Western blot. Once cell were 80% co

Western blot. Once cell were 80% confluent, they were lysed with appropriate buffer. Protein concentrations were determined using the Pierce BCA Protein Assay Kit (NCI1059CH, Thermo, Waltham, MA, USA) and then adjusted to the same level. Protein were denatured by heating at 100๐C for 5 min, subjected to SDS-PAGE electrophoresis, and transferred to membranes. For immunoblotting, the membranes were incubated with primary antibodies at 4๐C overnight and then with secondary antibodies for 1 h at room temperature. Enhanced chemiluminescent substrate was added for gel imaging or film exposure. Images were collected using a Chemi DOC XRS + Imaging system (BioRad, Hercules. CA. USA). The gray scale value of protein bands was scanned using Image Lab 5.0 (BioRad, Hercules. CA. USA).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

บล็อทตะวันตก เมื่อเซลล์ได้ 80% confluent พวกเขาถูก lysed บัฟเฟอร์ที่เหมาะสม ความเข้มข้นของโปรตีนได้โดยใช้ชุดทดสอบเพียร์ซ BCA โปรตีน (NCI1059CH เทอร์โม นีซ MA สหรัฐอเมริกา) และปรับระดับเดียวกัน โปรตีนได้เอทิลแอลกอฮอล์ โดยเครื่องทำความร้อนที่ 100๐ C 5 นาที ให้อิ SDS-หน้า และโอนไปเยื่อ สำหรับ immunoblotting เยื่อได้รับการกก กับแอนตี้หลักที่ 4๐ C ค้างคืนแล้วแอนตี้รองสำหรับ 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง เพิ่มพื้นผิว chemiluminescent ถูกเพิ่มสำหรับรับภาพหรือฟิล์มเจ ภาพที่ถูกเก็บรวบรวมใช้เป็น Chemi DOC XRS + ภาพระบบ (BioRad, Hercules สหรัฐอเมริกา CA.) ค่าระดับสีเทาของแถบโปรตีนถูกสแกนใช้ภาพแล็บ 5.0 (BioRad, Hercules สหรัฐอเมริกา CA.)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ดวงตะวัน เมื่อเซลล์ถูก 80% ไหลมารวมกันที่พวกเขาถูก lysed กับกันชนที่เหมาะสม ความเข้มข้นของโปรตีนได้รับการพิจารณาโดยใช้เพียร์ซ BCA โปรตีน Assay Kit (NCI1059CH, เทอร์โม, เคมบริดจ์, สหรัฐอเมริกา) และปรับให้อยู่ในระดับเดียวกันแล้ว โปรตีนเอทิลแอลกอฮอล์ด้วยความร้อนที่ 1000C เป็นเวลา 5 นาทีภายใต้ระบบ SDS-PAGE electrophoresis และโอนไปยังเยื่อ สำหรับ immunoblotting เยื่อที่ถูกบ่มกับแอนติบอดีหลักที่ 40C ค้างคืนแล้วกับแอนติบอดีรองเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง ปรับปรุงพื้นผิว chemiluminescent ถูกเพิ่มเข้ามาสำหรับการถ่ายภาพเจลหรือการสัมผัสภาพยนตร์ ภาพที่ถูกเก็บรวบรวมใช้ DOC XRS + ระบบการถ่ายภาพ Chemi (BioRad ดาว. แคลิฟอร์เนียสหรัฐอเมริกา) ค่าระดับสีเทาของวงดนตรีที่ได้รับการสแกนโปรตีนโดยใช้ภาพ Lab 5.0 (BioRad ดาว. แคลิฟอร์เนียสหรัฐอเมริกา)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

Western blot . เมื่อเซลล์ถูก 80% กระจู๋กระจี๋ พวกเขา lysed บัฟเฟอร์ที่เหมาะสม ความเข้มข้นของโปรตีนถูกใช้แทง BCA โปรตีนต่อชุด ( nci1059ch Land Waltham , MA , USA ) และปรับให้อยู่ในระดับเดียวกัน โปรตีนถูกใช้โดยความร้อนที่อุณหภูมิ 100 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที๐ภายใต้ SDS-PAGE electrophoresis และโอนไปยังเยื่อ สำหรับ ) , เยื่อแผ่นแบบแยกแอนติบอดีประถมศึกษาที่ 4 ๐ C ค้างคืนแล้วกับแอนติบอดีมัธยม 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง เพิ่มสาร chemiluminescent เพิ่มเจล การถ่ายภาพแสงฟิล์ม ภาพที่ถูกเก็บโดยใช้เคมี doc xrs + Imaging System ( biorad , Hercules . แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา ) สีเทา ) ค่าของแถบโปรตีนถูกสแกนโดยใช้ภาพแล็บ 5.0 ( biorad , Hercules . แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา )