Nodal culture: Nodal explants colle

Nodal culture: Nodal explants collected from in vitro and field grown individuals produced a single shoot on basal MS within 10 -12 days (Plate 1). The addition of BAP (1.5 mg/l), Kn (0.5 mg/l) and IAA (0.1 mg/l) induced a maximum of 30 - 40 shoots per explant within a period of 30 - 40 days (Table 1 and Plate 1). The other combinations of MS with BAP, Kn and IAA at 1.0, 0.5 and 0.1 mg/l, respectively were also effective but not at the previous combinations level. The in vitro differentiated shoots were cut into segments each with a single node and subcultured in MS supplemented with BAP, Kn and IAA for further multiplication. It is a common fact that cytokinin and auxins were found essential for shoot multiplication. The earlier studies report that several types of explants of J curcas responded very positively to these hormones with respect to induction of callus, shoots, roots, somatic embryos (Sujatha and Mukta 1996, Jyoti-Sardana et al. 2000). In the present study for the first time nodes are used as explants and plantlets were established successfully within 10 weeks of culture by using cytokinins and auxins. In the present investigation a lower concentration of Kn and IAA and a slightly higher concentration of BAP proved to yield the best result with respect to shooting. The higher concentrations of auxins are generally inhibitory to morphogenesis; and substitution of these reagents with an appropriate auxin-cytokinin ratio is essential to obtain proper shoot- and root primordia. For rooting of microshoots, a medium with full strength MS was used. The well-developed microshoots were cut and placed vertically on MS fortified with various concentrations of auxins viz., IAA, and IBA at 5 different concentrations such as 0.5, 1.0, 1.5, 2.0 and 2.5 mg/l (Table 2). All the inoculated shoots, produced roots on MS containing IAA (1.0 mg/l) within 6 - 7 days. However, a higher concentration of IAA (1.5 mg/l) in the MS medium reduced the number of roots. MS supplemented with IBA was found to be unsuitable for rooting because of the formation of callus at the basal cut end of the shoots. Similar findings have also been reported by Sujatha and Mukta (1996). Among two auxins, IAA (1.0 mg/l) was found to be a more suitable hormone for root induction (Table 2). However, in the case of shoot tip culture of J. curcas, IBA (0.5 - 5.0 mg/l) incorporated singly in MS was found suitable for root induction (Rojore and Batra 2005). The well developed healthy in vitro rooted plantlets were washed thoroughly in running tap water and hardened with different potting media. In this study, a maximum survival rate of 85% was obtained in the potting medium containing decomposed coir waste + perlite + compost (hardening media) followed by vermin-compost (70%). Plantlets derived from somatic embryos did neither go through the hardening process nor were tested in different potting media; presumably their performance will not be different from those obtained from organogenesis.
Somatic embryogenesis: The green cotyledons excised from seeds served as explants for somatic embryogenesis. The cotyledonary explants were grown in full and half strength of MS augmented with coconut water (CW). Some seeds were grown in MS containing different concentrations of BAP (Table 3). In MS containing BAP (2 mg/l), small globular glossy somatic embryos started to appear from the upper surface of the cotyledon within 7 - 8 days. These structures further developed into dark green colored embryos. The data presented in Table 4 showed that the MS supplemented with BAP at 2.0 mg/l was found to be most suitable for the initiation and development of somatic embryos (Table 3, Plate 2).
