B, Table S-1, Table S-2). The abili

B, Table S-1, Table S-2). The ability to tune the mechanical properties
of the resulting gel over a large range by simply changing the
ratio of the two polymers allows control over gel stiffness while
keeping other parameters such as polymer concentration, and
ligand density constant which may be useful for studies of
mechanobiology.
The swelling ratio of hydrogel systems can affect mechanical
properties, mass transport, and the presentation of ligands on the
gel surface. To investigate how volumetric swelling would change
at different polymer concentrations and N:T ratios, click alginate
hydrogels were made as previously described and allowed to swell
for 24 h at 37 C. The swollen volume was measured and compared
to the casted volume (Fig. 2-C). For a given polymer concentration,
the volumetric swelling ratio increased as the N:T ratio deviated
from 1, demonstrating an inverse relationship between mechanical
properties and swelling ratio as expected. While the N:T ratio has a
significant effect on the swelling ratio, the polymer concentration
does not have a significant effect, indicating that the swelling ratio
of click alginate is dominated by crosslink density rather than
polymer concentration (Table S-3).
3.3. Post-gelation modification of click alginate hydrogels
To explore if additional functionalities can be introduced to click
alginate hydrogels after polymerization, we grafted thiolcontaining
molecules onto unreacted norbornenes in pre-formed
click alginate hydrogels using a photoinitiated thiol-ene reaction
(Fig. 3-A). Gels with N:T ¼ 2 were used to ensure unreacted norbornenes
were available to react after the initial gelation. RGD
peptide solutions at high (2 mM) or low (0.2 mM) concentration
were reacted onto the surface of these click alginate hydrogels,
which were then seeded with NIH 3T3 fibroblasts expressing a
cytosolic fluorescent marker (EGFP). 3T3 cells readily adhered and
spread on gels modified with RGD, while very few cells were able to
attach or elongate on control gels with no RGD (Fig. 3-B). Cells on
click alginate hydrogels presenting RGD were able to form
branched interconnected networks, with a significant RGD densitydependent
2e3 fold increase in surface coverage over the 3 day
culture, while unmodified click alginate gels were observed to be
non-cell-adhesive and showed a decrease in surface coverage by
cells over time (Fig. 3-C). After 3 days in culture, cells also showed
an increase in spreading and actin stress fiber formation with
higher RGD concentration (Fig. 3-D). Additionally, the high viability
of cells after 3 days of culture demonstrated the cytocompatibility
of the click alginate hydrogels for 2D cell culture (Fig. 3-E).
3.4. Cell encapsulation in click alginate hydrogels
In order to demonstrate the utility of click alginate hydrogels for
cell encapsulation, cell viability and metabolic activity of cells
encapsulated in click alginate hydrogels were investigated over a 3
day culture period; ionically crosslinked hydrogels were used for
comparison in these studies. Representative images of encapsulated
cells stained with ethidium homodimer-1 show minimal cell
death in both click and ionically crosslinked gels 4 h and 3 days
after encapsulation (Fig. 4-A). Quantification revealed that click
alginate hydrogels resulted in significantly higher viability of
encapsulated 3T3 cells both immediately after encapsulation
(93 ± 1% vs. 87 ± 2%) and after 3 days of culture (84 ± 2% vs. 79 ± 4%)
(Fig. 4-B). It should be noted that a loss in measured cell viability
may occur during the cell retrieval process by enzymatic digestion
of the hydrogels. The overall metabolic activity of the cells encapsulated
in the different hydrogels was also analyzed, and noted to
increase over the 3 day culture period for both hydrogel crosslinking
