2.6. Determination of phenolicHPLC

2.6. Determination of phenolic
HPLC method was used for individual phenolic compounds analysis. The phenolic compounds were extracted according to the method (Zhou, Zeng, Shi, & Xie, 2008) with minor modifications. 0.2 g frozen flesh powder obtained in same method as enzyme assay were vortexed with 0.8 ml methanol (MeOH, 80%, formic acid 1%) then extracted over night at 4 °C in refrigerator. The extraction mixture was sonicated at 30 °C for 30 min, and centrifuged at 10,000×g for 30 min. The residue was re-extracted with 0.5 ml 80% methanol and centrifuged again. Two extraction solutions were combined and filtered through a 0.45 μm syringe filter prior to HPLC analysis. Stock solutions of phenolic standards were prepared in 80% methanol with 1% acetic acid (v/v). All solvents were filtered through 0.45 μm membranes and degassed by vacuum filtration before being used.

Separation of phenolics was performed using a reversed phase column (inertsil ODS-3, 5 μm, 4.6 × 150 mm, C/N 5020-01731, GL Science Inc. Japan). The mobile phase was A: 1% acetic acid in filtered distilled water; B: 100% HPLC grade methanol. The gradient program used was as follows: 0–5 min: 10% B, 5–15 min: linear gradient 10–20% B, 15–30 min: linear gradient 20–40% B, 30–35 min: 40–50%, 35–45 min: 50–80%, 45–55 min: 80–10%, 60 min: stop. The flow rate was 0.8 ml/min and injection volume was 10 μl for the standard, 60 μl for sample. The system operated at a temperature of 40 °C. Peaks were identified by comparison of retention time and UV spectra with authentic standards. The concentration of individual phenolic compounds was determined based on peak area and calibration curves derived from corresponding authentic compounds. The total phenolic content was determined as the summary of 6 peak areas from 280 nm at retention time (RT) 3.4, 5.4 and 11 min and 326 nm at RT 12, 22, and 34 min, respectively, converted to phenolic content (μg/g FW).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.6 การกำหนดของฟีนอวิธี HPLC ที่ใช้สำหรับการวิเคราะห์แต่ละม่อฮ่อม มีสกัดสารฟีนอตามวิธี (โจว เซนเซง ชิ และ เจีย 2008) มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย 0.2 กรัมแช่เนื้อผงที่ได้ในวิธีเดียวกันเป็นการทดสอบเอนไซม์ถูก vortexed กับ 0.8 ml เมทานอ 80% กรดฟอร์มิก 1%) แล้ว แยกผ่านคืนที่ 4 ° C ในตู้เย็น ส่วนผสมสกัด sonicated