It is generally known that auxin in high concentrations induces somatic embryos effectively. The results on direct somatic embryogenesis have shown that BAP is essential for inducing somatic embryogenesis from cotyledonary explants of J. curcas. However, Ramasamy et al. 2005 reported that auxin or auxins in combination with cytokinin greatly influences the frequency and also has a significant impact on the maturation of somatic embryos. Kumari and Jaiwal (1998) found the requirement of cytokinin in addition to auxin essential to induce somatic embryogenesis in Terminalia arjuna. Similar observation was made for the species Psoralea corylifolia (Sahrawat and Chand 2001). Unlike the above two reports, we also obtained somatic embryogenesis with cytokinin only. Similar to the present observation, there are reports that BAP alone, when added to the basal medium, induced direct somatic embryogenesis. Examples are: Hipperstrum hybridum (Mujib et al. 1998) and Sequoia sempervirens (Liu et al. 2006). Histology of direct somatic embryogenesis: The somatic embryos were developed after two weeks of inoculation (Plate 2a-b) following the development of several layers of meristematic cells (Plate 2c). Developing embryos were composed of small embryonic cells and they were characterized by densely stained cytoplasm (Plate 2d). The progression stage in shoot initiation is clearly shown in Plate 2e-f. To our knowledge this is the first report describing the formation of direct somatic embryogenesis in J. curcas in BAP-supplemented MS medium. Further work on plantlet formation from somatic embryos and hardening is in progress. Direct embryogenesis observed in J. curcas has a great potential for its application in mass propagation. In addition, repetitive embryogenesis can also be used for synthetic seed production and genetic transformation (Bhojwani and Razdan 1996). It is concluded that for effective micropropagation MS medium needs to be standardized in the following manner, moderate concentration of BAP (1.5 mg/l), KN (0.5 mg/l) and IAA (0.1 mg/l) for successful shoot formation from nodal explants. The same concentration of growth hormone supplemented in MS, used for shoot induction is also suitable for multiple shoot induction during subculturing. IAA at the concentration of 1 mg/l in MS medium enhances root initiation at a higher level. The hardening medium comprising decomposed coir waste, perlite and compost in the ratio of 1 : 1 : 1 enhanced the survivability rate of plantlets at 80%. Hence, the protocol developed in the present study may prove to be suitable for massive in vitro plantlet production of J. curcas. Given suitable cultural and environmental conditions the protocol may be tried in subtropical regions of the world. Somatic embryogenesis tried as an alternative and efficient method for plant propagation yielded promising results from two angles, first the regenerants being derived from single embryonic cell were true to type