chemistries (Fig. 4-C).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

B, Table S-1, Table S-2). The ability to tune the mechanical propertiesof the resulting gel over a large range by simply changing theratio of the two polymers allows control over gel stiffness whilekeeping other parameters such as polymer concentration, andligand density constant which may be useful for studies ofmechanobiology.The swelling ratio of hydrogel systems can affect mechanicalproperties, mass transport, and the presentation of ligands on thegel surface. To investigate how volumetric swelling would changeat different polymer concentrations and N:T ratios, click alginatehydrogels were made as previously described and allowed to swellfor 24 h at 37 C. The swollen volume was measured and comparedto the casted volume (Fig. 2-C). For a given polymer concentration,the volumetric swelling ratio increased as the N:T ratio deviatedfrom 1, demonstrating an inverse relationship between mechanicalproperties and swelling ratio as expected. While the N:T ratio has asignificant effect on the swelling ratio, the polymer concentrationdoes not have a significant effect, indicating that the swelling ratioof click alginate is dominated by crosslink density rather thanpolymer concentration (Table S-3).3.3. Post-gelation modification of click alginate hydrogelsTo explore if additional functionalities can be introduced to clickalginate hydrogels after polymerization, we grafted thiolcontainingโมเลกุลบน norbornenes unreacted ในรูปแบบก่อนคลิ hydrogels แอลจิเนตโดยใช้ปฏิกิริยาที่ thiol-ene photoinitiatedกิน 3-A) เจ มี N:T ¼ 2 ใช้ให้ unreacted norbornenesมีการตอบสนองหลังจาก gelation เริ่มต้น RGDเปปโซลูชั่นที่ความเข้มข้นต่ำ (0.2 mM) หรือสูง (มม. 2)มีปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นบนพื้นผิวของเหล่านี้คลิกแอลจิเนต hydrogelsที่ถูกแล้ว seeded กับ fibroblasts 3T3 NIH แสดงเป็นcytosolic เรืองแสงเครื่องหมาย (EGFP) เซลล์ 3T3 พร้อมปฏิบัติตาม และกระจายบนปรับเปลี่ยนกับ RGD ในขณะที่เซลล์น้อยมากสามารถแนบ หรือ elongate บนควบคุมด้วย RGD ไม่กิน 3-บี) เซลล์บนคลิกแอลจิเนต hydrogels RGD นำเสนอมีความสามารถแบบฟอร์มแบบแยกสาขาเชื่อมต่อกันเครือข่าย กับ densitydependent RGD เป็นสำคัญ2e3 พับเพิ่มขึ้นคลุมผิวมากกว่า 3 วันวัฒนธรรม ในขณะที่แอลจิเนตคลิ unmodified เจสุภัคให้ไม่ใช่เซลล์กาว และพบว่าลดลงคลุมผิวด้วยเซลล์เวลากิน 3-C) หลังจาก 3 วันในวัฒนธรรม เซลล์ยังแสดงให้เห็นตัวของเส้นใยมีความเครียดเพิ่มขึ้นในการแพร่กระจายและแอกตินความเข้มข้นสูง RGD (Fig. 3-D) นอกจากนี้ ศักยภาพสูงของเซลล์หลังจาก 3 วันวัฒนธรรมสาธิตการ cytocompatibilityของแอลจิเนตคลิ hydrogels สำหรับ 2D เซลล์วัฒนธรรมกิน 3-E)3.4 การ encapsulation ใน hydrogels แอลจิเนตคลิกเซลล์เพื่อแสดงให้เห็นถึงอรรถประโยชน์ของ hydrogels แอลจิเนตคลิกสำหรับencapsulation เซลล์ เซลล์ชีวิต และกิจกรรมที่เผาผลาญของเซลล์นึ้ในแอลจิเนตคลิ hydrogels ถูกสอบสวนมากกว่า 3 ตัวระยะเวลาวันวัฒนธรรม ionically ใช้สำหรับ crosslinked hydrogelsเปรียบเทียบในการศึกษานี้ ภาพตัวแทนของนึ้เซลล์สี ethidium homodimer-1 แสดงเซลล์น้อยที่สุดตายในทั้งคลิ ionically crosslinked เจ h 4 และ 3 วันหลังจาก encapsulation กิน 4 A) นับเปิดเผยว่า คลิกแอลจิเนต hydrogels ผลในชีวิตสูงขึ้นอย่างมีนัยสำคัญของสรุป 3T3 เซลล์ทั้งสองทันทีหลัง encapsulation(93 ± 1% เทียบกับ 87 ± 2%) และหลัง จาก 3 วันวัฒนธรรม (84 ± 2% เทียบกับ 79 ± 4%)กิน 4-B) ควรสังเกตว่า แพ้ในวัดเซลล์ชีวิตอาจเกิดขึ้นในระหว่างกระบวนการเรียกเซลล์ โดยเอนไซม์ในระบบย่อยอาหารของ hydrogels กิจกรรมการเผาผลาญโดยรวมของเซลล์นึ้ในต่าง ๆ hydrogels ยังวิเคราะห์ และสังเกตการเพิ่มระยะวัฒนธรรม 3 วัน 2 คืนสำหรับทั้ง crosslinking hydrogelchemistries กิน 4 C)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

B, S-ตารางที่ 1 ตารางที่ S-2) ความสามารถในการปรับแต่งคุณสมบัติทางกล
ของเจลที่เกิดขึ้นในช่วงที่มีขนาดใหญ่โดยเพียงแค่การเปลี่ยน
อัตราส่วนของทั้งสองโพลิเมอร์ช่วยควบคุมความมั่นคงในขณะที่เจล
รักษาพารามิเตอร์อื่น ๆ เช่นความเข้มข้นของพอลิเมอและ
ความหนาแน่นของแกนด์อย่างต่อเนื่องซึ่งอาจจะเป็นประโยชน์สำหรับการศึกษาของ
mechanobiology .
