2.2. Molecular Marker Analysis. DNA

2.2. Molecular Marker Analysis. DNA was extracted from
juvenile leaves of 2-week-old plants using a modified protocol
as described by Zheng et al. (1995) [19]. PCR was
performed in 10 μL reactions containing 5–25 ng of DNA
template, 1 μL 10X TB buffer (containing 200mM Tris-
HCl pH 8.3, 500mM KCl, 15mM MgCl2), 1 μL of 1mM
dNTP, 0.50 μL each of 5μM forward and reverse primers,
and 0.25 μL of Taq DNA polymerase (4U/μL) using an MJ
Research single or dual 96-well thermal cycler. After initial
denaturation for 5 min at 94◦C, each cycle comprised 1min
denaturation at 94◦C, 1min annealing at 55◦C, and 2 min
extension at 72◦C with a final extension for 5min at 72◦C
at the end of 35 cycles. The PCR products were mixed
with bromophenol blue gel loading dye and were analyzed
by electrophoresis on 8% polyacrylamide gel using mini
vertical polyacrylamide gels for high throughput manual
genotyping (CBS Scientific Co. Inc., CA, USA). The gels
were stained in 0.5 mg/mL ethidium bromide and were
documented using Alpha Imager 1220 (Alpha Innotech,
CA, USA). Microsatellite or simple sequence repeat (SSR)
markers was used for selection [20].

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.2. การวิเคราะห์เครื่องโมเลกุล ดีเอ็นเอที่สกัดจาก
เยาวชนใบของพืชอายุ 2 สัปดาห์โดยใช้โพรโทคอแก้ไข
ตามที่อธิบายไว้โดยเจิ้งและ al. (1995) [19] PCR ถูก
ในปฏิกิริยา μL 10 ประกอบด้วย 5 – 25 ng เอ็น
แม่ 1 μL 10 X TB บัฟเฟอร์ (ประกอบด้วย 200mM ตรี-
HCl pH 8.3, 500mM KCl, MgCl2 15 มม.), μL 1 มม. 1
dNTP, 0.50 μL แต่ละของ 5μM ไปข้างหน้า และย้อนกลับไพรเมอร์,
และ 0ΜL 25 ของ Taq DNA พอลิเมอเรส (4U μL) ใช้เป็น MJ
เดี่ยว หรือคู่ cycler ร้อน 96 ดีวิจัย หลังจากเริ่มต้น
denaturation สำหรับ 5 นาทีใน 94◦C แต่ละวงจรประกอบด้วย 1 นาที
denaturation ที่ 94◦C, 1 นาทีการอบเหนียวที่ 55◦C และ 2 นาที
ส่วนขยายที่ 72◦C ขยายสุดท้ายสำหรับ 5 นาทีที่ 72◦C
จบรอบ 35 มีผสมผลิตภัณฑ์ PCR
กับ bromophenol บลูเจโหลดย้อม และได้วิเคราะห์
โดย electrophoresis ในเจล polyacrylamide 8% ใช้มินิ
แนว polyacrylamide gels สำหรับอัตราความเร็วสูงด้วยตนเอง
genotyping (CBS วิทยาศาสตร์ Co. Inc., CA, USA) เจ
มีสีในโบรไมด์ ethidium 0.5 mg/mL และได้
จัดใช้อักษรถ่ายภาพ 1220 (อัลฟา Innotech,
CA, USA) ชนิด Microsatellite หรือลำดับซ้ำ (SSR)
เครื่องหมายที่ใช้สำหรับการเลือก [20]

