2.7. Carotenoid content
For carotenoid estimation, the adult fairy shrimps were
homogenized, suspended in 10 ml of mixture containing
methanol/methylene chloride/acetonitrile (10:20:70, v/v/v)
and 1 ml of tetrahydrofuran and trimethylamine (0.3:1 v/
v). The carotenoprotein complexes were then precipitated
with ammonium sulphate (60% saturation) as outlined by
Zagalsky, Ceccaldi, and Daumas (1970) and the precipitate
was centrifuged (4500g, 30 min), dissolved in 50 mM phosphate
buffer,pH7, and dialyzed overnight in the same buffer.
They were then purified by DEAE-cellulose ion-exchange
chromatography using linear gradient (50–350 mM) of
phosphate buffer (pH 7). Carotenoids were then liberated
from carotenoproteins with acetone according to the procedure
described by Shone, Britton, and Goodwing (1979) and
using thin layer chromatography [thin layer of silica gel-G
supported on 20 · 20 cm glass plate (Analtech Inc, Newark,
DE, USA)]. Individual carotenoids were identified based on
the absorption maximum and values were identified according
to the standards (F. Hoffman-La Roche Ltd., Basel,
Switzerland and Sigma Chemicals Co., St. Louis, MO,
USA). The absorption maxima were determined with a
Spektromom-203 spectrophotometer (Budapest, Hungary)
as outlined by Czeczuga and Czeczuga-Semeniuk (1998).
2.7. carotenoid เนื้อหาสำหรับการประเมิน carotenoid กุ้งนางฟ้าผู้ใหญ่ได้homogenized เป็นกลุ่ม ระงับใน 10 ml ของส่วนผสมที่ประกอบด้วยเมทานอล/เมทิลีนได คลอไรด์/acetonitrile (10:20:70, v/v/v)และ 1 ml tetrahydrofuran และ trimethylamine (0.3:1 v /v) แล้วมีตะกอนคอมเพล็กซ์ carotenoproteinด้วยแอมโมเนียมซัลเฟต (ความเข้ม 60%) เป็นเค้าร่างโดยZagalsky, Ceccaldi และ Daumas (1970) และ precipitateมี centrifuged (4500g, 30 นาที), ละลายในฟอสเฟต 50 มม.บัฟเฟอร์ pH7 และ dialyzed ในบัฟเฟอร์เดียวค้างคืนพวกเขาได้แล้วบริสุทธิ์ โดยการแลกเปลี่ยนไอออน DEAE-เซลลูโลสchromatography ใช้การไล่ระดับสีแบบเส้นตรง (50-350 mM)ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7) แล้วถูก liberated carotenoidsจาก carotenoproteins ด้วยอะซีโตนตามขั้นตอนโดย Shone, Britton และ Goodwing (1979) และใช้บางชั้น chromatography [บางชั้นของซิลิก้าเจล-Gสนับสนุน 20 · จานแก้ว 20 ซม. (Analtech Inc นวร์กเดอ สหรัฐอเมริกา)] ระบุแต่ละ carotenoids ตามการดูดซึมสูงสุดและค่าที่ระบุตามมาตรฐาน (เอฟแมนลาโรช จำกัด บาเซิลสวิตเซอร์แลนด์และซิกมา จำกัดเคมีภัณฑ์ St. Louis, MOสหรัฐอเมริกา) วอเตอร์ปาร์คดูดซึมถูกกำหนดด้วยการเครื่องทดสอบกรดด่าง Spektromom-203 (บูดาเปสต์ ฮังการี)ตามคำแนะนำ โดย Czeczuga และ Czeczuga-Semeniuk (1998)
การแปล กรุณารอสักครู่..
2.7 เนื้อหา carotenoid
สำหรับการประมาณค่า carotenoid กุ้งนางฟ้าผู้ใหญ่ก็
หดหายระงับใน 10 มิลลิลิตรผสมที่มี
เมทานอล / เมทิลีนคลอไรด์ / acetonitrile (10:20:70, v / v / v)
และ 1 มิลลิลิตร tetrahydrofuran และ trimethylamine (0.3: 1 v /
V) คอมเพล็กซ์ carotenoprotein ถูกตกตะกอนแล้ว
ด้วยแอมโมเนียมซัลเฟต (อิ่มตัว 60%) ในขณะที่ระบุไว้โดย
Zagalsky, Ceccaldi และ Daumas (1970) และตะกอน
ถูกหมุนเหวี่ยง (4500G, 30 นาที) ละลายใน 50 มิลลิฟอสเฟต
บัฟเฟอร์ pH7 และ dialyzed ในชั่วข้ามคืน ในบัฟเฟอร์เดียวกัน.
