2. Materials and methods2.1. Sample

2. Materials and methods
2.1. Sample
About 5 kg of each fruit were purchased at eating ripeness from the local markets in Yucatan, Mexico during 2012. Eating ripeness for purple star apple was determined by the colour of the peel (75% purple) (Álvarez-Vargas et al., 2006), while the eating ripeness for yellow cashew and red cashew was determined by °Brix/acidity ratio (25.86) (Morales-Landa et al., 2013). Fruits without blemishes or damage were selected and sent to the laboratory for peel extraction. After the fruits had been cleaned with tap water, peels were extracted manually with a knife and lyophilized in a freeze dryer Lab-conco Model 6 (Labconco-corp, Kansas City, MO) at 0.04 MBar and −56 °C for 48 h. Finally, the freeze-dried peel of each fruit was crushed using a mortar and stored at −20 °C until analysis.

2.2. Analysis of antioxidant compounds
2.2.1. Determination of total soluble phenols (TSPs) and total flavonoids
The 80% methanol has been used to assure the maximum extraction of soluble phenols and flavonoids of tropical fruits such as mature green mangos cv. ‘Ataulfo’ and Irwin mango (Robles-Sánchez et al., 2011 and Shivashankara et al., 2004). TSP and flavonoid compounds were extracted using 1 g of freeze-dried peel of each fruit, which was homogenised in 10 mL of 80% methanol (Moo-Huchin et al., 2014). The homogenated extract was sonicated for 30 min at 40 °C and centrifuged in an Eppendorf centrifuge, model 5702 R, at 1200g for 10 min at room temperature. The supernatant was collected, and the sediment was subjected to an additional extraction using the same procedure. Both supernatants were mixed and stored at −20 °C until analysis. Total soluble phenols were determined according to Singleton and Rossi (1965). Briefly, 50 μL of extracts were mixed with 3 mL of deionized water and 250 μL of Folin–Ciocalteu reagent (1 N). After 8 min of equilibrium, 750 μL of 20% Na2CO3 and 950 μL of H2O were added to the extracts; after incubation for 30 min at room temperature, the absorbance was read at 765 nm with a UV–Vis spectrophotometer PerkinElmer Lambda 11. Concentration of total soluble phenols compound was calculated using a standard curve of aqueous solutions of gallic acid (0–10 ppm) and expressed as mg gallic acid equivalents (GAE)/100 g dry weight (DW).

Flavonoid content was determined according to methods described by González-Aguilar, Villegas-Ochoa, Martínez-Téllez, Gardea, and Ayala-Zavala (2007). 1 mL from each extracted sample was mixed and equilibrated with 4 mL of deionized water and 300 μL 5% NaNO2 for 5 min. After equilibrium, 300 μL of 10% AlCl3 (methanolic solution) were added; the mixture was allowed to sit for 1 min and then 2 mL of 1 M NaOH were added. The last volume was completed to 10 mL with H2O, stirred, and readings were taken. Mixture absorbance was determined at 415 nm, using a UV–Vis spectrophotometer PerkinElmer Lambda 11. Concentration of total flavonoids of fruits was calculated using a standard curve of quercetin (0–60 ppm) and expressed as mg quercetin equivalents (QEs)/100 g of DW.

2.2.3. Total anthocyanins
Anthocyanins were extracted from 1 g of freeze-dried peel of each fruit with 30 mL of 95% ethanol/1.5 M HCl (85:15, v:v) (Moo-Huchin et al., 2014). The extract was transferred to a 50 mL volumetric flask, completing the volume with 1.5 M ethanol–HCl and stored for 12 h at 4 °C. After filtration, the absorbance was measured in a UV–Vis spectrophotometer PerkinElmer Lambda 11 at 535 nm. The total anthocyanin content was determined applying the Lambert–Beer law, calculated as mg/100 g of DW, through the formula: View the MathML source where A535 is the absorbance in the diluted sample and View the MathML source is the values factor (98.2) of molar absorptivity for the acid–ethanol solvent and it refers to the absorption of a mixture of cranberry anthocyanins in acid–ethanol, measured in a 1 cm-cell at 535 nm, at a concentration of 1% (w/v).