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.2 Marker การวิเคราะห์โมเลกุล ดีเอ็นเอที่สกัดจาก
ใบของพืชเยาวชน 2 สัปดาห์อายุการใช้โปรโตคอลการแก้ไข
ตามที่อธิบายไว้โดยเจิ้งเหอและอัล (1995) [19] PCR ได้รับการ
ดำเนินการในการเกิดปฏิกิริยา 10 ไมโครลิตรที่มี 5-25 ng ดีเอ็นเอ
แม่แบบบัฟเฟอร์ 1 ไมโครลิตร 10X วัณโรค (ที่มี 200mm Tris-
HCl pH 8.3, 500mm KCl, 15mm MgCl2) 1 ไมโครลิตรของ 1mm
dNTP 0.50 ไมโครลิตรแต่ละ5μMไปข้างหน้าและ ย้อนกลับไพรเมอร์,
และ 0.25 ไมโครลิตรของ Taq ดีเอ็นเอโพลิเมอร์ (4U/μL) โดยใช้ MJ
วิจัยเดียวหรือสอง Cycler 96 ความร้อนได้ดี หลังจากที่เริ่มต้น
denaturation เป็นเวลา 5 นาทีที่ 94 ◦ C วงจรประกอบด้วย 1min แต่ละ
denaturation ที่ 94 ◦ C, การหลอม 1min ที่ 55 ◦ C และ 2 นาที
ต่อ 72 ◦ C มีนามสกุลสุดท้ายสำหรับ 5 นาทีที่ 72 ◦ C
ที่ส่วนท้ายของ 35 รอบ ผลิตภัณฑ์พีซีอาร์ที่ถูกผสม
ด้วย bromophenol โหลดเจลสีฟ้าสีย้อมและได้รับการวิเคราะห์
โดยข่าวคราวเกี่ยวกับเจล polyacrylamide 8% โดยใช้มินิ
เจล polyacrylamide คู่มือแนวตั้งสำหรับการส่งผ่านสูง
genotyping (ซีบีเอสวิทยาศาสตร์โคอิงค์ CA, USA) เจล
ถูกย้อมสีใน 0.5 mg / ml ethidium โบรไมด์และได้รับการ
บันทึกไว้โดยใช้อัลฟา Imager 1220 (อัลฟา Innotech,
CA, USA) microsatellite หรือทำซ้ำลำดับง่าย (SSR)
เครื่องหมายถูกนำมาใช้สำหรับการเลือก [20]

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.2 . การวิเคราะห์เครื่องหมายโมเลกุล ดีเอ็นเอที่สกัดได้จากใบของพืช 2-week-old
เยาวชนใช้แก้ไขพิธีสาร
ตามที่อธิบายไว้โดยเจิ้ง et al . ( 1995 ) [ 19 ] ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรส
( 10 μ L ปฏิกิริยาที่มี 5 – 25 นาโนแม่แบบดีเอ็นเอ
1 μผม 10x ) บัฟเฟอร์ ( ที่มี 200mm ทริส -
กรดไฮโดรคลอริก pH 8.3 500mm KCl 15mm MgCl2 ) 1 μลิตร 1 mm
dntp 0.50 μลิตรละ 5 μ M ไปข้างหน้าและย้อนกลับไพรเมอร์
และ 0 .25 μ L ของดีเอ็นเอพอลิเมอเรส ทัค ( 4U / μ L ) โดยใช้ MJ
งานวิจัยเดียวหรือสอง 96 ดีความร้อนรอบ . หลังจากเริ่มต้น
( สำหรับ 5 นาทีที่ 94 ◦ C แต่ละวงจรประกอบด้วย 1 นาทีที่ 94 ◦
( C , 1 นาทีอบอ่อนที่อุณหภูมิ 55 ◦ C และ 2 มิน
นามสกุลที่ 72 ◦ C กับส่วนขยายสุดท้ายสำหรับ 5 นาทีที่ 72 ◦ C
เมื่อจบ 3 รอบ ผลิตภัณฑ์ทั้งหมดจะถูกผสมกับเจลสีโบรโมฟีนอลบลู

โหลดและวิเคราะห์ข้อมูลโดยวิธีอิเล็กโทรโฟรีซีสบนโพลีอะคริลาไมด์เจล 8 % โดยใช้ polyacrylamide เจลแนวตั้งมินิ

สูง throughput คู่มือการอ่าน ( CBS วิทยาศาสตร์ Co . Inc . , CA , USA ) เจล
ใช้ย้อมใน 0.5 mg / ml และเอกสารการใช้โบรไมด์คู่
อัลฟ่า ( Alpha ) 1220 Innotech
, CA , USA ) ใช้หรือทำซ้ำลำดับง่าย ( SSR )
เครื่องหมายถูกใช้สำหรับการเลือก [ 20 ]