2.5. Analytical methodsThe cell con

2.5. Analytical methods
The cell concentrations were measured in a 10-mm-path-length
cuvette using a double-beam spectrophotometer (Lambda 20,
PerkinElmer; Norwalk, CT, USA). One unit of absorbance at
600 nm (OD600) corresponded to 0.31 g of the dried cell mass per
liter. The protein concentrations in the cell-free extract were determined
using the Bradford method (Bradford, 1976) on a microtiter
plate reader (1420, Wallac Victor 2; PerkinElmer) with bovine serum
albumin as the standard. The concentrations of glycerol and
other metabolites were determined by high performance liquid
chromatography (Agilent Technologies, USA) using a slight modification
of the method reported by Raj et al. (2008). Briefly, the
supernatants, which were obtained by centrifuging the culture
samples at 10,000g for 10 min, were filtered through a Tuffryn
membrane (Acrodisc, Pall Life Sciences) and eluted through a
300  7.8 mm Aminex HPX-87H (Bio-Rad, USA) column at 65 C.
The mobile phase and flow rate were 2.5 mM H2SO4 and 0.5 mL/
min, respectively. All experiments were carried out at least three
times to ensure reproducibility and the values were averaged. Unless
indicated otherwise, the data reported is the mean of three
independent measurements and the standard deviation of the
measurements was less than 10%.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.5 การวิเคราะห์วิธี
ความเข้มข้นเซลล์ถูกวัดเป็น 10 มม.เส้นทางความยาว
cuvette ที่ใช้เครื่องทดสอบกรดด่างลำแสงคู่ (แลมบ์ดา 20,
PerkinElmer Norwalk, CT สหรัฐอเมริกา) หนึ่งหน่วย absorbance ที่
600 nm (OD600) corresponded กับ 0.31 กรัมของมวลเซลล์แห้งต่อ
ลิตร มีกำหนดความเข้มข้นของโปรตีนในสารสกัดเซลล์ฟรี
ใช้วิธีแบรดฟอร์ด (แบรดฟอร์ด 1976) ใน microtiter เป็น
แผ่นอ่าน (1420, Wallac วิคเตอร์ 2 PerkinElmer) กับซีรั่มวัว
albumin เป็นมาตรฐาน ความเข้มข้นของกลีเซอร และ
metabolites อื่นถูกกำหนด โดยของเหลวประสิทธิภาพสูง
chromatography (Agilent เทคโนโลยี สหรัฐอเมริกา) ใช้ปรับเปลี่ยนเล็กน้อยของค
วิธีรายงานโดยราช et al. (2008) สั้น ๆ การ
supernatants ซึ่งได้รับมา โดย centrifuging วัฒนธรรม
อย่างที่ 10000 g สำหรับ 10 นาที ถูกกรองผ่าน Tuffryn
เมมเบรน (Acrodisc แถบวายชีวิตวิทยาศาสตร์) และ eluted ผ่านการ
คอลัมน์ Aminex HPX - 87H (Bio Rad สหรัฐอเมริกา) 7.8 มม. 300 ที่ 65 C.
เฟสเคลื่อนที่และอัตราการไหลได้ 2.5 มม.กำมะถันและ 0.5 mL /
นาที ตามลำดับ ทดลองทั้งหมดถูกทำ 3
เวลา reproducibility และค่าถูก averaged ยกเว้น
ระบุมิฉะนั้น ข้อมูลรายงานเป็นค่าเฉลี่ยของ 3
ประเมินอิสระและส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานของการ
วัดได้น้อยกว่า 10%