and second a large number of plantlets were produced within a short period of time (Ammirato 1983). Many workers have emphasized that the somatic embryogenesis is a preferred method for rapid in vitro multiplication of plants (Robert et al. 1995, Mohan et al. 2000) and also for production of artificial seeds (Ahuja et al. 1989, Maruyama et al. 1997) and Agrobacterium-mediated transformation and regeneration of transgenic plants (McGranahan et al. 1989).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัฒนธรรมดัง: explants ดังที่รวบรวมจากบุคคลที่เติบโตในหลอดทดลอง และฟิลด์ผลิตยิงเดี่ยวบน MS โรคภายใน 10-12 วัน (1 แผ่น) แห่ง BAP (1.5 mg/l), ช็อปปิ้ง (0.5 mg/l) และ IAA (0.1 mg/l) ทำให้เกิดจำนวนยอด 30-40 ต่อ explant ภายในระยะเวลา 30-40 วัน (ตารางที่ 1 และ 1 แผ่น) อื่น ๆ ชุดของ MS กับ BAP ช็อปปิ้ง และ IAA ที่ 1.0, 0.5 และ 0.1 mg/l ตามลำดับได้ยังมีประสิทธิภาพ แต่ไม่ได้อยู่ ที่ระดับชุดก่อนหน้านี้ การถ่ายภาพต่าง ๆ การเพาะเลี้ยงถูกตัดเป็นเซ็กเมนต์แต่ละกับโหนเดียว และ subcultured ใน MS เสริมสำหรับเพิ่มเติมคูณกับ BAP ช็อปปิ้ง และ IAA มันเป็นความจริงทั่วไปที่ว่า cytokinin และ auxins พบจำเป็นยิงคูณ รายงานการศึกษาก่อนหน้านี้ที่หลายชนิด explants J curcas ตอบสนองมากบวกกับฮอร์โมนเหล่านี้เกี่ยวข้องกับการเหนี่ยวนำของแคลลัส ยอด ราก somatic โคลน (Sujatha และ Mukta 1996 โจติเดลลิ้ง Sardana et al. 2000) ในการศึกษาปัจจุบันในครั้งแรก ใช้เวลาโหนเป็น explants และ plantlets ก่อเสร็จเรียบร้อยภายใน 10 สัปดาห์ของวัฒนธรรมโดย auxins และ cytokinins ในปัจจุบัน ความเข้มข้นต่ำของช็อปปิ้ง และ IAA และความเข้มข้นสูงขึ้นเล็กน้อยของ BAP พิสูจน์พบว่าเกี่ยวกับการถ่ายภาพ ความเข้มข้นสูงของ auxins เป็นลิปกลอสไขการ morphogenesis โดยทั่วไป และทดแทนของ reagents เหล่านี้มีอัตราการออกซิน cytokinin ที่เหมาะสมเป็นสิ่งสำคัญรับยิงและ root primordia เหมาะสม มีใช้สื่อกับความแรงเต็ม MS สำหรับ rooting ของ microshoots Microshoots พัฒนาห้องพักถูกตัด และวางแนวตั้งบน MS ธาตุกับความเข้มข้นต่าง ๆ ได้แก่ auxins, IAA และอิบาที่ความเข้มข้นแตกต่างกัน 5 เช่น 0.5, 1.0, 1.5, 2.0 และ 2.5 mg/l (ตาราง 2) ทั้งหมดที่ inoculated ถ่ายภาพ ผลิตรากบน MS ประกอบด้วย IAA (1.0 mg/l) ภายใน 6-7 วัน อย่างไรก็ตาม ที่ความเข้มข้นสูงของ IAA (1.5 mg/l) ใน MS การลดจำนวนของราก พบ MS เสริม ด้วยอิบาจะ rooting เนื่องจากการก่อตัวของแคลลัสที่ท้ายตัดโรคถ่ายภาพไม่เหมาะสมกับ ยังมีการรายงานผลการวิจัยที่คล้ายกัน โดย Sujatha และ Mukta (1996) ระหว่างสอง auxins, IAA (1.0 mg/l) พบเป็น ฮอร์โมนเหมาะสำหรับรากเหนี่ยวนำ (ตารางที่ 2) อย่างไรก็ตาม ในกรณีที่วัฒนธรรมแนะนำยิงของ J. curcas อิบา (0.5 - 5.0 mg/l) รวมเดี่ยวใน MS พบเหมาะสมหลักการเหนี่ยวนำ (Rojore และ Batra 2005) ที่ดีเพื่อสุขภาพใน rooted plantlets ถูกล้างอย่างละเอียดในการทำน้ำประปา และชุบแข็ง ด้วยสื่อต่าง ๆ potting ในการศึกษานี้ อัตราการรอดตายสูงสุด 85% ได้รับในแบบ potting ประกอบด้วยกลางแยกขยะ coir + perlite ปุ๋ย (สื่อเข้มงวดกว่า) ตาม ด้วยไฟท์ปุ๋ย (70%) ไม่ได้ไปผ่านกระบวนการแข็ง plantlets มาโคลน somatic หรือทดสอบสื่อ potting ต่าง ๆ สันนิษฐานว่าการปฏิบัติจะไม่ได้แตกต่างจากผู้ที่ได้รับจากการเกิดของอวัยวะ การเกิดเอ็มบริโอ somatic: explants สำหรับการเกิดเอ็มบริโอ somatic เสิร์ฟ cotyledons