2.2.4. Total carotenoids
Extraction of carotenoids was carried out according to the method developed by Chen, Tai, and Chen (2004). 1 g of freeze-dried peel from each fruit was mixed with 50 mL of hexane:acetone:ethanol (70:15:15, v/v/v) containing 0.05% BHT. The mixture was stirred for 1 h using an orbital shaker. Afterwards, 5 mL of 40% KOH in methanolic solution were added, and the solution was saponified at 25 °C in the dark for 2 h. Subsequently, 30 mL of hexane were added, the mixture was shaken vigorously and the upper layer was collected. The lower layer was extracted twice and the supernatant was also collected and filtered through sodium sulphate powder to remove traces of water. The supernatant obtained was pooled and taken for analysis. Total carotenoid content was determined spectrophotometrically at 450 nm in a UV–Vis spectrophotometer PerkinElmer Lambda 11. A calibration curve (0–50 ppm) was prepared using β-carotene in hexane as the standard and hexane as the blank. The results were expressed as mg β-carotene/100 g of DW.

2.2.5. Vitamin C
For vitamin C determination the titrimetric method with 2,6-dichlorophenolindophenol reagent (AOAC-Association of Official Analytical Chemists, 1995) with some modifications was applied. 1 g of freeze-dried peel was mixed with 100 mL of a solution of oxalic acid (4%). The mixture was homogenised and filtered. 5 mL of filtrated solution were diluted to 10 mL with 4% oxalic acid solution. This solution was titrated with 0.01% of 2,6-dichloro-phenol-indophenol solution. The end point was considered to be when the solution had attained a pink colour which persisted for 15 s. The calibration of 2,6-dichlorophenolindophenol solution was performed with 0.05% ascorbic acid solution. Results were expressed as mg of ascorbic acid equivalents per 100 g of DW.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 ตัวอย่าง
ซื้อเกี่ยวกับ 5 กิโลกรัมของผลไม้แต่ละที่กิน ripeness จากตลาดในสเปน เม็กซิโกใน 2012 กิน ripeness สำหรับแอปเปิ้ลดาวสีม่วงถูกกำหนด โดยสีของเปลือก (สีม่วง 75%) (Álvarez วาร์และ al., 2006), ในขณะที่ ripeness กินสำหรับมะม่วงหิมพานต์สีเหลือง และสีแดงมะม่วงหิมพานต์ถูกกำหนด โดย° Brix/มี อัตรา (2586) (ราเลส Landa et al., 2013) ผลไม้ไม่ มีฝ้าหรือความเสียหายถูกเลือก และส่งไปยังห้องปฏิบัติการเพื่อแยกเปลือก หลังจากมีการล้างผลไม้ ด้วยน้ำประปา peels สกัดด้วยตนเอง ด้วยมีด และ lyophilized ในการหยุดการทำเป่า Lab conco รุ่น 6 (Labconco corp แคนซัสซิตี้ MO) 0.04 MBar และ −56 ° C สำหรับ 48 h สุดท้าย เปลือกกรอบของผลไม้แต่ละถูกบดโดยใช้ครก และเก็บไว้ที่ −20 ° C จนวิเคราะห์

2.2 วิเคราะห์สารต้านอนุมูลอิสระ
2.2.1 ความมุ่งมั่นของ phenols ละลายน้ำรวม (TSPs) และ flavonoids รวม
ใช้เมทานอล 80% เพื่อให้มั่นใจสกัดสูงสุดละลาย phenols และ flavonoids ของผลไม้เมืองร้อนเช่นมะม่วงสุกสีเขียว cv 'Ataulfo' และหนุ่มสับปะรด (Robles Sánchez al. et, 2011 และ Shivashankara et al., 2004) ช้อนชาและ flavonoid สารถูกสกัดโดยใช้ g 1 ของกรอบเปลือกของผลไม้แต่ละ ที่ถูก homogenised ใน 10 mL ของเมทานอล 80% (Huchin หมู่ et al., 2014) สารสกัดจาก homogenated เป็น sonicated สำหรับ 30 นาทีที่ 40 ° C และ centrifuged ในเครื่องหมุนเหวี่ยง Eppendorf รุ่น 5702 R ที่ 1200 กรัมใน 10 นาทีที่อุณหภูมิห้อง Supernatant ถูกเก็บรวบรวม และตะกอนถูกยัดเยียดให้แยกเพิ่มเติมการใช้กระบวนการเดียวกัน Supernatants ทั้งถูกผสม และเก็บไว้ที่ −20 ° C จนถึงการวิเคราะห์ Phenols รวมละลายถูกกำหนดตามซิงเกิลตันและซซิ (1965) สั้น ๆ ΜL 50 ของสารสกัดที่ผสมกับ 3 mL น้ำ deionized และ μL 250 ของรีเอเจนต์ Folin-Ciocalteu (1 N) หลังจาก 8 นาทีของสมดุล μL 750 20% Na2CO3 และ 950 μL ของ H2O ได้เพิ่มสารสกัดจาก หลังจากฟักตัวในอุณหภูมิห้อง 30 นาที absorbance ที่ถูกอ่านที่ 765 nm มีการ UV – Vis เครื่องทดสอบกรดด่าง PerkinElmer แลมบ์ดา 11 คำนวณความเข้มข้นของสารประกอบ phenols รวมละลายน้ำโดยใช้เส้นโค้งมาตรฐานของโซลูชั่นอควีกรด gallic (0-10 ppm) และแสดง เป็นมิลลิกรัมเทียบเท่ากรด gallic (GAE) / แห้ง 100 กรัมน้ำหนัก (DW)

