2.8. Reverse transcription-polymera

2.8. Reverse transcription-polymerase
chain reaction (RT-PCR) Cells grown in 100-mm tissue culture dishes to about 80% confluency in DMEM supplemented with 10% FBS. After washing twice with PBS, the cells were cultured for 12 or 24 h in FBS-free DMEM, together with the indicated concentrations of A. radix extract. Total RNA samples were extracted by acid using the guanidinium thiocyanate, phenol— chloroform method [22]. One microgram of total RNA samples were reverse-transcribed using the Reverse Transcription System (Promega). The RT products were then subjected to PCR cycles as follows: of 94 8C for 1 min, 58 8C for 1 min, and 72 8C for 1 min for 33 cycles. The primers used for amplifying the respective fragments are listed in Table 1. After agarose gel electrophoresis, the PCR products were quantified using a densitometer
(Imagemaster, Pharmacia Biotech).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.8 การพอลิเมอเรส transcription ย้อนกลับเซลล์สัตว์ (RT-PCR) เติบโตในอาหารเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ 100 มม.ประมาณ 80% confluency ใน DMEM เสริม ด้วย 10% FBS หลังจากล้างด้วย PBS สอง เซลล์มีอ่างสำหรับ 12 หรือ 24 h ใน FBS ฟรี DMEM กับความเข้มข้นที่ระบุไว้ของอ.ฐานแยก ตัวอย่างอาร์เอ็นเอทั้งหมดถูกสกัด ด้วยกรดที่ใช้ guanidinium thiocyanate วางเช่นคลอโรฟอร์มวิธี [22] Microgram หนึ่งอย่างอาร์เอ็นเอทั้งหมดได้กลับทับศัพท์ใช้ระบบ Transcription ย้อนกลับ (Promega) ผลิตภัณฑ์ RT ถูกแล้วต้องรอบ PCR ดัง: 8C 94 ใน 1 นาที 58 8C ใน 1 นาที และ 72 8C ใน 1 นาทีสำหรับรอบ 33 ไพรเมอร์ที่ใช้สำหรับมือชิ้นส่วนนั้น ๆ จะแสดงในตารางที่ 1 หลังจาก agarose เจ electrophoresis ผลิตภัณฑ์ PCR ได้ quantified ใช้เป็น densitometer(Imagemaster เทคโนโลยีชีวภาพ Pharmacia)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.8 ย้อนกลับถอดความ-polymerase
ปฏิกิริยาลูกโซ่ (RT-PCR) เซลล์ที่ปลูกใน 100 มมจานเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อจะประมาณ 80% confluency ใน DMEM เสริมด้วย 10% FBS หลังจากล้างครั้งที่สองกับพีบีเอสเซลล์มาเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 12 หรือ 24 ชั่วโมงใน DMEM FBS ฟรีพร้อมกับความเข้มข้นของสารสกัดที่ระบุเอสมุฎฐาน ตัวอย่างอาร์เอ็นเอทั้งหมดถูกสกัดโดยใช้กรด thiocyanate Guanidinium, phenol- วิธีคลอโรฟอร์ม [22] หนึ่งไมโครกรัมอาร์เอ็นเอของกลุ่มตัวอย่างทั้งหมดถูกย้อนกลับคัดลอกโดยใช้ย้อนกลับถอดความระบบ (Promega) RT ผลิตภัณฑ์ถูกยัดเยียดแล้วรอบ PCR ดังนี้จาก 94 8C เวลา 1 นาที, 58 8C เวลา 1 นาทีและ 72 8C เวลา 1 นาที 33 รอบ ไพรเมอร์ที่ใช้ในการขยายชิ้นส่วนที่เกี่ยวข้องมีการระบุไว้ในตารางที่ 1 หลังจาก electrophoresis เจล agarose, ผลิตภัณฑ์พีซีอาร์ได้รับการวัดโดยใช้ความหนาแน่น
(Imagemaster, Pharmacia ไบโอเทค)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.8 . ตรงกันข้ามการถอดความ
chain reaction ( RT-PCR ) เซลล์เพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ ปลูก 100 มม. จาน ประมาณ 80 % confluency ใน dmem เสริม 10% FBS หลังจากล้างสองครั้งกับ PBS , เซลล์เพาะเลี้ยงเป็นเวลา 12 หรือ 24 ชั่วโมง dmem FBS ฟรี พร้อมพบความเข้มข้นของ สารสกัดจากราก . ตัวอย่างอาร์เอ็นเอทั้งหมดถูกสกัดด้วยกรดโดยใช้ไทโอไซยาเนต guanidinium ,ฟีนอล - คลอโรฟอร์มวิธี [ 22 ] 1 ไมโครกรัมตัวอย่างอาร์เอ็นเอทั้งหมดถูกย้อนกลับและใช้ระบบถอดความย้อนกลับ ( promega ) ผลิตภัณฑ์ RT แล้วภายใต้รอบ PCR ดังนี้ : 94 8C 1 นาที 58 8C นาน 1 นาที และ 1 นาที 72 8C 33 รอบ ไพรเมอร์ที่ใช้สำหรับขยายชิ้นส่วนนั้นมีการระบุไว้ในตารางที่ 1 หลังจากเจลอิเล็กผลิตภัณฑ์ทั้งหมดจะถูกวัดโดยใช้เครื่องวัดความดำฟิล์ม ( imagemaster มุ่งมั่นเทคโนโลยีชีวภาพ
,
)