Isolates were subsequently maintain

Isolates were subsequently maintained by sub grafting-inoculation on periwinkle in the green house. DNA was extracted from fresh shoots of both diseased and asymptomatic faba bean and graft-inoculated periwinkle plants using phytoplasma enrichment (Ahrens and Seemuller, 1992) or small-scale procedures (Zhang et al., 1988)A nested PCR using the universal phytoplasma primer pairs R16F2n/R2 (Lee et al., 1993) and fU5/rU3 (Lorenz et al., 1995) for the first and second PCR, respectively, was performed following the protocol described by Lorenz et al.(1995) PCR products were not obtained from asymptomatic plants from the field or the greenhouse. PCR products amplified from faba bean and periwinkle plants were purified on Bioclean columns (Biotools S.A., Madrid, Spain) and cloned into the plasmid vector pGEM-T Easy (Promega, Madison, WI, USA).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แยกได้มารักษา โดยย่อย grafting-inoculation บน periwinkle ในกรีนเฮาส์ ดีเอ็นเอที่สกัดจากยอดสดเส้น และแสดงอาการ faba ถั่วและพืช inoculated รับสินบน periwinkle ใช้บ่อ phytoplasma (Ahrens และ Seemuller, 1992) หรือระบุขั้นตอน (Zhang et al., 1988) A ซ้อน PCR ใช้คู่พื้น phytoplasma สากล R16F2n/R2 (Lee et al., 1993) และ fU5/rU3 (ชายลอเรนซ์และ al., 1995) สำหรับ PCR และสอง ตามลำดับ ทำตามโพรโทคอลโดยชายลอเรนซ์ผลิตภัณฑ์ PCR al.(1995) ไม่ได้รับจากพืชแสดงอาการจากร้อยเอ็ด ฟิลด์หรือเรือนกระจก ผลิตภัณฑ์ PCR ที่ขยายจากพืชถั่วและ periwinkle faba บริสุทธิ์ Bioclean คอลัมน์ (Biotools S.A. มาดริด สเปน) และโคลนเป็น plasmid เวกเตอร์ pGEM T ซี่ (Promega เมดิสัน WI สหรัฐอเมริกา)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ที่แยกไว้ภายหลังจากการปลูกถ่ายอวัยวะย่อย-การฉีดวัคซีนในหอยขมในบ้านสีเขียว ดีเอ็นเอที่สกัดได้จากใบสดของทั้งสองโรคและอาการปากอ้าถั่วและพืชหอยขมปลูกถ่ายอวัยวะปลูกโดยใช้เชื้อไฟโตพลาสมาเพิ่มคุณค่า (Ahrens และ Seemuller, 1992) หรือขั้นตอนเล็ก (Zhang et al., 1988) ที่ซ้อนกัน PCR โดยใช้ไพรเมอเชื้อไฟโตพลาสมาสากล คู่ R16F2n / R2 (ลี et al., 1993) และ fU5 / RU3 (ลอเรน et al., 1995) เป็นครั้งแรกและครั้งที่สอง PCR ตามลำดับการดำเนินการดังต่อไปนี้โปรโตคอลอธิบายโดยลอเรน et al. (1995) ผลิตภัณฑ์พีซีอาร์ได้ ไม่ได้มาจากพืชที่ไม่มีอาการจากสนามหรือเรือนกระจก ผลิตภัณฑ์พีซีอาร์ขยายจากปากอ้าถั่วและหอยขมพืชที่บริสุทธิ์ในคอลัมน์ Bioclean (Biotools SA, มาดริด, สเปน) และโคลนเข้าสู่พลาสมิดเวกเตอร์ pGEM-T ง่าย (Promega, Madison, WI, USA)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ไอโซเลตเป็นรักษาโดยการปลูกเชื้อที่ย่อยและแพงพวยในบ้านสีเขียว ดีเอ็นเอจากยิงสด ทั้งป่วย และหรือ faba เมล็ดและตอนกิ่งปลูกแพงพวยพืชที่ใช้เสริม ( Ahrens เชื้อไฟโตพลาสมา และ seemuller , 1992 ) หรือขั้นตอนขนาดเล็ก ( Zhang et al . ,1988 ) ด้วยวิธี PCR โดยใช้ไพรเมอร์คู่สากลเชื้อไฟโตพลาสมา r16f2n / R2 ( ลี et al . , 1993 ) และ fu5 / ru3 ( ลอเรนซ์ et al . , 1995 ) สำหรับวิธีที่ 1 และ 2 ตามลำดับมีการปฏิบัติตามขั้นตอนที่อธิบายโดยลอเรนซ์ et al . ( 1995 ) ผลิตภัณฑ์ PCR ไม่ได้ จากพืช หรือจากสนามหรือเรือนกระจกผลิตภัณฑ์จากถั่วและ PCR ไพร faba แพงพวยพืชบริสุทธิ์ในคอลัมน์ไบโอคลีน ( biotools S.A . , มาดริด , สเปน ) และโคลนเข้าสู่พลาสมิดเวกเตอร์ pgem-t ง่าย ( promega เมดิสัน , WI , USA )