เขียวที่ excised จากเมล็ด Cotyledonary explants ถูกปลูกเต็ม และครึ่งแรงของ MS ออกเมนต์ด้วยน้ำมะพร้าว (ตามน้ำหนักจริง) บางเมล็ดถูกปลูกใน MS ที่ประกอบด้วยความเข้มข้นแตกต่างกันของ BAP (ตาราง 3) ใน MS ประกอบด้วย BAP (2 mg/l), เล็ก globular โคลน somatic มันเริ่มโผล่จากพื้นผิวด้านบนของแบบต่อภายใน 7-8 วัน โครงสร้างเหล่านี้พัฒนาเพิ่มเติมเป็นโคลนสีเขียวเข้ม ข้อมูลที่แสดงในตาราง 4 พบว่า MS เสริมกับ BAP ที่ 2.0 mg/l พบจะเหมาะสำหรับการเริ่มต้นและการพัฒนาของ somatic โคลน (ตาราง 3, 2 แผ่น) เป็นทั่วไปที่รู้จักกันที่ออกซินและในสูงความเข้มข้นก่อให้เกิด somatic โคลนได้อย่างมีประสิทธิภาพ ผลในการเกิดเอ็มบริโอ somatic ตรงได้แสดงว่า BAP เป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการเกิดเอ็มบริโอจาก explants cotyledonary ของ J. curcas somatic inducing อย่างไรก็ตาม al. และ Ramasamy 2005 รายงานว่า ออกซินหรือ auxins ร่วมกับ cytokinin มากมีผลต่อความถี่ และยัง มีผลกระทบสำคัญที่พ่อแม่ของ somatic โคลน กุมารีและ Jaiwal (1998) พบความต้องการของ cytokinin นอกจากออกซินเป็นสิ่งจำเป็นเพื่อก่อให้เกิดการเกิดเอ็มบริโอในอาร์หูก somatic ทำการสังเกตที่คล้ายกันสำหรับพันธุ์ Psoralea corylifolia (Sahrawat และแชนด์ 2001) ซึ่งแตกต่างจากรายงานสองข้าง เรายังรับการเกิดเอ็มบริโอ somatic กับ cytokinin เท่านั้น เช่นเดียวกับการสังเกตปัจจุบัน มีรายงานว่า BAP เพียงอย่างเดียว เมื่อเพิ่มสื่อโรค ทำให้เกิดการเกิดเอ็มบริโอ somatic โดยตรง ตัวอย่าง: Hipperstrum hybridum (Mujib et al. 1998) และ sempervirens Sequoia (หลิว et al. 2006) มิญชวิทยาของการเกิดเอ็มบริโอ somatic โดยตรง: โคลน somatic ถูกพัฒนาหลังจากสองสัปดาห์ของ inoculation (จาน 2a-b) ต่อการพัฒนาของเซลล์ meristematic (แผ่น 2c) หลายชั้น โคลนที่พัฒนาขึ้นประกอบด้วยเซลล์ตัวอ่อนขนาดเล็ก และจะมีลักษณะ โดยไซโทพลาซึมทิ้งคราบหนาแน่นไป (แผ่น 2d) ชัดเจนมีแสดงขั้นก้าวหน้าในการยิงเริ่มต้นในแผ่น 2e-f ความรู้ของเรา นี้เป็นรายงานแรกที่อธิบายการก่อตัวของการเกิดเอ็มบริโอ somatic ที่ตรงใน J. curcas ใน MS เสริม BAP การเกี่ยวกับการก่อตัว plantlet จากโคลน somatic และแข็งกำลังดำเนินการอยู่ การเกิดเอ็มบริโอโดยตรงใน J. curcas มีศักยภาพดีสำหรับโปรแกรมประยุกต์ที่เผยแพร่โดยรวม การเกิดเอ็มบริโอซ้ำยังสามารถใช้สำหรับการผลิตเมล็ดสังเคราะห์และการเปลี่ยนแปลงทางพันธุกรรม (Bhojwani และ Razdan 1996) มันจะสรุปว่า สำหรับประสิทธิภาพ micropropagation MS ขนาดกลางต้องมีมาตรฐานในลักษณะต่อไปนี้ ความเข้มข้นปานกลาง BAP (1.5 mg/l), ช็อปปิ้ง (0.5 mg/l) และ IAA (0.1 mg/l) สำหรับผู้แต่งยิงประสบความสำเร็จจาก explants ดัง ความเข้มข้นเดียวกันเจริญเติบโตฮอร์โมนเสริมใน MS ใช้สำหรับยิง เหนี่ยวนำได้ยิงหลายการเหนี่ยวนำระหว่าง subculturing IAA ที่เข้มข้น 1 mg/l ใน MS ช่วยเริ่มต้นรากในระดับสูงขึ้น แข็งปานกลางประกอบด้วยแยกขยะ coir, perlite และปุ๋ยในอัตราส่วน 1: 1: 1 เพิ่มอัตราดัน plantlets 80% ดังนั้น โพรโทคอลพัฒนาในการศึกษาปัจจุบันอาจพิสูจน์ให้เหมาะสำหรับการผลิต plantlet เพาะเลี้ยงขนาดใหญ่ของ J. curcas โพรโทคอลอาจพยายามในแบบภูมิภาคของโลกที่ให้เงื่อนไขทางวัฒนธรรม และสิ่งแวดล้อม ที่เหมาะสม เกิดเอ็มบริโอ somatic พยายามเป็นวิธีการสำรอง และมีประสิทธิภาพสำหรับการเผยแพร่พืชผลแนวโน้มผลจากมุมสอง ก่อน regenerants ที่มาจากเซลล์เดียวตัวอ่อนได้ true เพื่อพิมพ์ และสอง ผลิต plantlets