2.6. Acetylcholinesterase sequencin

2.6. Acetylcholinesterase sequencing
PCR was conducted to amplify a region of the acetylcholinesterase
(AChE) gene, since the enzyme encoded by this gene
is the target of organophosphate s. The amplified region encompasses
the two residues that have been found mutated in strains
of Culex pipiens, Cx. tritaeniorhynchus, Cx. vishnui, Anopheles gambiae
and An. albimanus resistant to organophosphates (F290V and
F455W) (Weill et al., 2004) and is located within the gene’s 5th
exon. For this assay, ten adults from F17 RecR and from Rockefeller
were analyzed. Primers (F: 5-CGATAACGAATGGGGAACG-3 and R:
5-TCAGAGGCTCACCGAACACA-3) were designed based on the full
length AChE cDNA (accession on GenBank: EF209048) using the
PrimerSelect software, available in the DNAstar package (Lasergene
7.1). These primers amplify a region of around 500 bp of the gene.
PCR conditions were: 5min at 94 ◦C, followed by 30 cycles of 1min
at 94 ◦C, 1min at 60 ◦C and 2min at 72 ◦C, with a final extension
for 10 min at 72 ◦C. PCR amplicons were purified using GFXTM PCR
DNA and Gel Band Purification (Amersham Pharmacia Biotech) and
sequenced using an ABI 3100. Sequences were edited and analyzed
through the BioEdit (version 7.0.4.1) software.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.6 การปรุงลำดับPCR ดำเนินการขยายพื้นที่ของการปรุงยีน (aChE) ตั้งแต่เอนไซม์ที่ถูกเข้ารหัส โดยยีนนี้เป็นเป้าหมายของ s เป็น organophosphate ครอบคลุมพื้นที่ขยายตกสองที่พบกลายในสายพันธุ์ของเร็น pipiens, Cx vishnui, Cx. tritaeniorhynchus, gambiae ชนิดยุงก้นปล่องและชมกัน albimanus organophosphates (F290V และF455W) (Weill et al. 2004) และอยู่ภายในยีนของ 5exon สำหรับการทดสอบนี้ ผู้ใหญ่สิบ จาก F17 RecR และร็อคกี้เฟลเลอร์ได้วิเคราะห์ ไพรเมอร์ (f: 5 - CGATAACGAATGGGGAACG-3 และ R:5 - TCAGAGGCTCACCGAACACA-3) มีการออกแบบเต็มความยาวปวด cDNA (ภาคยานุวัติใน GenBank: EF209048) โดยใช้การซอฟต์แวร์ PrimerSelect ในแพ DNAstar (Lasergene7.1) . ไพรเมอร์เหล่านี้ขยายพื้นที่ประมาณ 500 bp ยีนเงื่อนไข PCR ได้: 5 นาทีที่ 94 ◦C ตาม ด้วย 30 รอบ 1 นาทีที่ 94 ◦C, 1 นาที ที่ 60 ◦C และ 2 นาทีที่ 72 ◦C ขยายสุดท้ายสำหรับ 10 นาทีที่ 72 ◦C PCR amplicons ได้บริสุทธิ์โดยใช้ GFXTM PCRดีเอ็นเอและเจวงฟอก (Amersham Pharmacia เทคโนโลยีชีวภาพ) และเรียงลำดับโดยใช้ 3100 ABI แก้ไข และวิเคราะห์ลำดับผ่านโปรแกรม BioEdit (รุ่น 7.0.4.1)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.6 ปรุงลำดับ
PCR ได้ดำเนินการเพื่อขยายพื้นที่ของสารที่
(เจ็บ) ยีนเนื่องจากเอนไซม์เข้ารหัสโดยยีนนี้
เป็นเป้าหมายของ organophosphate ฯ ภูมิภาคขยายครอบคลุม
ตกค้างทั้งสองที่มีการพบการกลายพันธุ์ในสายพันธุ์
ของยุง pipiens, Cx tritaeniorhynchus, Cx vishnui, ยุงก้นปล่อง gambiae
และ albimanus ทนต่อ organophosphates (F290V และ
F455W) (Weill et al., 2004) และตั้งอยู่ภายในวันที่ 5 ของยีนของ
เอกซ์ซอน สำหรับการทดสอบนี้สิบผู้ใหญ่จาก F17 RecR และจาก Rockefeller
ถูกนำมาวิเคราะห์ ไพรเมอร์ (F: 5 -CGATAACGAATGGGGAACG 3 และ R:?