Flavonoid เนื้อหาถูกกำหนดตามวิธีที่อธิบายไว้ โดย González Aguilar, Villegas Ochoa, Martínez Téllez, Gardea และอยาลา-Zavala (2007) mL 1 จากตัวอย่างแต่ละแยกผสม และ equilibrated กับ mL 4 น้ำ deionized และ 300 μL 5% NaNO2 5 นาที หลังจากที่สมดุล μL 300 10% AlCl3 (methanolic โซลูชั่น) ถูกเพิ่ม ส่วนผสมได้รับอนุญาตให้นั่ง 1 นาที และได้เพิ่ม 2 mL ของ 1 M NaOH ปริมาตรสุดท้ายเสร็จไป 10 mL กับ H2O กวน และอ่านที่ถ่าย กำหนดส่วนผสม absorbance ที่ 415 nm ใช้เป็น UV – Vis เครื่องทดสอบกรดด่าง PerkinElmer แลมบ์ดา 11 คำนวณความเข้มข้นของ flavonoids รวมของผลไม้โดยใช้เส้นโค้งมาตรฐานของ quercetin (0 – 60 ppm) และแสดง เป็นมิลลิกรัมเทียบเท่า quercetin (QEs) / 100 กรัมของ DW

2.2.3 รวม anthocyanins
Anthocyanins ถูกสกัดจาก g 1 ของเปลือกผลไม้แต่ละกรอบมี 30 mL 95% เอทานอ ล/15 M HCl (85:15, v: v) (Huchin หมู่ et al., 2014) การดึงข้อมูลถูกถ่ายโอนไปเป็น 50 mL volumetric หนาว ทำเสียง ด้วยเอทานอล – HCl 1.5 M และเก็บไว้สำหรับ h 12 ที่ 4 องศาเซลเซียส หลังจากกรอง absorbance ที่ถูกวัดในแบบ UV – Vis เครื่องทดสอบกรดด่าง PerkinElmer แลมบ์ดา 11 ที่ 535 นาโนเมตร กำหนดเนื้อหาทั้งหมดมีโฟเลทสูงใช้กฎหมายเบียร์แลมเบิร์ต คำนวณเป็น มิลลิกรัม/100 g ของ DW โดยใช้สูตร: ดูแหล่ง MathML ที่ A535 absorbance ในอย่างแตกออก และดูต้น MathML เป็นปัจจัยค่า (98.2) ของสบ absorptivity สำหรับตัวทำละลายกรด – เอทานอลและถึงดูดซึมส่วนผสมของแครนเบอร์รี่ anthocyanins ในกรด – เอทานอล วัดใน 1 ซม.เซลล์ที่ 535 nm ที่ความเข้มข้น 1% (w/v).

2.2.4 รวม carotenoids
สกัด carotenoids ที่ดำเนินตามวิธีการที่พัฒนา โดยเฉิน ใต้ และเฉิน (2004) g 1 ของเปลือกกรอบจากผลไม้แต่ละถูกผสมกับ 50 mL ของเฮกเซน: อะซิโตน: เอทานอล (70:15:15, v/v/v) มี 0.05% บาท ส่วนผสมที่กวนสำหรับ h 1 ใช้เชคเกอร์การโคจร 40% เพิ่มเกาะในโซลูชัน methanolic ภายหลัง 5 mL และโซลูชั่นมี saponified ที่ 25 ° C ในมืดสำหรับ 2 h ต่อมา เพิ่ม 30 mL ของเฮกเซน ถูกเขย่าผสมโยคะ และรวบรวมไว้ที่ชั้นบน ชั้นล่างถูกแยกสอง และ supernatant ยังถูกรวบรวม และกรองผ่านผงซัลเฟตโซเดียมจะลบร่องรอยของน้ำ Supernatant ได้ถูกทางถูกพู และนำมาวิเคราะห์ เนื้อหา carotenoid รวมได้กำหนด spectrophotometrically ที่ 450 nm ในการ UV – Vis เครื่องทดสอบกรดด่าง PerkinElmer แลมบ์ดา 11 เส้นโค้งการปรับเทียบ (0-50 ppm) ถูกเตรียมใช้β-แคโรทีนในเฮกเซนเป็นมาตรฐานและเฮกเซนเป็นว่างเปล่า ผลลัพธ์ได้แสดงเป็นมิลลิกรัมβ-แคโรที น/100 g ของ DW

