The activity of StyA was determined

The activity of StyA was determined by measuring the formation
of (S)-styrene oxide by HPLC. The reaction mixture contained 8M
of purified StyA, 20Mof purified StyB, 20Mformate dehydrogenase
(from Pichia pastoris KM71), 0.16M sodium formate, 0.2mM
NADH, 0.8mM NAD+, 0.03mM FAD, and varying concentrations
of styrene (from a 50-fold stock in DMSO), in 100mM potassium
phosphate buffer (pH 6.5). Reaction mixtures were incubated at
30 ◦C on a shaker at 280rpm for 1 h. The organic phase was analyzed
by reverse-phase HPLC on a Luna C18 (4.6mm×150mm)
column at a flow rate of 1ml/min. The mobile phase consisted of a
methanol–water mixture at a ratio of 80:20. Estimates of kcat and
Km were obtained by non-linear regression with GradPad Prism
program (Graphpad, San Diego, CA, USA).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

กำหนดกิจกรรมของ StyA โดยวัดการก่อตัวของ (S) -สไตออกไซด์ โดย HPLC ส่วนผสมของปฏิกิริยาอยู่ 8 เมตรของ StyA บริสุทธิ์ 20 Mof บริสุทธิ์ StyB พร่อง Mformate 20(จาก Pichia pastoris KM71), รูปแบบเอกสารโซเดียม 0.16M, 0.2mMNADH, 0.8mM NAD + 0.03 มม.แฟชั่น และความเข้มข้นแตกต่างกันของสไตรี (จากการ 50-fold หุ้นใน DMSO), โพแทสเซียม 100 มม.ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 6.5) ส่วนผสมของปฏิกิริยาได้รับการกกที่◦C 30 บนปั่นที่ 280 rpm สำหรับ 1 h ขั้นตอนการอินทรีย์โดย HPLC กลับเฟสใน C18 Luna (4.6 มม. × 150 มม.)คอลัมน์ที่อัตราการไหล 1 มิลลิลิตร/นาที ประกอบด้วยขั้นตอนการเคลื่อนผสมเมทานอลน้ำที่อัตราส่วนของ 80:20 ประมาณการของ kcat และกม.ได้รับ โดยถดถอยไม่เชิงเส้นกับปริซึม GradPadโปรแกรม (Graphpad, San Diego, CA, USA)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

กิจกรรมของ StyA ที่ถูกกำหนดโดยการวัดการก่อตัว
ของ (S) ออกไซด์ -styrene โดยวิธี HPLC ผสมปฏิกิริยาที่มีอยู่ 8 M
บริสุทธิ์ StyA 20? ตกบริสุทธิ์ StyB 20? Mformate dehydrogenase
(จาก Pichia pastoris KM71) 0.16M โซเดียมรูปแบบ, 0.2mm
NADH, 0.8mm NAD + 0.03mm FAD และความเข้มข้นที่แตกต่างกัน
ของสไตรีน (จากสต็อก 50 เท่าใน DMSO) ใน 100mm โพแทสเซียม
ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 6.5) ผสมปฏิกิริยาถูกบ่มที่
30 ◦Cในเครื่องปั่นที่ 280rpm เป็นเวลา 1 ชั่วโมง เฟสอินทรีย์ได้รับการวิเคราะห์
โดยย้อนกลับเฟส HPLC ใน Luna C18 (4.6mm × 150mm)
คอลัมน์ที่อัตราการไหลของ 1ml / นาที เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วย
ส่วนผสมเมทานอลน้ำในอัตราส่วน 80:20 ประมาณการของ kcat และ
Km ได้จากการถดถอยที่ไม่ใช่เชิงเส้นกับ GradPad ปริซึม
Program (GraphPad, San Diego, CA, USA)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

กิจกรรมของ stya ถูกกำหนดโดยการวัดการพัฒนา( S ) - ไตรีนออกไซด์ด้วย HPLC . ปฏิกิริยาผสมที่มีอยู่ 8ของ stya บริสุทธิ์ , บริสุทธิ์ 20mof styb 20mformate dehydrogenase ,( จาก pichia pastoris km71 ) , โซเดียมรูปแบบเอกสาร 0.16m 0.2mm ,NADH + 0.03mm 0.8mm , NAD , แฟชั่น , และความเข้มข้นแตกต่างกันสไตรีน ( จาก 50 พับหุ้นใน DMSO ) , ใน , โพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 6.5 ) ผสมปฏิกิริยาอุณหภูมิ30 ◦ C ในเครื่องปั่นที่ 280rpm เป็นเวลา 1 ชั่วโมง ระยะวิเคราะห์อินทรีย์โดยกลับเฟส HPLC ในลูน่า c18 ( 4.6mm × 150mm )คอลัมน์ที่ 1ml / นาที อัตราการไหลของเฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วยเมทานอล - น้ำผสมในอัตราส่วน 80 : 20 . ประมาณการของ kcat และกิโลเมตร เป็นแบบไม่เชิงเส้นการถดถอยกับ gradpad ปริซึมโปรแกรม ( graphpad , San Diego , CA , USA )