3.2. Identification and molecular p

3.2. Identification and molecular phylogeny of the microorganismThe findings revealed that the TN650 isolate was a filamentous,aerobic, Gram-positive, non-motile actinomycete, catalase and oxi-dase positive bacterium. It could utilize d-arabinose, d-xylose,d-glucose, cellobiose, and maltose but not adonitol, erythritol, lac-tose, starch, and mannitol. The results from API ZYM tests revealedthat it exhibited alkaline phosphatase, esterase (C4), lipase (C14),and cystein arylamidase, but not esterase lipase (C8), trypsin, and -glucuronidase activities. The 16S rRNA gene sequence from TN650(KM514481) was 99% similar to that of the S. koyangensis strainVK-A60T(AY079156) and 98% similar to that of the S. griseus subp.griseus strain IFO 13550 (AB045867) (Fig. 1). Accordingly, this iso-late could be assigned as S. koyangensis strain TN650.3.3. Purification of STAP enzymeThe STAP enzyme was purified from the culture supernatantaccording to the procedure described in Section 2. The supernatantwas obtained by the centrifugation of a 120-h old culture of theS. koyangensis strain TN650 (Fig. 2A) using broth (500 ml) as acrude enzyme solution. The protein elution profile obtained at thefinal purification step indicated that the protease was eluted at230–300 mM NaCl (data not shown).The results of the purification procedure are summarized inTable 1. The purified enzyme preparation contained about 35%of the total activity of the crude and had a specific activity of43,750 U/mg (Table 1).3.4. Molecular weight determination of STAP enzymeThe homogeneity of the purified enzyme was checked by SDS-PAGE and protein staining analysis. A single protein band wasobtained for the pooled fractions of the purified enzyme. The puri-fied STAP had a molecular weight of about 45 kDa (Fig. 2B), whichwas higher than those previously reported for other Streptomycesproteases. The exact molecular mass of the purified STAP was con-firmed by MALDI-TOF mass spectrometry as being 45125.17 Da.Zymogram activity staining revealed one zone of caseinolytic activ-ity for the purified sample co-migrating with proteins with anestimated molecular mass of 45 kDa (Fig. 2C). Taken together,these observations suggested that STAP was a monomeric proteincomparable to those previously reported for other proteases fromStreptomyces strains [27–29].

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

3.2. การระบุและมหาโมเลกุลของ microorganismThe ผลการวิจัยเปิดเผยว่า โปรตีน TN650 เป็นด้าย แอโรบิก แบคทีเรียแกรมบวก ไม่ใช่ motile actinomycete, catalase และ oxi dase แบคทีเรียบวก มันสามารถใช้ d arabinose, d-xylose, d-กลูโคส cellobiose และ maltose แต่ไม่ adonitol, erythritol, tose ค แป้ง และ mannitol ผลได้จาก API ZYM ทดสอบมันแสดงด่าง phosphatase, esterase (C4), เอนไซม์ไลเปส (C14), และ cystein arylamidase แต่ไม่ esterase เอนไซม์ไลเปส (C8), ทริปซิน และกิจกรรม - glucuronidase revealedthat ลำดับยีน 16S rRNA จาก TN650(KM514481) เป็น S. koyangensis strainVK-A60T(AY079156) 99% และ 98% คล้ายกับที่ของ S. griseus subp.griseus สายพันธุ์ IFO 13550 (AB045867) (รูปที่ 1) ดังนั้น นี้ iso ปลายมีกำหนดเป็นสายพันธุ์ S. koyangensis TN650.3.3 ทำให้บริสุทธิ์ของเอนไซม์ STAP enzymeThe STAP บริสุทธิ์จาก supernatantaccording วัฒนธรรมขั้นตอนที่อธิบายไว้ในส่วนที่ 2 Supernatantwas ที่ได้รับ โดยการหมุนเหวี่ยงของวัฒนธรรมเก่า 120-h ของประ koyangensis สายพันธุ์ TN650 (รูป 2A) ใช้น้ำซุป (500 มล.) เป็นเอนไซม์ acrude โพรไฟล์ชะโปรตีนที่ได้รับในขั้นตอนการฟอก thefinal ระบุว่า การรติเอส eluted at230 – 300 มม. NaCl (ไม่แสดงข้อมูล) ผลลัพธ์ของขั้นตอนการฟอกจะสรุป inTable 1 การเตรียมเอนไซม์บริสุทธิ์อยู่ประมาณ 35% ของกิจกรรมทั้งหมดของความดิบ และมีกับกิจกรรม of43, 750 U/mg (ตาราง 1) .3.4 น้ำหนักโมเลกุลการกำหนดรอย enzymeThe STAP ของเอนไซม์บริสุทธิ์ถูกตรวจสอบ โดย SDS-หน้าและย้อมสีการวิเคราะห์โปรตีน การ wasobtained วงโปรตีนเดี่ยวสำหรับเศษส่วน pooled ของเอนไซม์บริสุทธิ์ STAP ภูริฟองมีน้ำหนักโมเลกุลประมาณ 45 kDa (รูปที่ 2B), whichwas สูงกว่ารายงานสำหรับ Streptomycesproteases อื่น ๆ มวลโมเลกุลที่แน่นอนของ STAP บริสุทธิ์ถูกยืนยันคอน โดย MALDI TOF รเมทเป็น 45125.17 Da.Zymogram กิจกรรมย้อมสีเผยโซนหนึ่งของ caseinolytic ห้คุณสามารถใช้งานของแบตเตอรี่สำหรับตัวอย่างบริสุทธิ์ร่วมกับโปรตีนที่มีมวลโมเลกุล anestimated ของ 45 kDa (รูปที่ 2C) นำมารวมกัน ข้อสังเกตเหล่านี้แนะนำว่า STAP เป็น proteincomparable monomeric ไปที่รายงานก่อนหน้านี้สำหรับสายพันธุ์อื่น ๆ fromStreptomyces proteases [27-29]

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

3.2 บัตรประจำตัวและวิวัฒนาการในระดับโมเลกุลของการค้นพบ microorganismThe เปิดเผยว่าแยก TN650 เป็นใยแอโรบิก, แกรมบวกไม่มีเคลื่อนไหว actinomycete, catalase และ Oxi-Dase แบคทีเรียในเชิงบวก มันสามารถใช้ D-arabinose, D-ไซโลส, D-กลูโคส cellobiose และมอลโตส แต่ไม่ adonitol, Erythritol, LAC-Tose, แป้ง, และแมนนิทอล ผลที่ได้จากการทดสอบ API ZYM revealedthat มันแสดงด่าง phosphatase, esterase (C4) เอนไซม์ไลเปส (C14) และ cystein arylamidase แต่ไม่ esterase เอนไซม์ไลเปส (C8) trypsin และ? กิจกรรม -glucuronidase ลำดับของยีน 16S rRNA จาก TN650 (KM514481) เป็น 99% คล้ายกับที่ของเอส koyangensis strainVK-A60T (AY079156) และ 98% คล้ายกับที่ของ subp.griseus สายพันธุ์เอส griseus IFO 13550 (AB045867) (รูป 1) ดังนั้นนี้ ISO-ปลายจะได้รับมอบหมายเป็นเอส koyangensis TN650.3.3 ความเครียด การทำให้บริสุทธิ์ของเอนไซม์ขั้นตอนที่ enzymeThe ขั้นตอนที่ถูกทำให้บริสุทธิ์จาก supernatantaccording วัฒนธรรมไปยังขั้นตอนที่อธิบายไว้ในมาตรา 2 supernatantwas ที่ได้จากการหมุนเหวี่ยงของวัฒนธรรมเก่า 120-H ของ thes koyangensis ความเครียด TN650 (รูป. 2A) โดยใช้น้ำซุป (500 มล.) เป็นวิธีแก้ปัญหาเอนไซม์ acrude รายละเอียดโปรตีนชะได้ในขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์ thefinal ชี้ให้เห็นว่าโปรติเอสที่ถูกชะ at230-300 มิลลิโซเดียมคลอไรด์ (ไม่ได้แสดงข้อมูล) ผลของขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์ได้โดยเริ่มต้นสรุปได้ inTable 1. การเตรียมเอนไซม์ที่มีอยู่ประมาณ 35% ของกิจกรรมทั้งหมดของ น้ำมันดิบและมีกิจกรรมที่เฉพาะเจาะจง of43,750 U / mg (ตารางที่ 1) .3.4 การกำหนดน้ำหนักโมเลกุลของขั้นตอนที่ enzymeThe ความเป็นเนื้อเดียวกันของเอนไซม์ถูกตรวจสอบโดยวิธี SDS-PAGE การย้อมสีและการวิเคราะห์โปรตีน วงเดียวโปรตีน wasobtained สำหรับเศษส่วนสำรองของเอนไซม์ Puri-กระแสไฟขั้นตอนที่มีน้ำหนักโมเลกุลประมาณ 45 กิโลดาลตัน (รูป. 2B) whichwas สูงกว่าที่รายงานก่อนหน้านี้สำหรับ Streptomycesproteases อื่น ๆ มวลโมเลกุลที่แน่นอนของขั้นตอนที่บริสุทธิ์ถูก Con-ยืนยันโดยมวลสาร MALDI-TOF เป็น 45,125.17 Da.Zymogram กิจกรรมการย้อมสีเปิดเผยโซนหนึ่งของ caseinolytic Activ-ity สำหรับตัวอย่างบริสุทธิ์ร่วมการโยกย้ายกับโปรตีนที่มีมวลโมเลกุล anestimated 45 กิโลดาลตัน (รูป. 2C) ที่ร่วมกันสังเกตเหล่านี้ชี้ให้เห็นว่าขั้นตอนที่เป็น proteincomparable monomeric ให้กับผู้ที่รายงานก่อนหน้านี้สำหรับโปรตีเอสอื่น ๆ fromStreptomyces สายพันธุ์ [27-29]

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

3.2 . การระบุและระบบเชื้อชาติโมเลกุลของ microorganismthe พบว่า tn650 แยกเป็นเส้นใย แอโรบิก แกรมบวก ไม่เคลื่อนที่ และแอคติโนมัยซีท , Catalase oxi เดสบวกแบคทีเรีย มันสามารถใช้ d-arabinose d-xylose ดี กูลโคสที่ , , , , แต่ไม่โดนิทอลอีริทริตอลน้ำตาล , ครั่ง tose , แป้ง , และ 5 . จากผลการทดสอบพบว่า zym API มีอัลคาไลน์ ฟอสฟาเตส , esterase ( C4 ) , เอนไซม์ ( C14 ) และซีสเทอีน arylamidase แต่ไม่พบว่าไลเปส ( ดอง ) , เอนไซม์ , และที่มีอวัยวะต่างๆ การลำดับเบส 16S rRNA ยีนจาก tn650 ( km514481 ) คือ 99% คล้ายกับที่ของ S . koyangensis strainvk-a60t ( ay079156 ) และ 98% คล้ายกับที่ของเอส griseus subp.griseus สายพันธุ์ IFO 13550 ( ab045867 ) ( รูปที่ 1 ) ตาม ISO ขนาดนี้อาจจะมอบหมาย เช่น เอส koyangensis เมื่อย tn650.3.3 . การทำให้บริสุทธิ์ของขั้นตอน enzymethe stap เอนไซม์บริสุทธิ์จากวัฒนธรรม supernatantaccording กับขั้นตอนที่อธิบายไว้ในส่วนที่ 2 การ supernatantwas ได้โดยการหมุนเหวี่ยงของ 120-h เก่าวัฒนธรรม Thes . koyangensis เมื่อย tn650 ( รูปที่ 2A ) โดยใช้น้ำซุป ( 500 มล. ) เป็นสารละลายเอนไซม์ acrude . โปรตีนชนิดที่ได้รับในขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์ จะมีรายละเอียด พบว่า ตัวอย่างโปรเป็น at230 – 300 mM NaCl ( ข้อมูลไม่แสดง ผลของกระบวนการผลิต สรุป intable 1 การเตรียมเอนไซม์ที่มีอยู่ประมาณ 35 % ของกิจกรรมทั้งหมดของดิบและมีกิจกรรมจำเพาะ of43750 U / mg ( ตารางที่ 1 ) 3.4 . การหาน้ำหนักโมเลกุลของขั้นตอน enzymethe ความสม่ำเสมอของเอนไซม์และโปรตีนการตรวจสอบโดยการศึกษาวิเคราะห์ วงเดียวโปรตีนโดยรวมสำหรับเศษส่วนของเอนไซม์ . ที่ Puri fied stap มีน้ำหนักโมเลกุลประมาณ 45 kDa ( รูปที่ 2B ) ซึ่งสูงกว่าที่เคยรายงาน streptomycesproteases อื่น ๆ มวลโมเลกุลที่แน่นอนของบริสุทธิ์ขั้นตอนคือคอน ยืนยันโดย maldi-tof มวลสารเป็น 45125.17 ต้า ทดลองกิจกรรม staining พบโซนหนึ่งของ caseinolytic Activ ity สำหรับนำตัวอย่าง Co อพยพกับโปรตีนที่มีมวลโมเลกุล anestimated 45 กิโลดาลตัน ( รูปที่ 2 ) ถ่ายด้วยกันสังเกตเหล่านี้ชี้ให้เห็นว่าขั้นตอนเป็น proteincomparable เกิดที่ก่อนหน้านี้รายงานอื่น ๆ เพื่อ fromstreptomyces สายพันธุ์ [ 27 – 29 ]