2.2.5 วิตามิน C
สำหรับวิตามิน C กำหนดวิธีการ titrimetric 2ใช้รีเอเจนต์ 6-dichlorophenolindophenol (AOAC-สมาคมนักวิเคราะห์ทางเคมี 1995) มีการปรับเปลี่ยนบางอย่าง g 1 ของเปลือกกรอบถูกผสมกับ 100 mL ของโซลูชันของกรดออกซาลิก (4%) ส่วนผสม homogenised และกรอง 5 mL ของ filtrated ถูกทำให้เจือจางไป 10 mL ด้วยโซลูชั่นกรดออกซาลิก 4% วิธีนี้ถูก titrated 0.01% 26-dichloro-วาง-indophenol โซลูชัน ถือเป็นจุดสิ้นสุดเมื่อการแก้ปัญหามีได้สีชมพูที่มีอยู่ 15 s เทียบของ 2,6 dichlorophenolindophenol ที่ดำเนินการ ด้วย 0.05% กรดแอสคอร์บิคโซลูชั่น ผลลัพธ์ที่แสดงเป็นมิลลิกรัมของกรดแอสคอร์บิคเทียบเท่าต่อ 100 กรัมของ DW

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2 วัสดุและวิธีการ
2.1 ตัวอย่าง
ประมาณ 5 กิโลกรัมของผลไม้แต่ละถูกซื้อได้ที่การรับประทานอาหารที่สุกจากตลาดท้องถิ่นในแหลมยูคาทาน, เม็กซิโกในช่วงปี 2012 สุกกินแอปเปิ้ลสีม่วงดาวถูกกำหนดโดยสีของเปลือก (75% สีม่วง) (Álvarez-วาร์กัส, et al. 2006) ในขณะที่ความสุกกินเม็ดสีเหลืองและสีแดงมะม่วงหิมพานต์ถูกกำหนดโดย° Brix / ความเป็นกรดอัตราส่วน (25.86) (โมราเลส-Landa et al., 2013) ผลไม้โดยไม่ต้องรอยหรือความเสียหายที่ได้รับการคัดเลือกและส่งไปยังห้องปฏิบัติการสำหรับการสกัดเปลือก หลังจากที่ผลไม้ที่ได้รับการทำความสะอาดด้วยน้ำประปาเปลือกมาสกัดด้วยตนเองด้วยมีดและแห้งในตู้แช่แข็ง Lab-Conco รุ่น 6 (Labconco-คอร์ป, แคนซัสซิตี้โม) ที่ 0.04 เอ็มบาร์และ -56 ° C เป็นเวลา 48 ชั่วโมง สุดท้ายเปลือกแห้งของผลไม้แต่ละถูกอัดโดยใช้ปูนและเก็บไว้ที่ -20 ° C จนการวิเคราะห์2.2 การวิเคราะห์สารต้านอนุมูลอิสระ2.2.1 ความมุ่งมั่นของฟีนอลทั้งหมดที่ละลายน้ำ (TSPs) และ flavonoids รวมเมทานอล 80% มีการใช้เพื่อให้มั่นใจการสกัดสูงสุดของฟีนอลที่ละลายน้ำได้และ flavonoids ของผลไม้เมืองร้อนเช่นมะม่วงสุกพันธุ์สีเขียว 'Ataulfo ​​และเออร์วินมะม่วง (เบล-Sánchez et al., 2011 และ Shivashankara et al., 2004) TSP และสารประกอบ flavonoid ถูกสกัดโดยใช้ 1 กรัมเปลือกแห้งของแต่ละผลไม้ซึ่งเป็นเนื้อเดียวกันใน 10 ml 80% เมทานอล (Moo-Huchin et al., 2014) สารสกัดจาก homogenated ถูก sonicated เวลา 30 นาทีที่ 40 ° C และปั่นใน centrifuge Eppendorf, 5702 รูปแบบการวิจัยที่ 1200 กรัมเป็นเวลา 10 นาทีที่อุณหภูมิห้อง ใสถูกเก็บรวบรวมและตะกอนก็ยังถูกสกัดเพิ่มเติมโดยใช้ขั้นตอนเดียวกัน supernatants ทั้งสองได้รับการผสมและเก็บไว้ที่ -20 ° C จนการวิเคราะห์ ฟีนอลที่ละลายน้ำได้ถูกกำหนดตามโทนและรอสซี (1965) สั้น ๆ , 50 ไมโครลิตรของสารสกัดได้รับการผสมกับ 3 มิลลิลิตรของน้ำกลั่นปราศจากไอออนและ 250 ไมโครลิตรของ Folin-Ciocalteu สาร (1 N) หลังจาก 8 นาทีสมดุล 750 ไมโครลิตร 20% Na2CO3 และ 950 ไมโครลิตรของ H2O ถูกเพิ่มเข้ามาในสารสกัดจาก; หลังจากบ่มนาน 30 นาทีที่อุณหภูมิห้องดูดกลืนได้อ่านที่ 765 นาโนเมตรด้วย spectrophotometer UV-Vis กำแลมบ์ดา 11 ความเข้มข้นของฟีนอลที่ละลายสารประกอบทั้งหมดที่คำนวณได้โดยใช้กราฟมาตรฐานของสารละลายกรดแกลลิ (0-10 ppm) และแสดงความเป็นมิลลิกรัมเทียบเท่ากรดแกลลิ (GAE) / 100 กรัมน้ำหนักแห้ง (DW) เนื้อหา Flavonoid ถูกกำหนดตามวิธีการอธิบายโดยGonzález-อากีลาร์ Villegas-โอชัวมาร์ติเน-Téllez, Gardea และอายาเวโรนิกา (2007) 1 มิลลิลิตรจากแต่ละตัวอย่างที่สกัดได้ผสมและ equilibrated 4 มิลลิลิตรของน้ำกลั่นปราศจากไอออนและ 300 ไมโครลิตร 5% NANO2 5 นาที หลังจากที่สมดุล 300 ไมโครลิตร 10% AlCl3 (สารละลายเมทานอล) ได้รับการเพิ่ม; ส่วนผสมได้รับอนุญาตให้นั่งเป็นเวลา 1 นาทีแล้ว 2 มิลลิลิตร 1 M NaOH ถูกเพิ่ม ปริมาณสุดท้ายเสร็จสมบูรณ์ถึง 10 มิลลิลิตร H2O กวนและการอ่านที่ถูกนำ ส่วนผสมการดูดกลืนถูกกำหนดที่ 415 นาโนเมตรโดยใช้ UV-Vis spectrophotometer กำแลมบ์ดา 11 ความเข้มข้นของ flavonoids รวมของผลไม้ที่ได้รับการคำนวณโดยใช้กราฟมาตรฐานของ quercetin (0-60 ppm) และแสดงเป็นรายการเทียบเท่า quercetin มิลลิกรัม (Qes) / 100 กรัม ของใบสำคัญแสดงสิทธิอนุพันธ์2.2.3 anthocyanins ทั้งหมดAnthocyanins ถูกสกัดจาก 1 กรัมเปลือกแห้งของผลไม้แต่ละคนมี 30 มิลลิลิตรของเอทานอล 95% / 1.5 M HCl (85:15, v: v) และ. (Moo-Huchin และคณะ, 2014) สารสกัดที่ได้รับการถ่ายโอนไปยัง 50 มลปริมาตรขวดเสร็จระดับเสียงด้วย 1.5 M HCl เอทานอลและเก็บไว้เป็นเวลา 12 ชั่วโมงที่ 4 องศาเซลเซียส หลังจากการกรอง, การดูดกลืนแสงที่วัดได้ใน spectrophotometer UV-Vis กำแลมบ์ดา 11 ที่ 535 นาโนเมตร เนื้อหา anthocyanin ทั้งหมดถูกกำหนดใช้กฎหมายแลมเบิร์เบียร์คิดเป็นมิลลิกรัม / 100 กรัมของใบสำคัญแสดงสิทธิอนุพันธ์ผ่านสูตร: ดูแหล่ง MathML ที่ A535 เป็นการดูดกลืนแสงในตัวอย่างเจือจางและดูแหล่ง MathML เป็นปัจจัยค่า (98.2 ) ของการดูดซับกรามสำหรับกรดเอทานอลเป็นตัวทำละลายและมันหมายถึงการดูดซึมของส่วนผสมของแครนเบอร์รี่ anthocyanins ในกรดเอทานอลในการวัด 1 ซมเซลล์ที่ 535 นาโนเมตรที่ความเข้มข้น 1% (w / v) 2.2.4 นอยด์รวมการสกัด carotenoids ได้ดำเนินการตามวิธีการที่พัฒนาโดยเฉิน, ใต้, และเฉิน (2004) 1 กรัมเปลือกแห้งจากผลไม้แต่ละผสมกับ 50 มิลลิลิตรเฮกเซน: อะซีโตนเอทานอล (70:15:15, v / v / v) ที่มีบาท 0.05% ส่วนผสมที่ได้รับการขยับเป็นเวลา 1 ชั่วโมงโดยใช้เครื่องปั่นโคจร หลังจากนั้น 5 มิลลิลิตร 40% KOH ในสารละลายเมทานอลที่เพิ่มขึ้นและการแก้ปัญหาที่ได้รับแอลเลอเจนที่ 25 ° C ในที่มืดเป็นเวลา 2 ชั่วโมง ต่อมา 30 มิลลิลิตรเฮกเซนมีการเพิ่มส่วนผสมเขย่าแรง ๆ และชั้นบนที่ถูกเก็บรวบรวม ชั้นล่างถูกสกัดสองครั้งและใสที่ถูกเก็บรวบรวมและยังผ่านการกรองผงโซเดียมซัลเฟตที่จะลบร่องรอยของน้ำ สารละลายที่ได้ถูกรวบรวมและนำมาใช้ในการวิเคราะห์ เนื้อหา carotenoid ทั้งหมดถูกกำหนด spectrophotometrically ที่ 450 นาโนเมตร UV-Vis spectrophotometer กำแลมบ์ดา 11 เส้นโค้งการสอบเทียบ (0-50 ppm) ได้รับการจัดทำขึ้นโดยใช้βแคโรทีนในเฮกเซนที่เป็นมาตรฐานและเฮกเซนเป็นที่ว่างเปล่า ผลการวิจัยแสดงเป็นมิลลิกรัมβแคโรทีน / 100 กรัมของใบสำคัญแสดงสิทธิอนุพันธ์2.2.5 วิตามินซีวิตามินซีสำหรับการกำหนดวิธีการไตเตรทที่มี 2,6-dichlorophenolindophenol สาร (AOAC-สมาคมอย่างเป็นทางการนักเคมีวิเคราะห์, 1995) มีการปรับเปลี่ยนบางส่วนถูกนำไปใช้ 1 กรัมเปลือกแห้งผสมกับ 100 มลของการแก้ปัญหาของกรดออกซาลิก (4%) ส่วนผสมที่เป็นเนื้อเดียวกันและกรอง 5 มิลลิลิตรของการแก้ปัญหากรองได้ลดลงเหลือ 10 ml 4% สารละลายกรดออกซาลิก การแก้ปัญหานี้ได้รับการปรับขนาดที่มี 0.01% ของการแก้ปัญหา 2,6-dichloro-ฟีนอล indophenol จุดสิ้นสุดได้รับการพิจารณาจะเป็นเมื่อแก้ปัญหาได้บรรลุสีชมพูซึ่งยืนกรานเป็นเวลา 15 วินาที การสอบเทียบของการแก้ปัญหา 2,6-dichlorophenolindophenol ได้ดำเนินการกับ 0.05% สารละลายกรดวิตามินซี ผลลัพธ์ที่ได้แสดงเป็นมิลลิกรัมเทียบเท่าวิตามินซีต่อ 100 กรัมของใบสำคัญแสดงสิทธิอนุพันธ์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . ตัวอย่าง
ประมาณ 5 กิโลกรัมของผลไม้แต่ละ ซื้อ ที่กินสุกจากตลาดท้องถิ่นใน Yucatan , เม็กซิโก ช่วงระหว่างปี 2012 กินสุกแอปเปิ้ลสีม่วงดาวถูกกำหนดโดยสีเปลือก ( 75% สีม่วง ) ที่ อัลบาเรซ Vargas et al . , 2006 ) ขณะที่ กินสุก สีเหลือง และสีแดงสำหรับเม็ดมะม่วงหิมพานต์มะม่วงหิมพานต์โดยการวัดอัตราส่วน Brix / เมองศา ( 2586 ) ( โมราเลสลันดา et al . , 2013 ) ผลไม้ไม่มีรอยหรือความเสียหายที่ถูกเลือกและส่งไปยังห้องปฏิบัติการสำหรับการสกัดเปลือก หลังจากผลไม้ถูกล้างด้วยน้ำประปา เปลือกถูกสกัดด้วยตนเอง ด้วยมีด และแห้งในรูปแบบแช่แข็งแห้ง CONCO 6 ห้องปฏิบัติการ ( แล็บคอนโก้คอร์ป , แคนซัส ซิตี้ โม ) ที่ 0.04 และ 56 °− mbar เป็นเวลา 48 ชั่วโมง ในที่สุดที่แห้งเปลือกของผลไม้แต่ละถูกบดด้วยครกและเก็บรักษาที่อุณหภูมิ 20 ° C −ไปจนถึงการวิเคราะห์ .