จำนวนมากภายในระยะเวลาสั้น ๆ ของเวลา (Ammirato 1983) หลายคนได้ย้ำว่า การเกิดเอ็มบริโอ somatic เป็นวิธีที่ต้องการ สำหรับการคูณในอย่างรวดเร็วของพืช (โรเบิร์ตเอ็ด al. 1995 โมฮาน et al. 2000) และ สำหรับการผลิตเมล็ดพืชเทียม (Ahuja et al. 1989 มารุยามะ et al. 1997) และแปลง mediated อโกรแบคทีเรียม และฟื้นฟูพืชถั่วเหลือง (McGranahan et al. 1989)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัฒนธรรมสำคัญ: สำคัญชิ้นส่วนที่เก็บได้จากในหลอดทดลองและบุคคลโตสาขาการผลิตการถ่ายเดียวบน MS ฐานภายใน 10 -12 วัน (จาน 1) นอกเหนือจาก BAP (ที่ 1.5 mg / l) Kn (0.5 mg / l) และ IAA (0.1 mg / l) ชักนำสูงสุดวันที่ 30 - 40 ยอดต่อชิ้นภายในระยะเวลา 30 - 40 วัน (ตารางที่ 1 และแผ่น 1 ) ชุดอื่น ๆ ของ MS ที่ BAP, Kn และ IAA 1.0, 0.5 และ 0.1 มิลลิกรัม / ลิตรตามลำดับนอกจากนี้ยังมีประสิทธิภาพ แต่ไม่อยู่ในระดับรวมกันก่อนหน้านี้ ในหลอดทดลองหน่อที่แตกต่างถูกตัดออกเป็นส่วนแต่ละโหนดเดียวและเลี้ยงใน MS เสริมด้วย BAP, Kn และ IAA คูณต่อไป มันเป็นความจริงกันว่าไซโตไคนิ auxins และพบว่ามีความจำเป็นสำหรับการคูณยิง การศึกษาก่อนหน้านี้รายงานว่าหลายประเภทของชิ้นส่วนของ J ดำตอบมากบวกกับฮอร์โมนเหล่านี้ด้วยความเคารพต่อการชักนำของแคลลัส, หน่อรากโซมาติกเอ็มบริโอ (Sujatha และ Mukta ปี 1996 Jyoti-Sardana et al. 2000) ในการศึกษาในปัจจุบันสำหรับโหนดครั้งแรกที่ใช้เป็นชิ้นส่วนและต้นกล้าที่ถูกจัดตั้งขึ้นประสบความสำเร็จภายในระยะเวลา 10 สัปดาห์ที่ผ่านมาของวัฒนธรรมโดยใช้ cytokinins และ auxins ในการตรวจสอบในปัจจุบันมีความเข้มข้นต่ำกว่าของ Kn และ IAA และความเข้มข้นที่สูงกว่าเล็กน้อยของ BAP ได้รับการพิสูจน์เพื่อให้ได้ผลลัพธ์ที่ดีที่สุดเกี่ยวกับการถ่ายภาพ ความเข้มข้นที่สูงขึ้นของ auxins โดยทั่วไปจะมีการยับยั้งการ morphogenesis; และทดแทนสารเคมีเหล่านี้ด้วยอัตราส่วนออกซินไซโตไคนิ-ที่เหมาะสมเป็นสิ่งสำคัญที่จะได้รับยภาพที่เหมาะสมและ primordia ราก สำหรับการขจัดของ microshoots ขนาดกลางที่มีความแข็งแรงเต็ม MS ถูกนำมาใช้ ดีพัฒนา microshoots ถูกตัดและวางแนวตั้งบน MS เสริมด้วยความเข้มข้นต่างๆของ auxins ได้แก่ . IAA และ IBA ที่ 5 ความเข้มข้นแตกต่างกันเช่น 0.5, 1.0, 1.5, 2.0 และ 2.5 มิลลิกรัม / ลิตร (ตารางที่ 2) ทั้งหมดหน่อเชื้อผลิตรากบน MS ที่ IAA (1.0 mg / l) ภายใน 6-7 วัน แต่ความเข้มข้นที่สูงขึ้นของ IAA (1.5 mg / l) ในสูตร MS ที่ลดจำนวนของราก MS เสริมด้วย IBA พบว่าไม่เหมาะสมสำหรับการขจัดเพราะการก่อตัวของแคลลัสที่ปลายตัดฐานของหน่อ ผลการวิจัยที่คล้ายกันนอกจากนี้ยังมีรายงานโดย Sujatha และ Mukta (1996) ท่ามกลางสอง auxins, IAA (1.0 mg / l) พบว่าฮอร์โมนที่มากขึ้นเหมาะสำหรับการเหนี่ยวนำราก (ตารางที่ 2) อย่างไรก็ตามในกรณีของวัฒนธรรมปลายยอดของเจดำ, ไอบีเอ (0.5-5.0 มิลลิกรัม / ลิตร) นิติบุคคลที่จัดตั้งขึ้นโดยลำพังใน MS ถูกพบที่เหมาะสมสำหรับการเหนี่ยวนำราก (Rojore และ Batra 2005) ได้รับการพัฒนาอย่างดีมีสุขภาพดีในหลอดทดลองที่หยั่งรากต้นถูกล้างให้สะอาดในการทำงานน้ำประปาและแข็งกับสื่อที่แตกต่างกันปลูก ในการศึกษานี้อัตราการรอดตายสูงสุด 85% ที่ได้รับในกลางปลูกบรรจุย่อยสลายของเสียมะพร้าว + perlite + ปุ๋ยหมัก (สื่อแข็ง) ตามด้วยบุคคลที่น่ารังเกียจปุ๋ยหมัก (70%) ต้นกล้าที่ได้มาจากตัวอ่อนไม่ร่างกายไม่ผ่านกระบวนการชุบแข็งหรือได้รับการทดสอบในสื่อปลูกที่แตกต่างกัน สันนิษฐานว่าผลการดำเนินงานของพวกเขาจะไม่แตกต่างจากที่ได้รับจากอวัยวะ.