5 -TCAGAGGCTCACCGAACACA-3?) ได้รับการออกแบบบนพื้นฐานของเต็ม
ความยาวเจ็บยีน (ภาคยานุวัติใน GenBank: EF209048) โดยใช้
ซอฟแวร์ PrimerSelect ที่มีอยู่ในแพคเกจ DNAstar (Lasergene
7.1) ไพรเมอร์เหล่านี้ขยายพื้นที่ของประมาณ 500 bp ของยีนได้.
เงื่อนไข PCR คือ: 5 นาทีที่ 94 ◦Cตามด้วย 30 รอบของ 1min
ที่ 94 ◦C, 1min ที่ 60 ◦Cและ 2min ที่ 72 ◦C, มีนามสกุลสุดท้าย
เป็นเวลา 10 นาทีที่ 72 ◦C amplicons PCR บริสุทธิ์โดยใช้วิธี PCR GFXTM
DNA และเจลฟอกวง (Amersham Pharmacia ไบโอเทค) และ
หาลำดับการใช้ ABI 3100. ลำดับถูกแก้ไขและวิเคราะห์
ผ่าน BioEdit นี้ (เวอร์ชั่น 7.0.4.1) ซอฟแวร์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.6 ลำดับทิลโคลีนโดยมีวัตถุประสงค์เพื่อขยายขอบเขตของทิลโคลีน( ปวด ) ยีน เนื่องจากเอนไซม์ที่เข้ารหัสโดยยีนคือเป้าหมายของปรอท เอสเอ็นเอภูมิภาคครอบคลุมสองตกค้างที่พบในสายพันธุ์ที่กลายพันธุ์ของทาง pipiens ราคาถูก , . ยุงราคาถูก , . vishnui นอฟีเล็ส แกมบิเ ,และ . albimanus ทนต่อออร์กาโนฟอสเฟต ( f290v และf455w ) ( Weill et al . , 2004 ) และตั้งอยู่ภายใน 5 ของยีน8 . สำหรับการทดสอบนี้ สิบผู้ใหญ่จาก f17 recr จากรอกกี้เฟลเลอร์ข้อมูล ไพรเมอร์ 5-cgataacgaatggggaacg-3 ( F : r :5-tcagaggctcaccgaacaca-3 ) ถูกออกแบบบนพื้นฐานเต็มความยาวยีน ( การปวดในขนาด : ef209048 ) โดยใช้ซอฟต์แวร์ primerselect ที่มีอยู่ในแพคเกจ dnastar ( lasergene7.1 ) ไพรเมอร์เหล่านี้ขยายพื้นที่ประมาณ 500 คู่เบสของยีนโดยมีเงื่อนไข : 5 นาทีที่ 94 ◦ C ตามด้วย 1 นาที 30 รอบที่ 94 ◦ C 1 นาทีที่ 60 ◦ C และ 2min 72 ◦ C กับนามสกุลสุดท้ายสำหรับ 10 นาทีที่ 72 ◦ C amplicons บริสุทธิ์ใช้ gfxtm PCR PCR คือดีเอ็นเอและการวงดนตรี เจล ( ที่มุ่งมั่น ไบโอเทค ) และลำดับการใช้อบิ 3100 . แก้ไขและวิเคราะห์ลำดับคือผ่าน bioedit ( รุ่น 7.0.4.1 ) ซอฟต์แวร์