. . การวิเคราะห์สารประกอบสารต้านอนุมูลอิสระ
2.2.1 . การหาปริมาณฟีนอล ละลายรวม ( tsps ) และฟลาโวนอยด์ทั้งหมด
80% เมทานอลได้ถูกใช้เพื่อให้มั่นใจสูงสุดของฟีนอลและสกัดได้สารฟลาโวนอยด์ของผลไม้เมืองร้อน เช่น มะม่วงน้ำดอกไม้สุกเขียว' ataulfo ' และเออร์วินมะม่วง ( robles-s . kgm nchez et al . , 2011 และ shivashankara et al . , 2004 ) ช้อนชาสารสกัดฟลาโวนอยด์และใช้ 1 กรัมของเปลือกแห้งของผลไม้แต่ละ ซึ่ง homogenised 10 ml 80% เมทานอล ( มูฮู – ฉิน et al . , 2010 ) การ homogenated แยกเป็น sonicated สำหรับ 30 นาทีที่ 40 ° C และระดับในเครื่องหมุนเหวี่ยงเพนดอร์ฟ , รูปแบบ 5702 R ,ที่ 1200g เป็นเวลา 10 นาที ที่อุณหภูมิห้อง และน่าน รวบรวมข้อมูล และตะกอนที่ถูกยัดเยียดให้เพิ่มการสกัดโดยใช้วิธีการเดียวกัน ทั้ง supernatants ผสมที่อุณหภูมิ 20 ° C −จนถึงการวิเคราะห์ ฟีนอล ละลาย ทั้งหมดถูกกำหนดตามโรงพยาบาล รอสซี่ ( 1965 ) สั้น ๆ50 μลิตรสารสกัดผสม 3 มล. ของน้ำคล้ายเนื้อเยื่อประสานและμ 250 ลิตร folin – ciocalteu Reagent ( 1 n ) หลัง 8 นาทีของสมดุล μ 750 ลิตร Na2CO3 20% และ 950 μ L ของ H2O มีการเพิ่มสารสกัด ; หลังจากบ่มเป็นเวลา 30 นาที ที่อุณหภูมิห้อง นได้อ่านที่ 765 nm ด้วย UV Spectrophotometer ( VIS Perkinelmer แลมบ์ดา 11ความเข้มข้นของปริมาณสารประกอบฟีนอลถูกคำนวณโดยใช้เส้นโค้งมาตรฐานของสารละลายของกรดแกลลิค ( 0 – 10 ppm ) และแสดงออกเป็นมิลลิกรัมเพิ่มขึ้นเทียบเท่า ( เก ) / 100 กรัมน้ำหนักแห้ง ( แห้ง ) .