ที่ 30 ° C ใน 30 นาที และ centrifuged 10, 000 × g สำหรับ 30 นาที สารตกค้างเป็นการสกัด ด้วยเมทานอล 80% 0.5 ml และ centrifuged อีก โซลูชั่นแยกสองถูกรวม และกรองผ่านตัวกรองเข็ม μm 0.45 ก่อนวิเคราะห์ HPLC โซลูชั่นมาตรฐานฟีนอหุ้นถูกเตรียมในเมทานอล 80% มีกรดอะซิติก 1% (v/v) ทั้งหมดที่ถูกกรองผ่านเยื่อหุ้ม μm 0.45 และ degassed โดยเครื่องกรองสูญญากาศก่อนใช้ทำการแบ่งแยก phenolics ใช้คอลัมน์ระยะกลับ (ODS-3, 5 μm, inertsil 4.6 × 150 mm, C/N 5020-01731, GL วิทยาศาสตร์ Inc. ประเทศญี่ปุ่น) ระยะการเคลื่อน a:กรดอะซิติก 1% ในน้ำกลั่นกรอง B: 100% เมทานอลเกรดของ HPLC โปรแกรมไล่โทนสีที่ใช้มีดังนี้: 0-5 min: 10% B, 5 – 15 นาที: B เส้นไล่ระดับ 10 – 20%, 15 – 30 นาที: B เส้นไล่ระดับ 20 – 40%, 30 – 35 นาที: 40 – 50%, 35 – 45 นาที: 50 – 80%, 45-55 นาที: 80 – 10%, 60 นาที: หยุด อัตราการไหล 0.8 ml/min และปริมาณฉีดได้ 10 μl สำหรับมาตรฐาน μl 60 สำหรับตัวอย่าง ระบบการดำเนินการที่อุณหภูมิ 40 องศาเซลเซียส ยอดได้ระบุ โดยเปรียบเทียบของแรมสเป็คตรา UV และรักษาเวลามาตรฐานแท้ ความเข้มข้นของสารฟีนอละถูกกำหนดตามยอดตั้งและปรับแต่งเส้นโค้งมาจากสารอาหารที่เกี่ยวข้อง กำหนดเนื้อหาฟีนอรวมเป็นสรุปของพื้นที่สูงสุด 6 จาก 280 nm ที่รักษาเวลานาที (RT) 3.4, 5.4 และ 11 และ 326 nm ที่ RT 12, 22 และ 34 นาที ตามลำดับ แปลงเนื้อหาฟีนอ (μg/g FW)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.6 ความมุ่งมั่นของฟีนอล
วิธี HPLC ที่ใช้สำหรับการวิเคราะห์สารประกอบฟีนอลของแต่ละบุคคล สารประกอบฟีนอสกัดตามวิธีการ (โจวเซงชิและ Xie 2008) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย 0.2 กรัมแช่แข็งเนื้อผงที่ได้รับในวิธีการเดียวกับการทดสอบการทำงานของเอนไซม์ที่ได้รับการ vortex กับ 0.8 มลเมทานอล (เมธานอล 80%, กรด 1%) สารสกัดจากนั้นข้ามคืนที่ 4 ° C ในตู้เย็น ถูก sonicated ส่วนผสมสกัดที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาทีและหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 ×กรัมเป็นเวลา 30 นาที ที่เหลือเป็นอีกครั้งที่สกัดด้วยเมทานอล 0.5 มล. 80% และปั่นอีกครั้ง สองโซลูชั่นสกัดมารวมกันและกรองผ่านตัวกรองเข็มฉีดยา 0.45 ไมโครเมตรก่อนที่จะมีการวิเคราะห์ HPLC การแก้ปัญหาสต็อกของมาตรฐานฟีนอลได้จัดทำขึ้นเมทานอล 80% 1% กรดอะซิติก (v / v) ตัวทำละลายทั้งหมดถูกกรองผ่านเยื่อ 0.45 ไมโครเมตรและ degassed โดยการกรองสูญญากาศก่อนที่จะถูกนำมาใช้. แยกฟีนอลได้รับการดำเนินการโดยใช้คอลัมน์เฟสแบบผันกลับ (inertsil ODS-3, 5 ไมครอน 4.6 × 150 มม C / N 5,020-01,731, GL วิทยาศาสตร์ อิงค์ญี่ปุ่น) เฟสเคลื่อนที่เป็น 1% กรดอะซิติกในการกรองน้ำกลั่น; B: 100% เมทานอลเกรด HPLC โปรแกรมการไล่ระดับสีที่ใช้มีดังนี้ 