm 325-700 นาโนเมตร (P/N 10 058R) EM (P/N 034-0520), กรองมากกว่า 610 nm กรอง (P/N 10 054R) .
กรองโอริง (P/N 7000-949)
หลอดทดสอบแก้ว borosilicate 13 มม. x 100 มม. (P/N 10-031)
LIVE/ตาย ® BacLight(TM) แบคทีเรียนี้ชุด (แค็ตตาล็อกจำนวน L 7012), จัด โดยโมเลกุลคลิปปากตะเข้ Inc., Eugene, OR ชุดนี้ประกอบด้วยส่วนประกอบที่ 3: ส่วนประกอบ A, 300 µL 3.34 มม. SYTO 9 ใน DMSO ได ส่วนประกอบ B, 300 µL ของไอโอไดด์ propidium 20 มม.ใน DMSO ได และคอมโพเนนต์ C, 10 mL ของ BacLight ติดตั้งน้ำมัน (คอมโพเนนต์นี้ไม่ได้ใช้ในการทดสอบ fluorometric ที่อธิบายไว้ที่นี่) ชุดหนึ่งเพียงพอสำหรับการวิเคราะห์อย่างประมาณ 65 ที่ใช้โพรโทคอลนี้ การจัดการ จัดเก็บและการใช้ reagents ควรดำเนินการตามเอกสารข้อมูลของผลิตภัณฑ์โดยคลิปปากตะเข้โมเลกุล
ระงับหมอเทศข้างลาย Staphylococcus ที่ประกอบด้วยประมาณ 1 × 10-7 แบคทีเรีย/mL การปรับความเข้มข้นของการระงับเชื้อแบคทีเรีย มีตัวอย่าง 3 mL ใน cuvette 10 มม. × 10 มม. และวัดความหนาแน่นออปติคัลที่ 670 nm (OD670) ใช้เป็นเครื่องทดสอบกรดด่าง 1 × 10-7 แบคทีเรีย/mL ที่สอดคล้องกับ OD670 ~ 0.15 Microcentrifuge (SUREspin(TM) รุ่น 7040 เฮเลนา Labs โบมอนต์ TX) .
แอลกอฮอล์ Isopropyl

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เทอร์เนอ BioSystems TD-700 ห้องปฏิบัติการ Fluorometer ร่วมกับวัดระดับโมเลกุล 'สดชุด / DEAD® BacLightTM แบคทีเรียมีชีวิตให้นวนิยายสองสีทดสอบการเรืองแสงของแบคทีเรียที่มีชีวิตที่ช่วยให้นักวิจัยสามารถแยกแยะความแตกต่างเชิงปริมาณแบคทีเรียที่มีชีวิตและตายในนาทีแม้ในผสม ประชากรที่มีความหลากหลายของชนิดของเชื้อแบคทีเรีย การชุมนุมโดยตรงตรวจนับของการมีชีวิตของเชื้อแบคทีเรียจะขึ้นอยู่กับลักษณะการเผาผลาญหรือความสมบูรณ์ของเมมเบรน อย่างไรก็ตามวิธีการอาศัยอยู่กับลักษณะการเผาผลาญมักจะเป็นเพียงการทำงานสำหรับเซต จำกัด ของกลุ่มแบคทีเรีย (1) และวิธีการประเมินความสมบูรณ์ของเยื่อหุ้มเซลล์แบคทีเรียโดยทั่วไปมีระดับสูงของการเรืองแสงพื้นหลัง (2). ทั้งสองประเภทของการตรวจวัดต้องทนทุกข์ทรมานจากการที่มีความสำคัญมากในการเจริญเติบโต และเงื่อนไขในการย้อมสี. (3,4) ต้องใช้วัสดุเทอร์เนอ BioSystems TD-700 ห้องปฏิบัติการ Fluorometer กับ PMT มาตรฐาน (P / N 7000-009) หลอดไฟฮาโลเจนควอตซ์ (P / N 7000-930) 13 มิลลิเมตรการทดสอบรอบที่อะแดปเตอร์ท่อ (P / ยังไม่มี 7000-981) สองคู่ของตัวกรองจำเป็นต้องใช้: คู่แรกประกอบด้วย: EX 486 กรองนาโนเมตร (P / N 034-0486), อีเอ็ม 520 กรองนาโนเมตร (P / N 034-0520) คู่ที่สองรวมถึง: EX 520 กรองนาโนเมตร (P / N 034-0520), อีเอ็ม 325-700 นาโนเมตร (P / N 10-058R) และมากกว่า 610 ตัวกรองนาโนเมตร (P / N 10-054R) กรองโอริง ( P / N 7000-949) 13 มม x 100 มมหลอดทดลองแก้ว borosilicate (P / N 10-031) สด / DEAD® BacLight (TM) ของแบคทีเรียมีชีวิต Kit (แคตตาล็อกหมายเลข L-7012) จัดทำโดยวัดระดับโมเลกุล, Inc , Eugene, OR ชุดนี้ประกอบด้วยสามองค์ประกอบ: ส่วนประกอบ 300 ไมโครลิตร 3.34 มิลลิ Syto 9 ใน DMSO ปราศจาก, Component B, 300 ไมโครลิตรของ 20 มิลลิไอโอไดด์ Propidium ใน DMSO ไม่มีน้ำและชิ้นส่วน C, 10 มิลลิลิตร BacLight น้ำมันติดตั้ง (ส่วนนี้ไม่ได้ ที่ใช้ในการทดสอบฟลูออโรที่อธิบายที่นี่) หนึ่งชุดก็เพียงพอสำหรับการวิเคราะห์ประมาณ 65 ตัวอย่างโดยใช้โปรโตคอลนี้ การจัดการการจัดเก็บและการใช้สารเคมีที่ควรจะดำเนินการให้สอดคล้องกับแผ่นข้อมูลผลิตภัณฑ์ที่จัดจำหน่ายโดยวัดระดับโมเลกุลStaphylococcus aureus ระงับที่มีประมาณ 1 × 10-7 แบคทีเรีย / ml ในการปรับความเข้มข้นของแบคทีเรียระงับใช้เวลา 3 ตัวอย่างมิลลิลิตรใน 10 มม× 10 มมการเก็บตัวอย่างและการวัดความหนาแน่นของแสงที่ 670 นาโนเมตร (OD670) โดยใช้ spectrophotometer 1 × 10-7 แบคทีเรีย / ml สอดคล้องกับ OD670 ~ 0.15 ไมโคร (SUREspin (TM) รุ่น 7040, เฮเลนา Labs, โบมอนต์เท็กซัส) Isopropyl เครื่องดื่มแอลกอฮอล์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เทอร์เนอซึ่ง td-700 ห้องปฏิบัติการฟลู โรมิเตอร์ร่วมกับโมเลกุลโพรบ ' สด / ตาย® baclighttm แบคทีเรีย 1 ชุดให้นวนิยายสองสีเรืองแสง การทดสอบความมีชีวิตของแบคทีเรียที่ช่วยให้นักวิจัยเพื่อใช้แยกแยะมีชีวิตและตายแบคทีเรียในนาทีแม้ในผสมประชากรที่มีช่วงของชนิดของเชื้อแบคทีเรียปกตินับโดยตรงหรือขึ้นอยู่กับลักษณะของแบคทีเรียสามารถสลายหรือเมมเบรน ความซื่อสัตย์ อย่างไรก็ตาม วิธีการอาศัยลักษณะการเผาผลาญมักจะทำงานย่อยจำกัดของกลุ่มแบคทีเรีย ( 1 ) และวิธีการประเมินความสมบูรณ์ของแผ่นมักมีระดับสูงของการเรืองแสงพื้นหลัง( 2 ) มีทั้งชนิดใช้ประสบการมากไวต่อการเจริญเติบโตและการเงื่อนไข ( 3 , 4 )