ฟลาโวนอยด์ถูกกำหนดตามวิธีการที่อธิบายเนื้อหาโดย gonz . kgm villegas lez Aguilar , โอชัว , มาร์ท . kgm nez-t llez gardea ) , และ Ayala ซาวาลา ( 2007 )1 ml สารสกัดจากแต่ละตัวอย่าง และ equilibrated 4 มิลลิลิตร ผสมน้ำ 300 ลิตรคล้ายเนื้อเยื่อประสานและμ 5% nano2 5 นาทีหลังจากที่สมดุล , 300 μ L 10 % alcl3 ( สารละลายเมทานอล ) เพิ่มส่วนผสมให้นั่งเป็นเวลา 1 นาทีและ 2 มิลลิลิตร 1 M NaOH มีการเพิ่ม เล่มสุดท้ายแล้วเสร็จ 10 ml กับ H2O , คน และอ่านแล้วนผสมตั้งใจที่ 415 nm ใช้ UV Spectrophotometer ( VIS Perkinelmer แลมบ์ดา 11 ความเข้มข้นของสารทั้งหมดของผลไม้ถูกคำนวณโดยใช้เส้นโค้งมาตรฐานของเควอซิติน ( 0 – 60 ppm ) และแสดงออกเป็นมิลลิกรัมเทียบเท่าเควอซิติน ( สอน ) / DW 100 g .

