- ข้อความ
- ประวัติศาสตร์
2. Materials and methods2.1. Sampli
2. Materials and methods
2.1. Sampling
Samples of brewer's grains were collected from a factory located
in Cordoba, Argentina. Samples (3 kg each) were obtained from July
2010eJune 2012. Primary samples were homogenized and quartered
to obtain laboratory samples of 1 kg each.
2.2. Isolation of Listeria spp.
The isolation of Listeria spp. from brewer's grainswas performed
according to the double enrichment method (non-selective
enrichment and selective enrichment) followed by plate isolation
procedures described in the Bacteriological Analytical Manual of
the USA-FDA (Hitchins, 1998), with modifications in the media and
selective agents used.
Twenty five grams of each sample were homogenized in 225 mL
of tryptic soy broth (TSB) and incubated at 37 C for 24 h (nonselective
enrichment). Aliquots of 1 mL of primary enrichment
were transferred to 10 mL of TSB supplemented with tripaflavine
and ceftazidime and incubated at 4 C for 24 h and then at 37 C for
24 h (selective enrichment). Subsequently, aliquots of 0.1 mL of
secondary enrichments were plated in duplicate in Palcam agar
(Merck®, Germany) supplemented with selective agents. Typical
colonies selected by Gram staining were subcultured in tryptic soy
agar (TSA) for further biochemical characterization.
2.3. Hemolytic activity of L. monocytogenes
The hemolytic activity of Listeria strains was determined by
using a procedure developed by Gallego et al. (2007). The isolates
were inoculated in brain hearth infusion (BHI) and incubated at
37 C for 18 h. Serial twofold dilutions were made by mixing 50 mL
of each bacterial suspension with 0.85% ClNa in microtitle plates
with U-form wells. Then, 100 mL of a 3% suspension of human
erythrocytes, previously washed with a solution containing 0.85%
ClNa, 0.01% gelatin and 0.43% NaN3,was added to each dilution. The
microplates were incubated at 37 C for 4 h. The hemolytic activity
titer was expressed as complete hemolysis units (CHU: the reciprocal
of the highest dilution at which a 100% hemolysis was
observed) and minimum hemolysis units (MHU: the reciprocal of
the highest dilution at which hemolysis was detected).
2.4. Bacterial strains
LAB strains were isolated from brewer's grains, according to the
methodology proposed by The International Commission on
Microbiological Specification for Foods (ICMSF, 1996). LAB were
maintained at 20 C in Man Rogosa Sharpe broth (MRS) containing
30% (w/v) glycerol. Eight strains of L. monocytogenes were
used in this study. L. monocytogenes LM1 was obtained from
brewer's grains samples. L. monocytogenes LM2, LM5, LM12, LM15,
LM17, LM25 and LM26 belong to the culture collection of the
Bacteriology Laboratory of Universidad Nacional de Río Cuarto,
Cordoba. These bacteria were grown in TSB at 37 C for 24 h. All
strains were stored at 20 C in TSB broth containing 30% (w/v)
glycerol.
2.5. Identification of bacterial strains
LAB isolates were identified using the following tests, Gram
stain, production of catalase and cytochrome oxidase, CO2 production
from glucose, growth at different temperatures (10 and
45 C), growth at different pH values (4.4 and 9.6), growth at
different NaCl concentrations (6.5 and 18%) and production of acid
from different carbon sources (glycerol, erythritol, D-arabinose, Larabinose,
D-xylose, D-adonitol, D-galactose, D-glucose, D-fructose,
D-mannose, L-rhamnose, Dulcitol, Inositol, D-mannitol,D-celobiose,
D-maltose, D-lactose, D-melibiose, D-saccharose, D-trehalose, D-rafinose
and starch.) (Holt et al., 1994).
Morphologically typical colonies of Listeria spp. in Palcam agar
were confirmed by Gram's staining, catalase reaction, oxidase test,
motility at 25 C, methyl red test, VogeseProskauer test, CAMP test
and fermentation of sugars (D-glucose, rhamnose, mannitol, amethyl
D-mannoside and xylose) (Holt et al., 1994).
