The PCR reactionwas performed in a

The PCR reaction
was performed in a Techne Cyclogen Thermocycler
as follows: 30 minutes at 50°C (RT reaction); 94°C for
15 minutes (initial PCR activation); 39 three-step cycles
of 94°C for 30 sec for denaturation, 58°C for 1 minute
for annealing and 72°C for 2 minutes for extension;
72°C for 10 minutes (final extension). Since RT-PCR
reactions were carried out overnight, an additional
cycle at 4°C was also added to keep the RT-PCR
product at a stabilizing temperature.
A 1 KB Plus DNA ladder, Cat. No. 10787-018
(Invitrogen Life Technologies, USA) served as
molecular DNA size marker. Ten microlitres of RTPCR
and PCR products were analyzed by
electrophoresis on 1% Nusieve agarose (Sigma
Chemicals, Switzerland) with 2.5 mg/ml of ethidium
bromide and 1X TAE buffer (20X) (Sigma, Switzerland)
that is free of DNAase, RNAase, and proteinase. The
gels were run at 70V: cm for 1.5 h and visualized using
a UV transilluminator (Vilber Lourmat, France).
Reactions that produced the approximate
expected size DNA fragment, as determined by the
primer sets used in table (1), was considered positive.
Samples that contained no amplification product,
amplification product not of the expected size, or
smears were classified as negative.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ปฏิกิริยา PCR
ได้ดำเนินการใน Techne Cyclogen Thermocycler
ดังต่อไปนี้: 30 นาทีที่ 50 ° C (RT ปฏิกิริยา); 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา
15 นาที (เริ่มต้นการเปิดใช้ PCR); 39
รอบสามขั้นตอนจาก94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 วินาทีสำหรับ denaturation 58 ° C เป็นเวลา 1
นาทีสำหรับการหลอมและ72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 นาทีสำหรับการขยาย;
72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาที (ส่วนขยายสุดท้าย) ตั้งแต่ RT-PCR
ปฏิกิริยาได้ดำเนินการค้างคืนเพิ่มเติมรอบที่ 4 ° C ได้รับการเพิ่มเพื่อให้ RT-PCR สินค้าที่อุณหภูมิเสถียรภาพ. 1 KB บันไดดีเอ็นเอพลัส, แมว เลขที่ 10787-018 (Invitrogen เทคโนโลยีชีวิตสหรัฐอเมริกา) ทำหน้าที่เป็นดีเอ็นเอเครื่องหมายโมเลกุลขนาด สิบ microlitres ของ RTPCR และผลิตภัณฑ์ PCR วิเคราะห์อิเล็กเมื่อวันที่1% Nusieve agarose (Sigma สารเคมี, วิตเซอร์แลนด์) 2.5 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร ethidium bromide และบัฟเฟอร์ 1X TAE (20X) (ซิกม่า, วิตเซอร์แลนด์) ที่เป็นอิสระจาก DNAase, RNAase, และโปร เจลได้รับการทำงานที่ 70V: ซม. 1.5 ชั่วโมงและมองเห็นการใช้transilluminator ยูวี (Vilber Lourmat ฝรั่งเศส). ปฏิกิริยาที่ผลิตประมาณชิ้นดีเอ็นเอขนาดคาดว่าตามที่กำหนดโดยชุดไพรเมอร์ที่ใช้ในตาราง(1) ได้รับการพิจารณาในเชิงบวก . ตัวอย่างที่มีการขยายสินค้าที่ไม่มีสินค้าที่ไม่ได้ใช้เครื่องขยายเสียงขนาดที่คาดหวังหรือรอยเปื้อนถูกจัดให้เป็นเชิงลบ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การตรวจปฏิกิริยา
แสดงใน techne cyclogen เทอร์มอไซเคล ์
ดังนี้ : 30 นาทีที่ 50 ° C ( ปฏิกิริยา RT ) ; 94 ° C
15 นาที ( การเริ่มต้น ) ) ; 39 3 รอบ
94 ° C เป็นเวลา 30 วินาทีสำหรับการหยุดชั่วคราว , 58 องศา C เป็นเวลา 1 นาที
สำหรับการอบและ 72 ° C เป็นเวลา 2 นาที สำหรับการส่งเสริม ;
72 ° C เป็นเวลา 10 นาที ( ส่วนขยายสุดท้าย ) เนื่องจากปฏิกิริยา RT-PCR
ศึกษาเพิ่มเติม
ค้างคืนรอบที่ 4 ° C ก็เพิ่มเพื่อให้ผลิตภัณฑ์ที่อุณหภูมิคงที่นี้
.
1 กิโลพร้อมบันไดดีเอ็นเอแมว ไม่ 10787-018
( Invitrogen ชีวิตเทคโนโลยี , USA ) ทำหน้าที่เป็นโมเลกุลขนาด
ดีเอ็นเอเครื่องหมาย 10 microlitres ผลิตภัณฑ์ rtpcr

และวิเคราะห์โดยวิธี PCR ใน 1% nusieve ( Sigma
, สารเคมี , สวิตเซอร์แลนด์ ) 2.5 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรและโบรไมด์คู่
1 x แทบัฟเฟอร์ ( 20x ) ( ซิกม่าสวิตเซอร์แลนด์ )
ที่ฟรี dnaase rnaase , และโปรตีน .
เจลถูกเรียก 70v : 1.5 ซม. และใช้ UV ตรวจ H
transilluminator ( vilber lourmat , ฝรั่งเศส ) .
ปฏิกิริยาที่ผลิตประมาณ
คาดว่าชิ้นส่วนดีเอ็นเอขนาดตามที่กำหนดโดย
primer ชุดที่ใช้ในโต๊ะ ( 1 ) ถือว่าเป็นบวก ตัวอย่าง ที่อยู่ไม่ขยาย
ผลิตภัณฑ์
การเพิ่มปริมาณของผลิตภัณฑ์ไม่ได้คาดหวังขนาด จำแนกเป็นรอยเปื้อนหรือ

ลบ .