โซมาติกเอมบริการใบเลี้ยงสีเขียวตัดจากเมล็ดทำหน้าที่เป็นชิ้นส่วนสำหรับ embryogenesis ร่างกาย ชิ้น cotyledonary เติบโตแข็งแรงเต็มที่และครึ่งหนึ่งของ MS เติมด้วยน้ำมะพร้าว (CW) เมล็ดบางคนที่ปลูกใน MS ที่มีความเข้มข้นแตกต่างกันของ BAP (ตารางที่ 3) ใน MS ที่มี BAP (2 mg / l), โซมาติกเอ็มบริโอขนาดเล็กทรงกลมมันวาวเริ่มปรากฏให้เห็นจากพื้นผิวด้านบนของใบเลี้ยงภายใน 7-8 วัน โครงสร้างเหล่านี้ได้รับการพัฒนาต่อไปเป็นตัวอ่อนสีเขียวเข้ม ข้อมูลที่แสดงในตารางที่ 4 แสดงให้เห็นว่า MS เสริมด้วย BAP ที่ 2.0 มิลลิกรัม / ลิตรพบว่าเป็นที่เหมาะสมที่สุดสำหรับการเริ่มต้นและการพัฒนาของตัวอ่อนร่างกาย (ตารางที่ 3 จาน. 2)
เป็นที่รู้จักกันโดยทั่วไปว่าออกซินในระดับความเข้มข้นสูงเจือจาง ตัวอ่อนร่างกายได้อย่างมีประสิทธิภาพ ผล embryogenesis ในร่างกายโดยตรงได้แสดงให้เห็นว่า BAP เป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการกระตุ้นให้เกิด embryogenesis ร่างกายจากชิ้นส่วนของเจ cotyledonary ดำ อย่างไรก็ตาม Ramasamy et al, 2005 รายงานว่าออกซินหรือ auxins ร่วมกับไซโตไคนิมีอิทธิพลอย่างมากความถี่และนอกจากนี้ยังมีผลกระทบต่อการเจริญเติบโตของตัวอ่อนร่างกาย กุมารีและ Jaiwal (1998) พบว่าความต้องการของไซโตไคนินอกเหนือจากที่จะออกซินที่สำคัญที่จะทำให้เกิด embryogenesis ร่างกายใน Terminalia อรชุน สังเกตที่คล้ายกันถูกสร้างขึ้นมาสำหรับชนิด Psoralea corylifolia (Sahrawat และพรีม 2001) ซึ่งแตกต่างจากข้างต้นสองรายงานนี้เรายังได้รับ embryogenesis ร่างกายกับไซโตไคนิเท่านั้น คล้ายกับการสังเกตในปัจจุบันมีรายงานว่า BAP เพียงอย่างเดียวเมื่อเข้ามาอยู่กลางฐานเหนี่ยวนำให้เกิด embryogenesis ร่างกายโดยตรง ตัวอย่าง: Hipperstrum hybridum (. Mujib et al, 1998) และ Sequoia sempervirens (. หลิว et al, 2006) จุล embryogenesis ของร่างกายโดยตรง: ตัวอ่อนร่างกายได้รับการพัฒนาหลังจากสองสัปดาห์ของการฉีดวัคซีน (จาน 2a-B) ดังต่อไปนี้การพัฒนาของหลายชั้นของเซลล์เจริญ (ที่จาน 2c) การพัฒนาตัวอ่อนประกอบด้วยเซลล์ตัวอ่อนที่มีขนาดเล็กและพวกเขาโดดเด่นด้วยสีพลาสซึมหนาแน่น (จาน 2d) ขั้นตอนที่มีความก้าวหน้าในการเริ่มต้นการถ่ายทำก็แสดงให้เห็นอย่างชัดเจนในจาน 2e-F เพื่อความรู้ของเรานี้เป็นรายงานครั้งแรกที่อธิบายถึงการก่อตัวของ embryogenesis ร่างกายโดยตรงในเจดำใน BAP-เสริมสูตร MS นอกจากนี้การทำงานในการสร้างต้นจากตัวอ่อนและแข็งร่างกายอยู่ในความคืบหน้า embryogenesis โดยตรงสังเกตในเจดำมีศักยภาพที่ดีสำหรับการประยุกต์ใช้ในการบริหารจัดการมวล นอกจากนี้ embryogenesis