พวกเขาถูกทำให้บริสุทธิ์แล้วโดย DEAE-เซลลูโลสแลกเปลี่ยนไอออน
โคโดยใช้ทางลาดเชิงเส้น (50-350 มิลลิเมตร)
ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7) Carotenoids ได้รับอิสรภาพแล้ว
จาก carotenoproteins ด้วยอะซิโตนเป็นไปตามขั้นตอนที่
อธิบายโดย Shone, บริทและ Goodwing (1979) และ
การใช้สารชั้นบาง ๆ [ชั้นบาง ๆ ของซิลิกาเจลจี
ได้รับการสนับสนุนในวันที่ 20 · 20 ซมแผ่นกระจก (Analtech Inc, นวร์ก,
DE, USA)] นอยด์ส่วนบุคคลที่ถูกระบุอยู่บนพื้นฐานของ
การดูดซึมสูงสุดและค่านิยมที่ถูกระบุตาม
มาตรฐาน (เอฟฮอฟแมน-La Roche จำกัด , บาเซิล
วิตเซอร์แลนด์และซิก Chemicals Co. , เซนต์หลุยส์, MO,
USA) การดูดซึมสูงสุดได้รับการพิจารณาด้วย
spectrophotometer Spektromom-203 (บูดาเปสต์ฮังการี)
ตามที่ระบุโดย Czeczuga และ Czeczuga-Semeniuk (1998)
การแปล กรุณารอสักครู่..
2.7 .
เนื้อหาสำหรับผู้ใหญ่แคโรทีนแคโรทีนประมาณนางฟ้ากุ้ง
บด , ระงับ 10 มิลลิลิตร ผสมที่ประกอบด้วย
เมทานอลเมทธิลีนคลอไรด์ / ไน ( 10:20:70 , V / V / V )
1 มิลลิลิตรของเตตระไฮโดรฟแรน และไตรเมทิลามีน ( 0.3:1 v /
V ) การ carotenoprotein เชิงซ้อนแล้วตกตะกอนด้วยแอมโมเนียมซัลเฟต (
% 60 ของ ) ตามที่อธิบายไว้โดย zagalsky ceccaldi
, ,และ daumas ( 1970 ) และตกตะกอน
คือระดับ ( 4500g 30 นาที ) ละลายในฟอสเฟตบัฟเฟอร์ 50 mm
, ผ่านการสกัด และค้างคืนในบัฟเฟอร์เดียวกัน
จากนั้นบริสุทธิ์โดยเทคนิคแลกเปลี่ยนไอออน
เซลลูโลสโดยใช้เส้นทำสี ( 50 - 350 มิลลิเมตร )
ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7 ) . แคโรทีนอยด์ จึงปลดปล่อย
จาก carotenoproteins ด้วยอะซีโตนตามขั้นตอน
อธิบายโดย shone บริตตัน และ goodwing ( 1979 ) และใช้วิธี [
ชั้นบางชั้นบางของซิลิกา gel-g
รองรับใน 20 ด้วย 20 ซม. จานแก้ว ( analtech Inc , นวร์ก ,
, USA ) ] แคโรทีนอยด์แต่ละตัวระบุตามการดูดซึมสูงสุดและค่า
จะถูกระบุตามมาตรฐาน ( F . ฮอฟแมน ลา โรช จำกัด , บาเซิล , สวิสเซอร์แลนด์และ Sigma
Chemicals Co . , St . Louis , MO
, USA )การดูดซึม Maxima เป็นด้วย
spektromom-203 Spectrophotometer ( บูดาเปสต์ , ฮังการี )
ตามที่ระบุโดย czeczuga และ czeczuga เซเมเนียก ( 1998 )
การแปล กรุณารอสักครู่..