2.6. Determination of the antimicrobial activity of LAB
Sensitivity to inhibitory substances from LAB was tested by the
streak-diffusion method described by Barberis and co-workers. An
overnight culture in MRS broth of the LAB strain to be tested for
production of antimicrobial compounds was centrally streaked on
MRS broth added with 1.2% of agar. The agar plate was incubated at
37 C for 18 h under microaerobic conditions. Growthwas sterilized
by exposure to chloroform vapors for 20 min and air for 10 min.
Then, five LAB strains were streaked perpendicularly to central
growth and plates were re-incubated at 37 C for 18 h under
microaerobic conditions. Plates were examined for inhibition zones.
2.7. Detection of antilisterial activity
Antilisterial activity by LAB was performed following the
methodology proposed by Barberis et al. (2002), as described
above. The indicator strains were eight different strains of
L. monocytogenes (LM1, LM2, LM5, LM12, LM15, LM17, LM25 and
LM26). The inhibition of bacterial growth around the central LAB
was measured.
2.8. Preparation of cell free supernatant and well diffusion method
In order to obtain cell free supernatants (CFS), each LAB strain
was cultivated in MRS broth at 37 C for 24 h with 5% CO2. CFS were
obtained by centrifuging the cultures at 8078 g in the cold (4 C)
for 20 min followed by exposure to chloroform for 20 min. In order
to eliminate the inhibitory effects attributed to the organic acids,
these fractions with biological activity were neutralized by the
addition of 1 mol l1 sodium hydroxide. All strains that showed
antilisterial activity were tested by the well diffusion assay. TSAwas
first shown with the indicator organisms and then wells of 8mm of
diameter were made. Then, 100 ml of CFS and neutralized CFS from
each LAB were poured into different wells. The diameters of inhibition
zones around each well were measured after incubation at
37 C for 24 h with 5% CO2. All the experiments were carried out in
duplicate (Ruíz et al., 2012).
2.9. Statistical analysis
The antimicrobial activity of LAB were statistically analyzed
using InfoStat software through an ANOVA. Means antilisterial inhibition
halo were compared by Bonferroni test in streak-diffusion
method and Tukey test in well diffusion method to determine the
significant difference between the different strains (p 0.05) (Di
2.1. Sampling
Samples of brewer's grains were collected from a factory located
in Cordoba, Argentina. Samples (3 kg each) were obtained from July
2010eJune 2012. Primary samples were homogenized and quartered
to obtain laboratory samples of 1 kg each.
2.2. Isolation of Listeria spp.
The isolation of Listeria spp. from brewer's grainswas performed
according to the double enrichment method (non-selective
enrichment and selective enrichment) followed by plate isolation
procedures described in the Bacteriological Analytical Manual of
the USA-FDA (Hitchins, 1998), with modifications in the media and
selective agents used.
Twenty five grams of each sample were homogenized in 225 mL
of tryptic soy broth (TSB) and incubated at 37 C for 24 h (nonselective
enrichment). Aliquots of 1 mL of primary enrichment
were transferred to 10 mL of TSB supplemented with tripaflavine
and ceftazidime and incubated at 4 C for 24 h and then at 37 C for
24 h (selective enrichment). Subsequently, aliquots of 0.1 mL of
secondary enrichments were plated in duplicate in Palcam agar
(Merck®, Germany) supplemented with selective agents. Typical
colonies selected by Gram staining were subcultured in tryptic soy
agar (TSA) for further biochemical characterization.
2.3. Hemolytic activity of L. monocytogenes
The hemolytic activity of Listeria strains was determined by
using a procedure developed by Gallego et al. (2007). The isolates
were inoculated in brain hearth infusion (BHI) and incubated at
37 C for 18 h. Serial twofold dilutions were made by mixing 50 mL
of each bacterial suspension with 0.85% ClNa in microtitle plates
with U-form wells. Then, 100 mL of a 3% suspension of human
erythrocytes, previously washed with a solution containing 0.85%
ClNa, 0.01% gelatin and 0.43% NaN3,was added to each dilution. The
microplates were incubated at 37 C for 4 h. The hemolytic activity
titer was expressed as complete hemolysis units (CHU: the reciprocal
of the highest dilution at which a 100% hemolysis was
observed) and minimum hemolysis units (MHU: the reciprocal of
the highest dilution at which hemolysis was detected).