วัสดุที่ต้องใช้

td-700 เทอร์เนอร์ซึ่งปฏิบัติการฟลู โรมิเตอร์ด้วยมาตรฐาน PMT ( P / N 7000-009 )
โคมไฟฮาโลเจนควอทซ์ ( P / N 7000-930 )
13 มม. รอบหลอดทดสอบ Adapter ( P / N 7000-981 )
สองคู่ของตัวกรองจะถูกบังคับใช้ : คู่แรก รวมถึงอดีตแล้วกรอง nm ( P / N 034-0486 )เอ็ม 520 nm กรอง ( P / N 034-0520 ) คู่ที่2 : EX 520 nm กรอง ( P / N 034-0520 ) , เอ็ม 325-700 nm ( P / N 10-058r ) และมากกว่า 610 nm กรอง ( P / N 10-054r )
- กรอง ( P / N 7000-949 )
13 มม. x 100 มม. borosilicate แก้วหลอดทดลอง ( P / N 10-031 )
อยู่ / ตาย® baclight ( TM ) แบคทีเรีย 1 ชุด ( หมายเลขบัญชีรายชื่อ l-7012 ) จัดโดยโมเลกุลโพรบ , อิงค์ , ยูจีน , หรือ .ชุดนี้ประกอบด้วยสามส่วน : ส่วน , 300 µ l 3.34 มม. syto 9 ในรัส DMSO , องค์ประกอบ B 300 µ L 20 มม. propidium ไอโอไดด์ในรัส DMSO และส่วนประกอบ ซี 10 มล. baclight ยึดน้ำมัน ( ส่วนนี้ไม่ได้ถูกใช้ในการทดสอบ fluorometric อธิบายที่นี่ ) หนึ่งชุดมีเพียงพอสำหรับการวิเคราะห์ของเกี่ยวกับ 65 ตัวอย่างการใช้โพรโทคอลนี้ การจัดการการจัดเก็บและการใช้งานของสารเคมีควรดำเนินการตามข้อมูลผลิตภัณฑ์แผ่นมาจากโมเลกุลโพรบ .
Staphylococcus aureus ช่วงล่างที่มีประมาณ 1 × 10-7 แบคทีเรีย / ml เพื่อปรับความเข้มข้นของสารแขวนลอย แบคทีเรีย ใช้ 3 ml จำนวน 10 มิลลิเมตร×พิทยาพล 10 มม. และวัดความหนาแน่นของแสงที่ 670 นาโนเมตร ( od670 ) โดยใช้วัสดุ1 × 10-7 แบคทีเรีย / ml ที่สอดคล้องกับ od670 ~ 0.15 ตามลำดับ ไมโครเซนตริฟิวจ์ ( surespin ( TM ) รุ่น 7040 เฮเลน่า Labs , Beaumont , TX )
ไอโซโพรพิลแอลกอฮอล์