four sequential steps. Dialysed S35

four sequential steps. Dialysed S35 extracts were mixed slowly with
0.1 vol. 1 % (w/v) protamine sulphate (Sigma) in TM buffer with gentle
agitation for 20 min. The nucleic acid precipitate was removed by
centrifugation at 15000g for 20 rnin and the supernatant was
chromatographed through a DEAE-Sephacel (Pharmacia) anion
exchange column equilibrated with TM buffer. The column was
washed with 200 ml of TM buffer and the proteins eluted with 200 ml of
a linear gradient (0-0.5 M) of ammonium sulphate in TM buffer. The
active fractions were collected, pooled and fractionated with increasing
concentrations of ammonium sulphate (Sigma; enzyme grade). Most of
the L-asparaginase activity precipitated in the 30-45 % saturation
fraction. The enzyme precipitate was dissolved in TM buffer and
filtered through a Sephacryl S-200 or Sephadex G-200 column
(2.6 x 100 cm), eluting with TM buffer at a flow rate of 0.5 ml min-l.
The M, of L-asparaginase was calculated by comparison with globular
proteins of known M, (Pharmacia calibration kit). Partially purified
preparations kept their activity when frozen at - 80 "C but lost 50% of
their activity in 5 d at 4 "C.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สี่ขั้นตอนตามลำดับ Dialysed S35 สารสกัดรวมช้าด้วย0.1 ฉบับซัลเฟตลาเท็กซ์ 1% (w/v) (Sigma) ในบัฟเฟอร์ TM ด้วยอ่อนโยนอาการกังวลต่อ 20 นาที ตะกอนกรดนิวคลีอิกถูกเอาออกโดยหมุนเหวี่ยงที่ 15000g 20 rnin และ supernatant ถูกchromatographed ผ่านการไอออน DEAE-Sephacel (ฟาร์)คอลัมน์แลก equilibrated กับบัฟเฟอร์ TM แก้ไขคอลัมน์ล้าง ด้วย 200 ml ของบัฟเฟอร์ TM และ eluted ด้วย 200 ml ของโปรตีนการไล่ระดับสีเชิงเส้น (0-0.5 M) ของแอมโมเนียมซัลเฟตในบัฟเฟอร์ TM การเศษส่วนที่ใช้งานอยู่ถูกเก็บรวบรวม pooled และ fractionated กับเพิ่มความเข้มข้นของแอมโมเนียมซัลเฟต (Sigma เกรดเอนไซม์) ส่วนใหญ่ของกิจกรรม L-asparaginase ที่ตกตะกอนในอิ่มตัว 30-45%เศษส่วน ละลายตะกอนเอนไซม์ในบัฟเฟอร์ TM และกรองผ่านคอลัมน์ Sephacryl S-200 หรือ Sephadex G-200(2.6 x 100 ซม.), eluting กับ TM บัฟเฟอร์ที่อัตราการไหล 0.5 ml นาที-lM, L-asparaginase ของคำนวณโดยเปรียบเทียบกระจุกโปรตีนของรู้จัก M, (ชุดสอบเทียบฟาร์) บริสุทธิ์บางส่วนการเตรียมการเก็บกิจกรรมของพวกเขาเมื่อแช่แข็งที่ - 80 "C แต่หายไป 50% ของกิจกรรมใน 5 d ที่ 4 c "

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สี่ขั้นตอนตามลำดับ สารสกัดจากไต S35 ถูกผสมช้าด้วย
0.1 โดยปริมาตร 1% (w / v) protamine ซัลเฟต (Sigma) ใน TM buffer กับอ่อนโยน
กวนเป็นเวลา 20 นาที ตะกอนกรดนิวคลีอิกถูกลบออกโดย
การหมุนเหวี่ยงที่ 15000g 20 rn ในและสารละลายที่ถูก
chromatographed ผ่าน DEAE-Sephacel (Pharmacia) ไอออน
คอลัมน์แลกเปลี่ยน equilibrated กับ TM บัฟเฟอร์ คอลัมน์นี้ถูก
ล้างด้วย 200 มล. ของ TM บัฟเฟอร์และโปรตีนชะกับ 200 มิลลิลิตร
ลาดเชิงเส้น (0-0.5 M) แอมโมเนียมซัลเฟตใน TM บัฟเฟอร์
เศษส่วนที่ใช้งานได้เก็บรวบรวมและ fractionated กับการเพิ่ม
ความเข้มข้นของแอมโมเนียมซัลเฟต (ซิกม่า; เอนไซม์เกรด) ส่วนใหญ่ของ
กิจกรรม L-แอสปาราตกตะกอนในอิ่มตัว 30-45%
ส่วน
ตะกอนเอนไซม์ถูกละลายใน TM บัฟเฟอร์และ กรองผ่าน Sephacryl S-200 หรือ Sephadex G-200 คอลัมน์
(2.6 x 100 ซม.) eluting กับบัฟเฟอร์ TM ที่อัตราการไหล 0.5 มลนาที-L
เอ็มของ L-แอสปาราที่คำนวณได้จากการเปรียบเทียบกับรูปทรงกลม
ของโปรตีนที่รู้จักกัน M (ชุดสอบเทียบ Pharmacia) บางส่วนบริสุทธิ์
เตรียมเก็บไว้กิจกรรมของพวกเขาเมื่อแช่แข็งที่ - 80 "C แต่หายไป 50% ของ
กิจกรรมของพวกเขาใน 5 D ที่ 4" ซี

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สี่ขั้นตอนที่ต่อเนื่องกัน สารสกัดจาก dialysed S35 ปะปนกันอย่างช้า ๆ1 อัตรา 0.1 % ( w / v ) โพรทามีนซัลเฟต ( Sigma ) ในบัฟเฟอร์ที่มีอ่อนโยนสำหรับเขย่าสำหรับ 20 นาทีที่ถูกลบออกโดยกรดนิวคลีอิกปั่นที่ 15000g 20 rnin และสูงคือchromatographed ผ่านการทำเอนไซม์ ( มุ่งมั่น ) แอนไอออนเสาตรา equilibrated กับ TM บัฟเฟอร์ คอลัมน์ คือล้างด้วย 200 มิลลิลิตร และบัฟเฟอร์ ซึ่งโปรตีนตัวอย่าง 200 มิลลิลิตรลาดเชิงเส้น ( ท ) แอมโมเนียม ซัลเฟตใน TM บัฟเฟอร์ ที่เศษส่วน งานรวบรวมและการรวมลำดับความเข้มข้นของแอมโมเนียซัลเฟต ( ซิกม่า เกรดเอนไซม์ ) มากที่สุดของกิจกรรมที่ l-asparaginase ตกตะกอนใน 30-45% ความอิ่มตัวเศษส่วน เอนไซม์ที่ถูกละลายใน TM และบัฟเฟอร์กรองผ่านคอลัมน์ Sephadex G-200 sephacryl s-200 หรือ( 2.6 x 100 ซม. ) , hexane กับ TM บัฟเฟอร์ ที่อัตราการไหล min-l. 0.5 มล.M , l-asparaginase ถูกคำนวณโดยการเปรียบเทียบกับรูปทรงกลมโปรตีนหรือ M ( มุ่งมั่นสอบเทียบชุด ) บริสุทธิ์บางส่วนการเตรียมเก็บกิจกรรมของพวกเขาเมื่อแช่แข็งที่อุณหภูมิ - 80 " C แต่เสีย 50% ของกิจกรรมที่ 4 ของ 5 D " C