2.4. Bacterial strains
LAB strains were isolated from brewer's grains, according to the
methodology proposed by The International Commission on
Microbiological Specification for Foods (ICMSF, 1996). LAB were
maintained at 20 C in Man Rogosa Sharpe broth (MRS) containing
30% (w/v) glycerol. Eight strains of L. monocytogenes were
used in this study. L. monocytogenes LM1 was obtained from
brewer's grains samples. L. monocytogenes LM2, LM5, LM12, LM15,
LM17, LM25 and LM26 belong to the culture collection of the
Bacteriology Laboratory of Universidad Nacional de Río Cuarto,
Cordoba. These bacteria were grown in TSB at 37 C for 24 h. All
strains were stored at 20 C in TSB broth containing 30% (w/v)
glycerol.
2.5. Identification of bacterial strains
LAB isolates were identified using the following tests, Gram
stain, production of catalase and cytochrome oxidase, CO2 production
from glucose, growth at different temperatures (10 and
45 C), growth at different pH values (4.4 and 9.6), growth at
different NaCl concentrations (6.5 and 18%) and production of acid
from different carbon sources (glycerol, erythritol, D-arabinose, Larabinose,
D-xylose, D-adonitol, D-galactose, D-glucose, D-fructose,
D-mannose, L-rhamnose, Dulcitol, Inositol, D-mannitol,D-celobiose,
D-maltose, D-lactose, D-melibiose, D-saccharose, D-trehalose, D-rafinose
and starch.) (Holt et al., 1994).
Morphologically typical colonies of Listeria spp. in Palcam agar
were confirmed by Gram's staining, catalase reaction, oxidase test,
motility at 25 C, methyl red test, VogeseProskauer test, CAMP test
and fermentation of sugars (D-glucose, rhamnose, mannitol, amethyl
D-mannoside and xylose) (Holt et al., 1994).
2.6. Determination of the antimicrobial activity of LAB
Sensitivity to inhibitory substances from LAB was tested by the
streak-diffusion method described by Barberis and co-workers. An
overnight culture in MRS broth of the LAB strain to be tested for
production of antimicrobial compounds was centrally streaked on
MRS broth added with 1.2% of agar. The agar plate was incubated at
37 C for 18 h under microaerobic conditions. Growthwas sterilized
by exposure to chloroform vapors for 20 min and air for 10 min.
Then, five LAB strains were streaked perpendicularly to central
growth and plates were re-incubated at 37 C for 18 h under
microaerobic conditions. Plates were examined for inhibition zones.
2.7. Detection of antilisterial activity
Antilisterial activity by LAB was performed following the
methodology proposed by Barberis et al. (2002), as described
above. The indicator strains were eight different strains of
L. monocytogenes (LM1, LM2, LM5, LM12, LM15, LM17, LM25 and
LM26). The inhibition of bacterial growth around the central LAB
was measured.
2.8. Preparation of cell free supernatant and well diffusion method
In order to obtain cell free supernatants (CFS), each LAB strain
was cultivated in MRS broth at 37 C for 24 h with 5% CO2. CFS were
obtained by centrifuging the cultures at 8078 g in the cold (4 C)
for 20 min followed by exposure to chloroform for 20 min. In order
to eliminate the inhibitory effects attributed to the organic acids,
these fractions with biological activity were neutralized by the
addition of 1 mol l1 sodium hydroxide. All strains that showed
antilisterial activity were tested by the well diffusion assay. TSAwas
first shown with the indicator organisms and then wells of 8mm of
diameter were made. Then, 100 ml of CFS and neutralized CFS from
each LAB were poured into different wells. The diameters of inhibition
zones around each well were measured after incubation at
37 C for 24 h with 5% CO2. All the experiments were carried out in
duplicate (Ruíz et al., 2012).