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.5 วิธีการวิเคราะห์
ความเข้มข้นของเซลล์ถูกวัดใน 10 มมเส้นทางยาว
cuvette ที่ใช้ spectrophotometer สองคาน (แลมบ์ดา 20,
กำ; วอล์ค, CT, USA) หนึ่งหน่วยของการดูดกลืนแสงที่
600 นาโนเมตร (OD600) สอดคล้องกับ 0.31 กรัมของมวลเซลล์แห้งต่อ
ลิตร ความเข้มข้นของโปรตีนในสารสกัดจากเซลล์ฟรีได้รับการพิจารณา
โดยใช้วิธี Bradford (Bradford, 1976) ในไมโคร
อ่านแผ่น (1420, วิคเตอร์ Wallac 2; กำ) กับซีรั่มวัว
อัลบูมิเป็นมาตรฐาน ความเข้มข้นของกลีเซอรอลและ
สารอื่น ๆ ที่ถูกกำหนดโดยของเหลวสมรรถนะสูง
โครมาโต (Agilent Technologies, USA) โดยใช้การปรับเปลี่ยนเล็กน้อย
ของวิธีการรายงานโดยราชาและคณะ (2008) สั้น ๆ ,
supernatants ซึ่งได้จากการปั่นแยกวัฒนธรรม
ตัวอย่างที่ 10,000g 10 นาทีถูกกรองผ่าน Tuffryn
เมมเบรน (Acrodisc พอลวิทยาศาสตร์สิ่งมีชีวิต) และชะผ่าน
300? 7.8 มม Aminex HPX-87H (Bio-Rad, USA) คอลัมน์ที่ 65 องศาเซลเซียส
เฟสเคลื่อนที่และอัตราการไหลอยู่ที่ 2.5 มิลลิ H2SO4 และ 0.5 มิลลิลิตร /
นาทีตามลำดับ การทดสอบทั้งหมดได้ดำเนินการอย่างน้อยสาม
ครั้งเพื่อให้แน่ใจว่าการทำสำเนาและค่านิยมที่ถูกเฉลี่ย ยกเว้นกรณีที่
ระบุไว้เป็นอย่างอื่นข้อมูลที่มีการรายงานเป็นค่าเฉลี่ยของสาม
วัดอิสระและส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานของ
การวัดน้อยกว่า 10%

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.5 วิธีการวิเคราะห์
เซลล์ความเข้มข้นที่วัดได้ 10 มิลลิเมตรความยาวเส้นทาง
พิทยาพลโดยใช้ Spectrophotometer ลำแสงคู่ ( แลมบ์ดา 20
Perkinelmer ; Norwalk , CT , สหรัฐอเมริกา ) หนึ่งหน่วยของค่าการดูดกลืนแสงที่
600 nm ( od600 ) สอดคล้องกับ 0.31 กรัม แห้งมวลเซลล์ต่อ
ลิตร โปรตีนสกัดเข้มข้นในการสังเคราะห์สารละลาย
ใช้วิธี Bradford ( แบรดฟอร์ด1976 ) บนไมโครเพลท ( อ่าน 1420 wallac
, วิคเตอร์ 2 Perkinelmer ) กับวัวเซรั่ม
อัลบูมินเป็นมาตรฐาน ความเข้มข้นของกลีเซอรอลและสารอื่น ๆตัดสินใจ

โดยวิธีโครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูง ( Agilent Technologies , USA ) การปรับเปลี่ยนเล็กน้อย
ของวิธีการรายงานโดยราจ et al . ( 2008 ) สั้น ๆ , supernatants
,ที่ได้รับจากสารตัวอย่างที่ 10000g วัฒนธรรม
10 นาทีถูกกรองผ่านเมมเบรน tuffryn
( acrodisc มากกว่าชีวิตวิทยาศาสตร์ ) และตัวอย่างผ่าน
300  7.8 มิลลิเมตร aminex hpx-87h ( USA ไบแรด ) คอลัมน์ที่ 65  C .
เฟสเคลื่อนที่ และอัตราการไหล คือกรดซัลฟิวริกและ 0.5 2.5 มม. ML /
นาที ตามลำดับ ทุกการทดลองอย่างน้อยสาม
ครั้ง เพื่อให้กระชับและมีค่าเฉลี่ย นอกจาก
) มิฉะนั้น ข้อมูลที่รายงานเป็นค่าเฉลี่ยของการวัด 3
อิสระ และส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานของ
การวัดน้อยกว่า 10%