ซ้ำนอกจากนี้ยังสามารถนำมาใช้เพื่อการผลิตเมล็ดพันธุ์สังเคราะห์และการเปลี่ยนแปลงทางพันธุกรรม (Bhojwani และ Razdan 1996) ก็สรุปได้ว่าสำหรับการขยายประสิทธิภาพสูตร MS ที่จะต้องมีมาตรฐานในลักษณะดังต่อไปนี้ความเข้มข้นปานกลางของ BAP (1.5 mg / l) KN (0.5 mg / l) และ IAA (0.1 mg / l) ให้ประสบความสำเร็จในการก่อตัวยิงจากย่าน ชิ้นส่วน ความเข้มข้นเดียวกันของฮอร์โมนการเจริญเติบโตเสริมใน MS ที่ใช้สำหรับการเหนี่ยวนำการถ่ายภาพนี้ยังเหมาะสำหรับการถ่ายเหนี่ยวนำในช่วงหลายถ่ายเชื้อ IAA ที่ความเข้มข้น 1 มิลลิกรัม / ลิตรในสูตร MS ที่ช่วยเพิ่มการเริ่มต้นรากอยู่ในระดับที่สูงขึ้น กลางประกอบด้วยแข็งย่อยสลายของเสียมะพร้าว perlite และปุ๋ยหมักในอัตราส่วน 1: 1: 1 เพิ่มอัตราการอยู่รอดของต้นที่ 80% ดังนั้นโปรโตคอลการพัฒนาในการศึกษาครั้งนี้อาจพิสูจน์ให้เป็นที่เหมาะสมสำหรับการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อขนาดใหญ่ในการผลิตต้นของเจดำ ได้รับเงื่อนไขวัฒนธรรมและสิ่งแวดล้อมที่เหมาะสมโปรโตคอลอาจจะพยายามในภูมิภาคเขตร้อนของโลก embryogenesis ร่างกายพยายามเป็นวิธีทางเลือกและมีประสิทธิภาพสำหรับการขยายพันธุ์พืชผลที่มีแนวโน้มจากสองมุมแรกเพาะถูกที่ได้มาจากเซลล์ตัวอ่อนเดียวเป็นความจริงที่จะพิมพ์และครั้งที่สองเป็นจำนวนมากของต้นกล้าที่ผลิตได้ภายในระยะเวลาสั้น ๆ ของเวลา (Ammirato 1983 ) คนงานหลายคนได้เน้นย้ำว่า embryogenesis ร่างกายเป็นวิธีการที่ต้องการสำหรับการคูณในหลอดทดลองอย่างรวดเร็วของพืช (โรเบิร์ et al. 1995 โมฮัน et al. 2000) และการผลิตเมล็ดเทียม (Ahuja et al. 1989 Maruyama et al, 1997) และเชื้อ Agrobacterium และการฟื้นฟูพืชแปลงพันธุ์ (McGranahan et al. 1989)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัฒนธรรมสร้าง : สร้างเนื้อเยื่อในหลอดทดลองปลูกและเก็บจากสนามบุคคลผลิตยิงเดี่ยวบนพื้นฐาน MS ภายใน 10 - 12 วัน ( 1 จาน ) และ BAP ( 1.5 มก. / ลิตร ) , KN ( 0.5 มิลลิกรัม / ลิตร ) และ IAA 0.1 mg / L ) และสูงสุด 30 - 40 ยอดต่อชิ้นส่วนพืช ภายในระยะเวลา 30 - 40 วัน ( ตารางที่ 1 และ 1 จาน ) ชุดอื่น ๆของ MS ที่มี BAP ใน IAA ที่ 1.0 , 0.5 และ 0.1 มิลลิกรัมต่อลิตรคือยังไม่มีผลบังคับใช้ แต่ในระดับชุดก่อนหน้า ในหลอดทดลองจากยอดถูกตัดเป็นส่วน แต่ละโหนดเดียวและ subcultured ใน MS ที่มี BAP ใน IAA การคูณต่อไป มันเป็นความจริงทั่วไปไซโตไคนินออกซินพบและจำเป็นสำหรับยิงการคูณในการศึกษาก่อนหน้านี้รายงานว่า หลายประเภทของการเจริญเติบโตของ J curcas ตอบมากบวกกับฮอร์โมนเหล่านี้ด้วยความเคารพต่อการชักนำแคลลัส ใบ ราก และโซมาติกเอ็มบริโอ ( sujatha mukta 1996 jyoti sardana et al . 