2.4. Microbiological evaluation and

2.4. Microbiological evaluation and identification
A portion (10 g) of the sample was aseptically placed into a
sterilized bag (10 15 cm, Sunkyung Co., Seoul, ROK) with 90 mL
of sterile peptone water (0.1%) and homogenized in a stomacher
blender (Model 400, Teledyne Tekmar Co., Mason, OH USA) for
2 min. The following medium were used for culturing: plate count
agar (Difco Co., BD Diagnostic Systems, Sparks, MD USA) for total
aerobic bacteria, SS agar for Salmonella spp., MYP agar for Bacillus
cereus, 3M Petrifilm (3M Health Care, St. Paul, MN USA) for
Escherichia coli, Staphylococcus spp., and coliform bacteria, potato
dextrin agar (Difco Co., BD Diagnostic Systems, Sparks, MD USA)
for fungi. A 1 mL aliquot was spread onto plates containing one of
the above-mentioned media and incubated for bacterial growth at
35 1C for 48 h and for fungal growth at 25 1C for 5 days, under
aerobic conditions. Microbial populations from the sample cultured
in triplicate on each medium were evaluated by manually
counting the colonies on each plate.
Identification by 16S rDNA was performed using the method
of Edwards et al. (1989). Genomic DNA was extracted from
isolates of non-irradiated freeze-dried miyeokguk using a genomic
DNA isolation kit (MP Biomedicals LLC, Solon, OH USA). The
extracted DNA was purified using a QIAquicks DNA purification
kit (Qiagen, Valencia, CA USA). Amplification of 16S rRNA gene
was carried out with PCR reactions using 2 universal primers; 27F

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4. จุลินทรีย์และการระบุAseptically วางส่วน (10 กรัม) ของตัวอย่างในการผ่านการฆ่าเชื้อถุง (10 15 ซม. Sunkyung Co. โซล รอก) กับ 90 mLน้ำ peptone เป็นหมัน (0.1%) และ homogenized ในมีแผงประดับหน้าอกเครื่องปั่นรุ่น 400, Teledyne Tekmar Co. เมสัน OH อเมริกา) สำหรับ2 นาที สื่อต่อไปนี้ใช้สำหรับ culturing: จานนับอาหาร (บริษัท Difco, BD ระบบวินิจฉัย ประกายไฟ MD ประเทศสหรัฐอเมริกาทั้งหมดเชื้อแบคทีเรียแอโรบิก SS อาหารสำหรับซัล MYP อาหารสำหรับแบคทีเรียcereus, Petrifilm M 3 3M การดูแลสุขภาพ ปอ MN อเมริกา) สำหรับEscherichia coli, Staphylococcus ออกซิเจน และโคลิฟอร์ม แบคทีเรีย มันฝรั่งอาหาร dextrin (บริษัท Difco, BD ระบบวินิจฉัย ประกายไฟ MD สหรัฐอเมริกา)สำหรับเชื้อรา 1 มล.ทั้งได้กระจายลงบนแผ่นที่ประกอบด้วยหนึ่งสื่อระบุข้าง และได้รับการกกเติบโตของแบคทีเรีย35 1C สำหรับ 48 ชั่วโมง และ การเติบโตของเชื้อราที่ 25 1C 5 วัน ภายใต้สภาพแอโรบิก ประชากรจุลินทรีย์ที่เพาะเลี้ยงจากลข้อบนแต่ละถูกประเมินโดยตนเองนับอาณานิคมบนแต่ละแผ่นรหัส โดย 16S rDNA ดำเนินการโดยใช้วิธีการของเอ็ดเวิร์ด et al. (1989) ดีเอ็นเอการถูกแยกจากแยกของ irradiated ไม่แห้ง miyeokguk ใช้ในการชุดแยกดีเอ็นเอ (MP Biomedicals LLC โซลอน OH สหรัฐอเมริกา) การสกัดดีเอ็นเอบริสุทธิ์ใช้ฟอก QIAquicks ดีเอ็นเอชุด (Qiagen วาเลนเซีย CA สหรัฐอเมริกา) ขยายยีน 16S rRNAดำเนินการกับปฏิกิริยา PCR ที่ใช้ไพรเมอร์สากล 2 27F

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4 การประเมินผลทางจุลชีววิทยาและบัตรประจำตัว
ส่วน (10 กรัม) ของกลุ่มตัวอย่างถูกวางปลอดเชื้อเป็น
ถุงฆ่าเชื้อ (10 ซม. 15, Sunkyung Co. , โซล, เกาหลีใต้) 90 มิลลิลิตร
ของน้ำหมันเปปโตน (0.1%) และปั่นใน Stomacher
ปั่น (รุ่น 400, Teledyne Tekmar Co. , เมสัน, โอไฮโอสหรัฐอเมริกา) สำหรับ
2 นาที สื่อดังต่อไปนี้ถูกนำมาใช้สำหรับการเพาะเลี้ยง: จานนับ
วุ้น (Difco Co. , BD ระบบวินิจฉัย, ประกายไฟ, แมรี่แลนด์สหรัฐอเมริกา) รวมทั้งสิ้น
. แบคทีเรียแอโรบิก, SS วุ้นสำหรับเชื้อ Salmonella spp วุ้น MYP สำหรับ Bacillus
cereus, 3M Petrifilm (3M ดูแลสุขภาพ, เซนต์ปอล, มินนิโซตาสหรัฐอเมริกา) สำหรับ
Escherichia coli, Staphylococcus spp. และโคลิฟอร์มแบคทีเรียมันฝรั่ง
เดกซ์ทรินวุ้น (Difco Co. , BD วินิจฉัยระบบ, ประกายไฟ, แมรี่แลนด์สหรัฐอเมริกา)
สำหรับเชื้อรา 1 มลหารกระจายลงบนจานที่มีหนึ่งใน
สื่อดังกล่าวข้างต้นและบ่มสำหรับการเจริญเติบโตของเชื้อแบคทีเรียที่
35 1C เป็นเวลา 48 ชั่วโมงและสำหรับการเจริญเติบโตของเชื้อราที่ 25 1C เป็นเวลา 5 วันภายใต้
เงื่อนไขแอโรบิก ประชากรจุลินทรีย์จากตัวอย่างเพาะเลี้ยง
ในเพิ่มขึ้นสามเท่าในแต่ละขนาดกลางได้รับการประเมินโดยการ
นับอาณานิคมในแต่ละจาน.
ระบุตัวตนของ 16S rDNA ได้ดำเนินการโดยใช้วิธีการ
ของเอ็ดเวิร์ดส์, et al (1989) จีโนมดีเอ็นเอที่สกัดจาก
สายพันธุ์ที่ไม่ผ่านการฉายรังสี miyeokguk แห้งโดยใช้จีโนม
ชุดดีเอ็นเอแยก (MP Biomedicals LLC, โซล, โอไฮโอประเทศสหรัฐอเมริกา)
DNA ที่สกัดบริสุทธิ์ใช้ฟอก QIAquicks ดีเอ็นเอ
Kit (Qiagen, วาเลนเซีย, แคลิฟอร์เนียสหรัฐอเมริกา) การขยายของ 16S rRNA ยีน
ได้ดำเนินการกับปฏิกิริยา PCR โดยใช้ไพรเมอร์ 2 สากล 27

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4 . คุณภาพทางจุลชีววิทยาและการกำหนดส่วน ( 10 กรัม ) ของตัวอย่าง aseptically วางไว้เป็นฆ่าเชื้อถุง ( 10 15 เซนติเมตร sunkyung Co . , โซล , เกาหลีใต้ ) กับ 90 มล.เป็นหมันของเปปโตนน้ำ ( 0.1% ) และบดในแผงประดับหน้าอกเครื่องปั่น ( รุ่น 400 , teledyne tekmar Co . , เมสัน โอ สหรัฐอเมริกา ) สำหรับ2 . สื่อต่อไปนี้ที่ใช้ในการเลี้ยง : นับจาน( difco Co . , ระบบ , ประกายไฟ , แมรี่แลนด์สหรัฐอเมริกาวินิจฉัย BD ) ทั้งหมดแอโรบิคแบคทีเรียซัลโมเนลลา SS สำหรับวุ้น , วุ้น myp สำหรับเชื้อ3M ( 3M petrifilm cereus , ดูแลสุขภาพ , St . Paul , MN USA )เชื้อ Escherichia coli , Staphylococcus spp . และโคลิฟอร์มแบคทีเรีย มันฝรั่งเดกซ์ทริน ( difco Co . , ระบบ , ประกายไฟ , แมรี่แลนด์สหรัฐอเมริกาวินิจฉัย BD )สำหรับเชื้อรา ส่วนที่หารลงตัว 1 ml ก็กระจายลงบนจานที่มีหนึ่งสื่อดังกล่าวโดยให้แบคทีเรียเติบโตที่35 1C 48 H และของเชื้อราที่ 25 c 5 วัน ภายใต้เงื่อนไขแอโรบิก . จากตัวอย่างประชากรจุลินทรีย์ที่เพาะเลี้ยงทั้งสามใบในแต่ละสื่อ ได้แก่ ด้วยตนเองนับโคโลนีในแต่ละจานการจำแนกโดยการใช้วิธี 16S rDNAของ Edward et al . ( 1989 ) จีโนมดีเอ็นเอจากสายพันธุ์ที่ไม่ฉายรังสีแห้งมิยอคกุกโดยใช้จีโนมชุดแยกดีเอ็นเอ ( MP biomedicals LLC , โซลอน โอ สหรัฐอเมริกา ) ที่สกัดดีเอ็นเอบริสุทธิ์โดยใช้ดีเอ็นเอ qiaquicks บำบัดน้ำเสียชุด ( เพิ่มวาเลนเซีย , CA , USA ) การเพิ่มปริมาณของยีน 16S rRNAพบว่า PCR โดยใช้ primers ที่มีปฏิกิริยา 2 27f สากล