0-5 นาที: 10% B, 5-15 นาที: ลาดเชิงเส้น 10-20% B, 15-30 นาที: ลาดเชิงเส้น 20-40% B, 30-35 นาที: 40 50% 35-45 นาที: 50-80%, 45-55 นาที: 80-10%, 60 นาที: หยุด อัตราการไหลอยู่ที่ 0.8 มล. / นาทีและปริมาณการฉีดคือ 10 ไมโครลิตรมาตรฐาน 60 ไมโครลิตรตัวอย่าง ระบบการทำงานที่อุณหภูมิ 40 ° C ยอดเขาที่ถูกระบุโดยเปรียบเทียบของเวลาการเก็บรักษาและสเปกตรัมรังสียูวีที่มีมาตรฐานที่แท้จริง ความเข้มข้นของสารประกอบฟีนอลของแต่ละบุคคลที่ถูกกำหนดขึ้นอยู่กับพื้นที่สูงสุดและเส้นโค้งการสอบเทียบที่ได้จากการที่สอดคล้องสารประกอบของแท้ เนื้อหาฟีนอลทั้งหมดถูกกำหนดเป็นบทสรุปจาก 6 พื้นที่สูงสุดจาก 280 นาโนเมตรที่ระยะเวลาเก็บกัก (RT) 3.4, 5.4 และ 11 นาทีและ 326 นาโนเมตรที่ RT 12, 22, และ 34 นาทีตามลำดับแปลงเนื้อหาฟีนอล (ไมโครกรัม / FW กรัม)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.6 การหาวิธี HPLC ฟีน
วิเคราะห์สารประกอบฟีนอลแต่ละ สารประกอบฟีนอลิกสกัดตามวิธีการ ( Zhou Zeng Shi , & Xie , 2008 ) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย 0.2 กรัมผงเนื้อแช่แข็งได้ในวิธีเดียวกันกับเอนไซม์โดยมี vortexed ล 0.8 ml ( ปริมาณ 80% , กรดฟอร์มิก % 1 ) แล้วสกัดผ่านคืนที่ 4 ° C ในตู้เย็นส่วนผสมสกัด sonicated 30 ° C เป็นเวลา 30 นาที และระดับที่ 10 ×กรัมเป็นเวลา 30 นาที ที่เหลือก็จะสกัดด้วยเมทานอล 0.5 ml 80% ไฟฟ้าอีกครั้ง สองโซลูชั่นรวมแยกและกรองผ่าน 0.45 μ M เข็มกรองก่อนการวิเคราะห์ปริมาณซูโครส หุ้นโซลูชั่นมาตรฐานฟีนเตรียมใน 80% เมทานอลด้วย 1% กรดอะซิติก ( v / v )ทั้งหมดกรองตัวทำละลายผ่าน 0.45 μ M membranes และ degassed โดยการกรองสูญญากาศก่อนการใช้

แยกผลการใช้คอลัมน์กลับเฟส ( inertsil ods-3 5 μม. 4.6 × 150 มม. , C / N 5020-01731 GL วิทยาศาสตร์ Inc . ญี่ปุ่น เฟสเคลื่อนที่เป็น : 1% กรดอะซิติกในกรองน้ำ ; B : 100% HPLC เกรดเมทานอล การไล่ระดับสี โปรแกรมที่ใช้มีดังนี้0 – 5 นาที 10 % B , 5 – 15 นาที : เส้นไล่ระดับ 10 – 20 % B , 15 – 30 นาที : ลาดเชิงเส้น 20 – 40 % B , 30 - 35 นาที : 40 – 50 , 35 – 45 นาที : 50 – 80% , 45 และ 55 นาที 80 – 10% 60 นาทีหยุด อัตราการไหลเท่ากับ 0.8 มิลลิลิตรต่อนาทีและปริมาณการฉีดได้ 10 ลิตร สำหรับμมาตรฐาน , 60 μลิตร สำหรับตัวอย่าง ระบบดำเนินการที่อุณหภูมิ 40 องศายอดที่ถูกระบุโดยการเปรียบเทียบเวลาการเก็บรักษาและ UV แสงมาตรฐานของแท้ ความเข้มข้นของแต่ละสารประกอบฟีนอลถูกกำหนดจากพื้นที่สูงสุดและเส้นโค้งสอบเทียบที่แท้ได้มาจากสารประกอบ เนื้อหาฟีนอลิกทั้งหมดถูกกำหนดเป็นสรุปยอดพื้นที่จาก 280 nm ที่ 6 เวลาเก็บกัก ( RT ) 3.4 , 54 และ 11 นาทีและ 326 nm ที่ RT 12 , 22 และ 25 นาทีตามลำดับ แปลงเป็นฟีโนลิก เนื้อหา ( μ g / g FW )