2.2.3 .
รวมแอนโธไซยานิน anthocyanin สกัดจากเปลือกแห้ง 1 กรัมของผลไม้แต่ละกับ 30 มล. 95% เอทานอล / 15 M HCl ( 85:15 , V : V ) ( มูฮู – ฉิน et al . , 2010 ) สารสกัดถูกส่งไป 50 มล. ปริมาตรขวด กรอกปริมาณเอทานอลกับ 1.5 เมตร ( HCl และเก็บไว้เป็นเวลา 12 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 4 องศา หลังจากการกรอง นวัดใน UV Spectrophotometer ( VIS Perkinelmer แลมบ์ดา 11 ที่ 535 นาโนเมตร มีปริมาณแอนโธไซยานินตั้งใจใช้แลมเบิร์ต –เบียร์ กฎหมาย คิดเป็นมิลลิกรัมต่อ 100 กรัมแห้งผ่านสูตร : ดู MathML แหล่งที่ a535 คือการดูดกลืนแสงในเจือจางตัวอย่างและดู MathML แหล่งค่า factor ( แบบ ) ของการดูดกลืนแสงระหว่างกรดและตัวทำละลายเอทานอลและมันหมายถึงการดูดซึมของส่วนผสมของแครนเบอร์รี่ แอนโธไซยานินในกรด ( เอทานอล , วัดในเซลล์ 1 เซนติเมตรที่ 535 นาโนเมตร ที่ความเข้มข้น 1% ( w / v )

2.2.4 .
รวมคาโรทีนอยด์การสกัดแคโรทีนอยด์ได้ดำเนินการตามวิธีการที่พัฒนาขึ้นโดย เชน ต่าย และ เฉิน ( 2004 ) 1 กรัมของผลไม้แห้งเปลือกจากแต่ละที่ได้ผสม 50 มิลลิลิตร เฮกเซน : อะซิโตน เอทานอล ( 70:15:15 , V / V / V ) ที่ประกอบด้วยร้อยละ 0.05 บาท ผสมส่วนผสมที่กวนเป็นเวลา 1 ชั่วโมง โดยใช้เครื่องปั่นโคจร หลังจากนั้น 5 ml ของเกาะ 40% ในสารละลายเมทานอลเพิ่มขึ้นและสารละลายที่อุณหภูมิ 25 ° C การดูดซึมในที่มืดเป็นเวลา 2 ชั่วโมง ต่อมา 30 ml ของน้ำมีการเพิ่มส่วนผสมที่ถูกเขย่าอย่างแรง และชั้นบนก็เก็บ ชั้นล่างถูกสกัด 2 ครั้งและนำยังเก็บและกรองผ่านโซเดียมมซัลเฟตผงเพื่อลบร่องรอยของน้ำ และน่านได้รับ pooled และนำไปวิเคราะห์เนื้อหาในนี้ทั้งหมดถูกกำหนดอยู่ที่ 450 nm ใน UV Spectrophotometer ( VIS Perkinelmer แลมบ์ดา 11 เป็นรูปโค้ง ( 0 – 50 ppm ) บีตา - แคโรทีนถูกเตรียมไว้ใช้ในเฮกเซนเป็นมาตรฐานและเฮกเซนเป็นว่างเปล่า ผลลัพธ์ที่ได้แสดงเป็นมิลลิกรัม / 100 กรัม ของบีตา - แคโรทีนมากกว่า

2.2.5 . วิตามินสำหรับวิตามิน C
หาวิธีไททริเมทริกกับ 26-dichlorophenolindophenol Reagent ( ไม่สมาคมนักเคมี , เจ้าหน้าที่วิเคราะห์ , 1995 ) กับการปรับเปลี่ยนบางอย่างก็ประยุกต์ 1 กรัมของเปลือกแห้งผสมกับ 100 มิลลิลิตรของสารละลายกรดออกซาลิก ( 4% ) ส่วนผสม homogenised และกรอง 5 มิลลิลิตรผลิตโซลูชั่นเพื่อลด 10 ml 4 % สารละลายกรดออกซาลิก . โซลูชั่นนี้อยู่ตลอดเวลากับ 0.01 % 26-dichloro-phenol-indophenol โซลูชั่น จุดก็ถือว่าเมื่อแก้ปัญหาได้บรรลุเป็นสีชมพูซึ่งยังคงเป็นเวลา 15 วินาที 2,6-dichlorophenolindophenol โซลูชั่นการสอบเทียบกับ 0.05 % สารละลายกรดแอสคอร์บิค ผลลัพธ์ที่ได้แสดงเป็นมิลลิกรัม กรดแอสคอร์บิกเทียบเท่าต่อ DW 100 กรัม