Abstract
Bacillus sp. HR-08 screened from soil samples of Iran, is capable of producing proteolytic enzymes. 16S rDNA analysis showed that this strain is closely related to Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis, Bacillus pumilus, Bacillus mojavensis, and Bacillus atrophaeus. The zymogram analysis of the crude extract revealed the presence of five extracellular proteases. One of the proteases was purified in three steps procedure involving ammonium sulfate precipitation, DEAE-Sepharose ionic exchange and Sephacryl S-200 gel filtration chromatography. The molecular mass of the enzyme on SDS-PAGE was estimated to be 29 kDa. The protease exhibited maximum activity at pH 10.0 and 60 degrees C and was inhibited by PMSF but it was not affected by cysteine inhibitors, suggesting that the enzyme is a serine alkaline protease. Irreversible thermoinactivation of enzyme was examined at 50, 60, and 70 degrees C in the presence of 10 mM CaCl(2). Results showed that the protease activity retains more than 80% and 50% of its initial activity after incubation for 30 min at 60 and 70 degrees C, respectively. This enzyme had good stability in the presence of H(2)O(2), nonionic surfactant, and local detergents and its activity was enhanced in the presence of 20% of dimethyl sulfoxide (DMSO), dimethyl formamide (DMF) and isopropanol. The enzyme retained more than 90% of its initial activity after pre-incubation 1 h at room temperature in the presence of 20% of these solvents. Also, activation can be seen for the enzyme at high concentration (50%, v/v) of DMF and DMSO.
Abstract
Bacillus sp. HR-08 screened from soil samples of Iran, is capable of producing proteolytic enzymes. 16S rDNA analysis showed that this strain is closely related to Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis, Bacillus pumilus, Bacillus mojavensis, and Bacillus atrophaeus. The zymogram analysis of the crude extract revealed the presence of five extracellular proteases. One of the proteases was purified in three steps procedure involving ammonium sulfate precipitation, DEAE-Sepharose ionic exchange and Sephacryl S-200 gel filtration chromatography. The molecular mass of the enzyme on SDS-PAGE was estimated to be 29 kDa. The protease exhibited maximum activity at pH 10.0 and 60 degrees C and was inhibited by PMSF but it was not affected by cysteine inhibitors, suggesting that the enzyme is a serine alkaline protease. Irreversible thermoinactivation of enzyme was examined at 50, 60, and 70 degrees C in the presence of 10 mM CaCl(2). Results showed that the protease activity retains more than 80% and 50% of its initial activity after incubation for 30 min at 60 and 70 degrees C, respectively. This enzyme had good stability in the presence of H(2)O(2), nonionic surfactant, and local detergents and its activity was enhanced in the presence of 20% of dimethyl sulfoxide (DMSO), dimethyl formamide (DMF) and isopropanol. The enzyme retained more than 90% of its initial activity after pre-incubation 1 h at room temperature in the presence of 20% of these solvents. Also, activation can be seen for the enzyme at high concentration (50%, v/v) of DMF and DMSO.
การแปล กรุณารอสักครู่..

นามธรรม
Bacillus sp . hr-08 คัดกรองจากดินตัวอย่างของอิหร่าน มีความสามารถในการผลิตโปรตีน เอนไซม์ การวิเคราะห์ 16S rDNA พบว่าสายพันธุ์นี้จะเกี่ยวข้องกับ Bacillus subtilis , Bacillus licheniformis บาซิลลัส พูมิลัส , Bacillus mojavensis และ Bacillus atrophaeus . การวิเคราะห์ไอโซไซม์สกัดพบว่ามีห้าและคุณค่าทางอาหารหนึ่งในทางบริสุทธิ์ ใน 3 ขั้นตอน คือ ขั้นตอนที่เกี่ยวข้องกับการทำไอออนแอมโมเนียม ซัลเฟตตกตะกอนเกี่ยวข้องแลกเปลี่ยนและ sephacryl s-200 gel filtration โครมาโตกราฟี มวล โมเลกุลของเอนไซม์เอนไซม์ซึ่งเป็น 29 กิโลดาลตัน ส่วนโปรติเอสมีกิจกรรมสูงสุดที่ pH 10.0 และ 60 องศาเซลเซียส และถูกยับยั้ง PMSF แต่มันไม่ได้รับผลกระทบจากยาซิสเทอีน ,แนะนำว่าเอนไซม์คือเอนไซม์อัลคาไลน์โปรติเอส thermoinactivation กลับไม่ได้ของเอนไซม์ถูกตรวจสอบที่ 50 , 60 และ 70 องศา C ในการปรากฏตัวของ 10 มม. กลาง ( 2 ) ผลการศึกษาพบว่า เอนไซม์โปรติเอสมีกิจกรรมมากกว่า 80% และ 50% ของกิจกรรมในเบื้องต้นหลังจากบ่มเป็นเวลา 30 นาทีที่ 60 และ 70 องศาเซลเซียส ตามลำดับ เอนไซม์นี้มีความคงตัวดีในการแสดงตนของ H ( , 2 ) O ( , 2 ) ,สารลดแรงตึงผิวประจุและผงซักฟอกท้องถิ่นและกิจกรรมมากขึ้นในการแสดงตนของ 20% ของไดเมทิลซัลฟอกไซด์ ( DMSO ) Dimethyl Formamide ( DMF ) และไอโซโพรพานอล . เอนไซม์รักษามากกว่า 90% ของกิจกรรมแรกหลังจากที่ก่อนระยะเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้องในการแสดงตนของ 20% ของตัวทำละลายเหล่านี้ นอกจากนี้ การเปิดใช้งานสามารถมองเห็นได้สำหรับเอนไซม์ที่ความเข้มข้นสูง ( 50%v / v ) และ DMF DMSO .
การแปล กรุณารอสักครู่..
