2.2. Bacterial strains and experime

2.2. Bacterial strains and experimental infection
For the experimental infection, a virulent strain of V. harveyi isolated earlier from moribund P. monodon larvae (Maiti et al., 2009)and maintained in glycerol broth at −80◦C in the lab stock was taken and reactivated in tryptone soya broth containing 1% sodiumchloride (TSBS). The overnight grown culture was centrifuged at 4000 × g for 15 min to harvest the bacterial cells, washed twice with sterile phosphate buffered saline (PBS), and viable count estimated by plating serial dilutions on tryptone soya agar plates containing 1% sodium chloride (TSAS). The culture was inactivated by heating at 60◦C for 1 h. 100 l of the bacterial suspension with a cell density of 4.6 × 108 cfu ml−1 was injected intramuscularly to the shrimp between the third and fourth abdominal segment. After 18 h post-injection, haemolymph was drawn using a syringe rinsed and preloaded with 50 l of 2% EDTA. Haemolymph was also collected from healthy P. monodon that served as control and stored at −80◦C(Sanyo, Japan) for further study.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.2. แบคทีเรียสายพันธุ์และการติดเชื้อที่ทดลองการติดเชื้อการทดลอง เมื่อย virulent ของ V. harveyi ก่อนหน้านี้แยกจากตัวอ่อน moribund P. monodon (Maiti et al. 2009) และเก็บไว้ในกลีเซอรอลซุปที่ −80◦C ในสต็อกห้องปฏิบัติได้ดำเนินการ และเปิดในซุปถั่วเหลือง tryptone sodiumchloride 1% (TSBS) ที่ประกอบด้วย วัฒนธรรมปลูกข้ามคืนถูกเหวี่ยงที่ 4000 × g 15 นาทีเกี่ยวเซลล์แบคทีเรีย ล้างสองครั้ง ด้วยหมันฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ำเกลือ (PBS), และได้จำนวนที่ประเมิน โดยชุบ dilutions อนุกรมใน tryptone เหลืองอาหารจานที่ประกอบด้วยโซเดียมคลอไรด์ 1% (TSAS) วัฒนธรรมถูกยก โดยที่ 60◦C สำหรับ 1 h. l 100 ระงับแบคทีเรียกับความหนาแน่นเซลล์ของ 4.6 × 108 โยง ml−1 ถูกฉีดเข้ากล้ามเนื้อกุ้งระหว่างเซ็กเมนต์สาม และสี่ท้อง หลังจากฉีดหลัง 18 h, haemolymph ถูกวาดโดยใช้เข็มฉีดยาล้าง และมี 50 ลิตรของ EDTA 2% Haemolymph ยังรวบรวมจากสุขภาพ P. monodon ที่เป็นตัวควบคุม และเก็บไว้ที่ −80◦C (ซันโย ญี่ปุ่น) เพื่อการศึกษา

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.2 สายพันธุ์ของเชื้อแบคทีเรียและการติดเชื้อจากการทดลอง
สำหรับการติดเชื้อทดลองสายพันธุ์รุนแรงของ V. harveyi แยกจากก่อนหน้านี้ย่ำแย่กุ้งกุลาดำตัวอ่อน (Maiti et al., 2009) และการบำรุงรักษาในกลีเซอรอลน้ำซุปที่-80◦Cในสต็อกห้องปฏิบัติการและถูกนำตัว เปิดใช้งานใน Tryptone น้ำซุปถั่วเหลืองที่มี sodiumchloride 1% (TSBs) วัฒนธรรมที่ปลูกในชั่วข้ามคืนถูกหมุนเหวี่ยงที่ 4000 ×กรัมเป็นเวลา 15 นาทีในการเก็บเกี่ยวเซลล์แบคทีเรียล้างครั้งที่สองที่มีการฆ่าเชื้อฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ำเกลือ (PBS) และนับทำงานได้ประมาณโดยชุบเจือจางอนุกรมบน Tryptone ถั่วเหลืองแผ่นวุ้นที่มีโซเดียมคลอไรด์ 1% (TSAs ) วัฒนธรรมถูกยกเลิกด้วยความร้อนที่60◦Cเป็นเวลา 1 ชั่วโมง 100 ลิตรระงับเชื้อแบคทีเรียที่มีความหนาแน่นของเซลล์ 4.6 × 108 CFU ML-1 ได้รับการฉีดกุ้งระหว่างส่วนท้องสามและสี่ หลังจาก 18 ชั่วโมงหลังฉีดเลือดถูกดึงโดยใช้เข็มฉีดยาล้างและโหลดไว้กับ 50 ลิตร 2% EDTA เลือดก็ยังเป็นที่เก็บรวบรวมจากกุ้งกุลาดำที่มีสุขภาพดีที่ทำหน้าที่เป็นตัวควบคุมและเก็บไว้ที่-80◦C (ซันโยญี่ปุ่น) สำหรับการศึกษาต่อ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.2细菌株感染和实验。对实验感染的菌株，一个孤立的virulent哈维氏弧菌V . P .斑节对虾幼虫从moribund earlier（Maiti2009等人，一直保持着在甘油肉汤）和C - 80是否在股票是在实验室和在tryptone taken激活soya肉汤（1）containing sodiumchloride TSBS overnight长大。在文化centrifuged）是4000×g min为15到收获的细菌细胞，磷酸盐缓冲saline洗twice与sterile（PBS），和通过电镀dilutions estimated viable计数序列在tryptone氯化钠琼脂板containing soya 1%）。（TSAS）是通过加热灭活培养1 h在分为60 100 L C。的细菌悬浮液的细胞密度与一个4.6 CFU ml - 1×108到injected之间是intramuscularly虾的第三和第四段。18腹后，drawn H post-injection haemolymph是使用注射器冲洗和preloaded a与L的EDTA或50 2%是从P .斑节对虾健康活泼collected也在这过程中配上控制80 As和C（三洋，分为进一步研究日本）。