DNA isolation, Southern blot and se

DNA isolation, Southern blot and segregation analysis
Total plant DNA was isolated from young tomato leaf material following the method described by Dellaporta et al. (1983) . For Southern blot analysis, approximately 10 μg restricted DNA was subjected to electrophoresis through 0.8% agarose and blotted onto Hybond N+ membranes. Hybridization was performed at 65°C under standard conditions ( Sambrook et al. 1989 ). Segregation analysis between famutation and the deletion found in the TOFL gene of fa plants was performed with genomic DNA from 240 F2 plants segregating for the famutation. DNA of each individual plant was used in a PCR reaction with a set of 33P-labelled TOFL-specific primers (5′-CGC AGA TAT TTC GGT GG-G ACC-3′ and 5′-ATT CCT CCA CCT CCA CCT CCT TGG-3′). The PCR products were run in 5% polyacrylamide gels and exposed to X-ray films.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แยกดีเอ็นเอ การวิเคราะห์คืนในตาและแบ่งแยกภาคใต้โรงงานทั้งหมดดีเอ็นเอแยกต่างหากจากวัสดุใบมะเขือเทศหนุ่มตามวิธีที่อธิบายไว้โดย Dellaporta et al. (1983) ได้ สำหรับการวิเคราะห์คืนในตาภาคใต้ ดีเอ็นเอ μg จำกัดประมาณ 10 การ electrophoresis ผ่าน agarose 0.8% และ blotted บน Hybond N + เข้า ทำ hybridization ที่ 65° C ภายใต้เงื่อนไขมาตรฐาน (Sambrook et al. 1989) วิเคราะห์แบ่งแยกระหว่าง famutation และการลบที่พบในยีน TOFL ฟ้าพืชที่ดำเนินการ ด้วย genomic DNA จากพืช F2 240 เอ็กซ์ปอร์ตสำหรับการ famutation ดีเอ็นเอของแต่ละโรงงานแต่ละที่ใช้ในปฏิกิริยา PCR มีการตั้งค่าของ 33P มัน TOFL เฉพาะไพรเมอร์ (AGA 5′ CGC ตัตทีทีซีจำกัด GGT GG-G บัญชี 3′ และ 5′ ATT CCT CCA CCT CCA CCT CCT TGG-3′) ผลิตภัณฑ์ PCR ถูกใน 5% polyacrylamide gels และสัมผัสกับฟิล์มเอกซเรย์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การแยกดีเอ็นเอ blot ภาคใต้และการวิเคราะห์แยก
รวมพืชดีเอ็นเอที่แยกได้จากวัสดุใบมะเขือเทศหนุ่มต่อไปนี้วิธีการที่อธิบายโดย Dellaporta et al, (1983) สำหรับการวิเคราะห์ blot ใต้ประมาณ 10 ไมโครกรัมต่อดีเอ็นเอ จำกัด ถูกยัดเยียดให้ electrophoresis ผ่าน agarose 0.8% และเปื้อนบน Hybond N + เมมเบรน การผสมพันธุ์ได้รับการดำเนินการที่ 65 ° C ภายใต้เงื่อนไขมาตรฐาน (Sambrook et al. 1989) การวิเคราะห์แยกระหว่าง famutation และการลบที่พบในยีนของพืช TOFL fa ได้ดำเนินการกับดีเอ็นเอจากพืช 240 F2 แบ่งสำหรับ famutation ดีเอ็นเอของพืชแต่ละชนิดแต่ละที่ใช้ในปฏิกิริยา PCR กับชุดของ 33P ป้ายไพร TOFL เฉพาะ (5'-CGC AGA ททท TTC GGT GG-G ACC-3 'และ 5'-ATT CCT CCA CCT CCA ซีซีทีซีซีที TGG -3 ') ผลิตภัณฑ์พีซีอาร์ได้รับการทำงานใน 5% เจลอะคริเลตและสัมผัสกับฟิล์ม X-ray

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

แยกดีเอ็นเอ เปรอะเปื้อน ภาคใต้และแยกวิเคราะห์
รวมพืชดีเอ็นเอที่แยกได้จากใบมะเขือเทศวัสดุยังต่อวิธีการอธิบายโดย dellaporta et al . ( 1983 ) สำหรับการทำ Southern blot analysis , ประมาณ 10 กรัม จำกัดμดีเอ็นเอภายใต้วิธีผ่าน ( 0.8% และเปื้อนลงบน hybond N เยื่อ( แสดงที่ 65 °องศาเซลเซียสภายใต้สภาวะมาตรฐาน ( sambrook et al . 1989 ) การแยกวิเคราะห์ระหว่าง famutation และลบพบในยีนของพืช tofl เอฟเอากับ genomic DNA จาก 240 F2 พืชแยกสำหรับ famutation .ดีเอ็นเอของพืชแต่ละชนิดแต่ละตัวถูกใช้ในปฏิกิริยา PCR กับชุดของ 33p labelled tofl ไพร์เมอร์จำเพาะ ( 5 ’ - CGC อีกตาด TTC ไม่ gg-g acc-3 MBC และ 5 ’ - ATT ซีซีซีซีซีซีซีซี tgg-3 CCA CCA School ) ผลิตภัณฑ์ทั้งหมดจะถูกเรียกใช้ใน 5 % เจลอะคริลาไมด์และสัมผัสกับฟิล์มเอกซเรย์