อัตราการบวมของระบบไฮโดรเจลจะมีผลต่อกล
คุณสมบัติขนส่งมวลชนและการนำเสนอของแกนด์บน
พื้นผิวเจล เพื่อตรวจสอบวิธีการบวมปริมาตรจะเปลี่ยน
ที่ความเข้มข้นลิเมอร์ที่แตกต่างกันและยังไม่มีอัตราส่วน T คลิกอัลจิเนต
ไฮโดรเจลที่ถูกสร้างขึ้นตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้และได้รับอนุญาตให้ขยายตัว
เป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส ปริมาณการบวมวัดและเปรียบเทียบ
กับปริมาณหล่อ (รูป. 2-C) สำหรับความเข้มข้นลิเมอร์ที่กำหนด
อัตราส่วนบวมปริมาตรเพิ่มขึ้นรอัตราส่วนเบี่ยงเบน T
ตั้งแต่วันที่ 1 แสดงให้เห็นถึงความสัมพันธ์แบบผกผันระหว่างกล
คุณสมบัติและอัตราบวมตามที่คาดไว้ ในขณะที่ยังไม่มีอัตราส่วนทีมี
ผลกระทบต่ออัตราการบวม, ความเข้มข้นของพอลิเมอ
ไม่ได้มีผลกระทบอย่างมากแสดงให้เห็นว่าอัตราการบวม
ของอัลจิเนตคลิกที่ถูกครอบงำด้วยความหนาแน่น crosslink มากกว่า
ความเข้มข้นของพอลิเมอ (ตารางที่ S-3).
3.3 . การปรับเปลี่ยนการโพสต์ของไฮโดรเจลเจลอัลจิเนตคลิก
เพื่อสำรวจถ้าฟังก์ชันการทำงานเพิ่มเติมสามารถนำไปคลิก
ไฮโดรเจลอัลจิเนตหลังจากพอลิเมอเราทาบ thiolcontaining
โมเลกุลบน norbornenes unreacted ก่อนในรูปแบบ
ไฮโดรเจลอัลจิเนตคลิกใช้ปฏิกิริยา thiol-ene photoinitiated
(รูปที่. 3 ) เจลที่มีไม่มี: T ¼ 2 ถูกนำมาใช้เพื่อให้แน่ใจว่า norbornenes unreacted
พร้อมที่จะตอบสนองหลังจากที่เจเริ่มต้น RGD
โซลูชั่นเปปไทด์ที่สูง (2 มิลลิเมตร) หรือต่ำ (0.2 มิลลิเมตร) ความเข้มข้น
ที่ได้รับปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นบนพื้นผิวของอัลจิเนตคลิกเหล่านี้ไฮโดรเจลที่
ซึ่งได้รับเมล็ดแล้วกับเซลล์ NIH 3T3 แสดง
เครื่องหมายเรืองแสง cytosolic (EGFP) เซลล์ 3T3 ปฏิบัติตามได้อย่างง่ายดายและ
แพร่กระจายบนเจล RGD แก้ไขด้วยในขณะที่เซลล์น้อยมากก็สามารถที่จะ
แนบหรือยาวในการควบคุมที่มีเจลไม่มี RGD (รูปที่. 3-B) เซลล์ในการ
ไฮโดรเจลอัลจิเนตคลิก RGD นำเสนอมีความสามารถที่จะสร้าง
เครือข่ายที่เชื่อมต่อกิ่งกับ densitydependent RGD สำคัญ
2e3 พับเพิ่มพื้นผิวในการรายงานข่าวในช่วงวันที่ 3
วัฒนธรรมในขณะที่คลิกเจลอัลจิเนตแปรถูกตั้งข้อสังเกตว่าจะเป็น
เซลล์ที่ไม่ติดและพบว่าลดลง ในการรายงานข่าวโดยพื้นผิว
เซลล์ในช่วงเวลา (รูปที่. 3 C) หลังจาก 3 วันในการเพาะเลี้ยงเซลล์ยังแสดงให้เห็น
การเพิ่มขึ้นในการแพร่กระจายและการสร้างเส้นใยโปรตีนที่มีความเครียด
ความเข้มข้น RGD สูงขึ้น (รูปที่. 3-D) นอกจากนี้มีศักยภาพสูง
ของเซลล์หลังจาก 3 วันของการแสดงให้เห็นถึงวัฒนธรรม cytocompatibility
ของไฮโดรเจลอัลจิเนตคลิกสำหรับการเพาะเลี้ยงเซลล์ 2D (รูปที่. 3 E).
3.4 ห่อหุ้มเซลล์ในไฮโดรเจลอัลจิเนตคลิก
เพื่อที่จะแสดงให้เห็นถึงประโยชน์ของไฮโดรเจลอัลจิเนตคลิกสำหรับ
ห่อหุ้มเซลล์มีชีวิตของเซลล์และกิจกรรมการเผาผลาญของเซลล์
ห่อหุ้มในไฮโดรเจลอัลจิเนตคลิกถูกตรวจสอบในช่วงที่ 3
ระยะเวลาการเลี้ยงวัน ionically เชื่อมขวางไฮโดรเจลที่ใช้ใน
การเปรียบเทียบในการศึกษาเหล่านี้ ภาพตัวแทนของห่อหุ้ม
เซลล์ย้อมด้วย ethidium homodimer-1 แสดงน้อยที่สุดเซลล์
ตายทั้งในและเจลคลิกเชื่อมขวาง ionically 4 ชั่วโมงและ 3 วัน
หลังจากที่ห่อหุ้ม (รูปที่. 4) ปริมาณการคลิกเปิดเผยว่า
ไฮโดรเจลอัลจิเนตส่งผลให้มีชีวิตที่สูงขึ้นอย่างมีนัยสำคัญของการ
ห่อหุ้มเซลล์ 3T3 ทั้งสองทันทีหลังจากที่ห่อหุ้ม
(93 ± 1% เทียบกับ 87 ± 2%) และหลังจากนั้น 3 วันของวัฒนธรรม (84 ± 2% เทียบกับ 79 ± 4%)
( รูปที่. 4-B) มันควรจะตั้งข้อสังเกตว่าการสูญเสียในชีวิตของเซลล์วัด
อาจเกิดขึ้นในระหว่างขั้นตอนการดึงเซลล์โดยการย่อยของเอนไซม์
ของไฮโดรเจล กิจกรรมการเผาผลาญโดยรวมของเซลล์ห่อหุ้ม
ในไฮโดรเจลที่แตกต่างกันนอกจากนี้ยังได้รับการวิเคราะห์และตั้งข้อสังเกตที่จะ
เพิ่มขึ้นในช่วงระยะเวลาการเลี้ยงวันที่ 3 สำหรับทั้งการเชื่อมขวางไฮโดรเจล
เคมี (รูปที่. 4 C)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ตารางที่สุดตาราง B , S - 2 ) ความสามารถในการปรับแต่งคุณสมบัติเชิงกลของเจล
ที่เกิดในช่วงที่มีขนาดใหญ่ โดยเพียงแต่เปลี่ยน
อัตราส่วนของทั้งสองและจะช่วยให้การควบคุมการรักษาความมั่นคงในขณะที่
เจลพารามิเตอร์อื่น ๆ เช่น ความเข้มข้นของพอลิเมอร์และ
) ความหนาแน่นคงที่ซึ่งอาจเป็นประโยชน์สำหรับการศึกษาของ mechanobiology
.