2000 )ในการศึกษาครั้งแรกที่ใช้เป็นอาหาร และต้นโหนดขึ้นเรียบร้อยแล้วภายใน 10 สัปดาห์ของวัฒนธรรมโดยการใช้ออกซินและไซโตไคนิน . ในการสอบสวนเสนอในความเข้มข้นต่ำของ IAA ความเข้มข้นของ BAP สูงกว่าเล็กน้อย และพิสูจน์แล้วว่าให้ผลลัพธ์ที่ดีที่สุดด้วยการยิงสูงกว่าความเข้มข้นของออกซินโดยทั่วไปสามารถที่จะมอร์โฟเจเนซิส และทดแทนสารเคมีเหล่านี้ที่เหมาะสมเป็นสิ่งจำเป็นที่จะได้รับออกซิน ) อัตราส่วนที่เหมาะสม และยิง ไพรม ์เดียบอน สำหรับรากของ microshoots สื่อกับ MS เต็มแรงที่ใช้เต่ง microshoots ที่ถูกตัดและวางแนวตั้งบนอาหารสูตร MS ที่เสริมด้วยออกซินความเข้มข้นต่างๆ ได้แก่ IAA , IBA ความเข้มข้น 5 และที่แตกต่างกันเช่น 0.5 , 1.0 , 1.5 , 2.0 และ 2.5 mg / l ( ตารางที่ 2 ) ทั้งหมด จากยอดผลิตรากบนอาหารสูตร MS ที่มี IAA ( 1.0 มก. / ล. ) ภายใน 6 - 7 วัน อย่างไรก็ตาม ความเข้มข้นที่สูงขึ้นของ IAA ( 15 มก. / ล. ) ในอาหารสูตร MS ที่ลดจำนวนของราก MS ที่มี IBA พบจะไม่เหมาะสมสำหรับราก เนื่องจากการเกิดแคลลัสที่แรกเริ่มตัดปลายยอด ผลที่คล้ายกันได้รับรายงาน โดย sujatha และ mukta ( 1996 ) ระหว่างสองออกซิน ( IAA , 1.0 มิลลิกรัมต่อลิตร ) พบว่าเป็นฮอร์โมนที่เหมาะสมสำหรับการชักนำราก ( ตารางที่ 2 ) อย่างไรก็ตามในกรณีที่ยอดวัฒนธรรมของ curcas IBA 0.5 - 5.0 มิลลิกรัมต่อลิตร ) รวมเดี่ยวใน MS พบเหมาะสำหรับการชักนำราก ( rojore และ batra 2005 ) การพัฒนาสุขภาพในหลอดทดลองด้วยรากต้นเป็นล้างให้สะอาดในใช้น้ำประปาและแข็งที่มีวัสดุเพาะชำ . ในการศึกษานี้สูงสุดอัตราการรอดตาย 85% ได้ในสื่อ potting ผสมขุยมะพร้าว ปุ๋ยย่อยสลายของเสียเพอร์ไลต์ ( สื่อแข็ง ) รองลงมาคือ พยาธิปุ๋ยหมัก ( 70% ) ต้นที่ได้จากโซมาติกเอ็มบริโอหาได้ไปผ่านกระบวนการชุบแข็ง หรือทดสอบที่แตกต่างกันวัสดุเพาะชำ ; สันนิษฐานว่าประสิทธิภาพจะไม่แตกต่างจากผู้ที่ได้รับจากแกโนเจเนซิส .
โซมาติกเอ็มบริโอ : การแสดงออกของสีเขียวที่ตัดจากเมล็ดใช้เป็นอาหารสำหรับการเกิดโซมาติกเอ็มบริโอ . เนื้อเยื่อที่ cotyledonary เติบโตในความแข็งแรงของ MS ที่เติมเต็มและครึ่งกับน้ำมะพร้าว ( CW ) เมล็ดพันธุ์ที่ปลูกใน MS ที่มีระดับความเข้มข้นของ BAP ( ตารางที่ 3 ) ใน MS ที่ประกอบด้วย BAP 2 มิลลิกรัมต่อลิตร )ขนาดเล็กทรงกลมตัวโซมาติกผิวมันเริ่มปรากฏจากผิวบนของใบเลี้ยง ภายใน 7 - 8 วัน โครงสร้างเหล่านี้พัฒนาต่อไปเป็นเอ็มบริโอสีเขียวเข้ม ข้อมูลที่นำเสนอใน ตารางที่ 4 แสดงให้เห็นว่า MS ที่มี BAP ที่ 2.0 มิลลิกรัมต่อลิตร พบว่า จะเหมาะสมที่สุดสำหรับการเริ่มต้นและการพัฒนาของโซมาติกเอ็มบริโอ ( โต๊ะ 3 แผ่น 2 )