อัตราส่วนการบวมของระบบไฮโดรเจลสามารถ เครื่องจักรกล
มีผลต่อคุณสมบัติการขนส่งมวลและการนำเสนอของลิแกนด์ใน
ผิวเจล ตรวจสอบว่าปริมาตรบวมจะเปลี่ยน
ที่ความเข้มข้นพอลิเมอร์ที่แตกต่างกันและ N : T อัตราส่วนคลิกแอล
เจลได้ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ และได้รับอนุญาตให้บวม
เป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37  C บวม ปริมาณวัดและเปรียบเทียบกับปริมาณ ( รูปหล่อ
2 c )
ให้ความเข้มข้นของพอลิเมอร์อัตราส่วนการบวมปริมาตรเพิ่มขึ้นเป็น N : t )
1 จาก 1 , แสดงให้เห็นถึงความสัมพันธ์ผกผันระหว่างสมบัติ
และบวมตามคาด ในขณะที่ N : t ) ได้ผลอย่างมีนัยสำคัญต่ออัตราส่วนการบวม , พอลิเมอร์ความเข้มข้น
ไม่มีผลกระทบอย่างมีนัยสำคัญ แสดงให้เห็นว่าอัตราส่วนการบวม
คลิกอัลจิเนตเป็น dominated โดยความหนาแน่นของพันธะข้ามมากกว่า
ความเข้มข้นของพอลิเมอร์ ( ตาราง s-3 )
3 . โพสต์ในเนตคลิกเจลาตินไฮโดรเจล
สำรวจถ้าฟังก์ชันเพิ่มเติมสามารถแนะนำให้คลิก
แอลเจลหลังจากเกิด เราสามารถ thiolcontaining
โมเลกุลบน norbornenes ก่อนเข้าสู่รูปแบบ
คลิกที่แอลเจลใช้ photoinitiated thiol ene ปฏิกิริยา
( รูปที่ 3 ) เจลด้วย n : T ¼ 2 ใช้เพื่อให้เข้าสู่ norbornenes
มีอยู่การตอบสนองหลังจากการเกิดเจลครั้งแรก rgd
เปปไทด์โซลูชั่นที่สูง ( 2 มม. ) หรือต่ำ ( 0.2 มม. ) ความเข้มข้น
ถูกทำปฏิกิริยาบนผิวของอัลเจลเหล่านี้คลิก , ซึ่งจากนั้นเมล็ดด้วย

จาก NIH 3T3 แสดงcytosolic เครื่องหมายเรืองแสง ( egfp ) 3T3 เซลล์ และพร้อมปฏิบัติตาม
กระจายดัดแปลงกับเจล rgd ในขณะที่น้อยมากเซลล์สามารถ
แนบหรือยาวบนเจลควบคุม ไม่มี rgd ( รูปที่ 3-b ) เซลล์
คลิกแอลเจลนำเสนอ rgd สามารถเชื่อมโยงเครือข่ายรูปแบบ
กิ่งด้วย ) rgd densitydependent
2e3 พับเพิ่มความคุ้มครองผิวมากกว่า 3 วัน
วัฒนธรรมในขณะที่ไม่พบต้องคลิกแอลเจล
กาวไม่เซลล์พบว่าลดลงในความคุ้มครองผิวโดย
เซลล์ตลอดเวลา ( ภาพที่ 3-c ) หลังจาก 3 วันในวัฒนธรรมเซลล์ นอกจากนี้ยังพบ
เพิ่มและกระจาย actin ความเครียดเกิดเส้นใยที่มีความเข้มข้นสูง rgd
( รูปที่ 3 ) นอกจากนี้ สูง 3
เซลล์หลังจาก 3 วันวัฒนธรรมแสดงให้เห็น cytocompatibility
ของคลิกที่แอลเจลสำหรับเพาะเลี้ยงเซลล์ ( รูปที่ 2 3-e ) .
3.4 . encapsulation เซลล์คลิกแอลเจล
เพื่อแสดงให้เห็นถึงประโยชน์ของเจลเข้มข้นสำหรับ
คลิกเซลล์การห่อหุ้ม เซลล์และกิจกรรมการเผาผลาญของเซลล์
ห่อหุ้มในเนต คือคลิกเจลมากกว่า 3 วัน
วัฒนธรรมระยะเวลา ; ionically เครื่องเจลใช้สำหรับ
การเปรียบเทียบในการศึกษาเหล่านี้ ภาพตัวแทนของ 3
เซลล์ย้อมด้วยคู่ homodimer-1 แสดงการตายของเซลล์
น้อยที่สุดทั้งคลิกและ ionically เครื่องเจล 4 ชั่วโมง และ 3 วัน
หลังจาก encapsulation ( รูปที่ 4-a ) พบว่าปริมาณคลิก
แอลเจลให้สูงขึ้นสามารถห่อหุ้มเซลล์ 3T3
ทั้งสองทันทีหลังจากการ
( 93 ± 1% vs .87 ± 2% ) และหลังจากนั้น 3 วันของวัฒนธรรม ( 84 ± 2% เทียบกับ 79 ± 4% )
( รูปที่ 4-b ) มันควรจะสังเกตว่าในการวัดการสูญเสียเซลล์
อาจเกิดขึ้นในระหว่างกระบวนการกู้คืนโดยการย่อยด้วยเอนไซม์ในเซลล์
เจล . กิจกรรมการเผาผลาญอาหารโดยรวมของเซลล์ห่อหุ้ม
ในไฮโดรเจลที่แตกต่างกันรวมถึงวิเคราะห์และสังเกต

เพิ่มช่วงวัฒนธรรม 3 วันทั้งสองทำปฏิกิริยาเคมีเจล
( รูป 4-C )