2.9. Statistical analysis
The antimicrobial activity of LAB were statistically analyzed
using InfoStat software through an ANOVA. Means antilisterial inhibition
halo were compared by Bonferroni test in streak-diffusion
method and Tukey test in well diffusion method to determine the
significant difference between the different strains (p 0.05) (Di
0/5000
2. วัสดุและวิธีการ2.1 การสุ่มตัวอย่างตัวอย่างของธัญพืชของ brewer ได้รวบรวมจากโรงงานที่ตั้งอยู่ใน ordoba C อาร์เจนติน่า ตัวอย่าง (3 กก.ละ) ได้รับมาตั้งแต่เดือนกรกฎาคม2010eJune 2012 ตัวอย่างหลัก homogenized เป็นกลุ่ม และ quarteredเพื่อขอรับตัวอย่าง 1 กิโลกรัมแต่ละห้องปฏิบัติการ2.2 การแยกของออลิโอแยกของออลิโอจาก grainswas ของ brewer ดำเนินตามวิธีโดดเด่นคู่ (ไม่ใช่เลือกโดดเด่นและเติมเต็มให้เลือก) ตามแยกจานขั้นตอนที่อธิบายไว้ในคู่มือวิเคราะห์ Bacteriological ของในสหรัฐอเมริกา-FDA (Hitchins, 1998), มีการปรับเปลี่ยนสื่อ และตัวแทนงานที่ใช้ยี่สิบห้ากรัมของแต่ละอย่างถูก homogenized เป็นกลุ่มใน 225 mLของถั่วเหลือง tryptic ซุป (TSB) และ incubated ที่ 37 C สำหรับ (nonselective h 24ขอ) Aliquots 1 mL ของบ่อหลักได้โอนย้ายไป 10 mL ของ TSB เสริม ด้วย tripaflavineและเซฟตาซิดิม และ incubated ที่ 4 C ใน 24 ชม แล้ว ที่ 37 C สำหรับ24 ชม (ขอเลือก) ในเวลาต่อมา aliquots ของ 0.1 mL ของenrichments รองถูกชุบในซ้ำใน Palcam agar(เมอร์ค® เยอรมนี) เสริม ด้วยตัวแทนที่เลือก โดยทั่วไปอาณานิคมที่เลือก โดยการย้อมสีกรัมถูก subcultured ในถั่วเหลือง trypticagar (TSA) สำหรับต่อชีวเคมีจำแนก2.3 การกิจกรรม hemolytic ของ L. monocytogenesกิจกรรม hemolytic ของสายพันธุ์ออลิถูกกำหนดโดยโดยใช้กระบวนการพัฒนาโดย Gallego et al. (2007) การแยกinoculated ในสมองคอนกรีตพื้นเตา (BHI) และ incubated ที่37 C สำหรับ 18 h. dilutions ประจำอยู่สองประการคือเกิดจากการผสม 50 mLการระงับเชื้อแบคทีเรียแต่ละ 0.85% ClNa ในแผ่น microtitleกับ U แบบบ่อ 3% ระงับมนุษย์แล้ว 100 mLerythrocytes ก่อนหน้านี้ล้าง ด้วยโซลูชันประกอบด้วย 0.85%ClNa ตุ๋น 0.01% และ 0.43% NaN3 ถูกเพิ่มเจือจางแต่ละ ที่microplates ได้ incubated ที่ 37 C สำหรับ 4 h กิจกรรม hemolytictiter ถูกแสดงเป็นหน่วย hemolysis สมบูรณ์ (ชู: ส่วนกลับของการเจือจางสูงสุดที่มี hemolysis 100%สังเกต) และหน่วย hemolysis ต่ำสุด (MHU: ส่วนกลับของที่สูงเจือจางที่ hemolysis พบ)2.4. แบคทีเรียสายพันธุ์สายพันธุ์ห้องปฏิบัติได้แยกต่างหากจากธัญพืชของ brewer ตามวิธีที่เสนอ โดยคณะกรรมการนานาชาติที่บนข้อกำหนดทางจุลชีววิทยาสำหรับอาหาร (ICMSF, 1996) ห้องปฏิบัติได้รักษาที่ 20 C ในคน Rogosa Sharpe ประกอบด้วยซุป (MRS)กลีเซอร 30% (w/v) มี 8 สายพันธุ์ของ L. monocytogenesใช้ในการศึกษานี้ L. monocytogenes LM1 ได้รับจากตัวอย่างของ brewer ธัญพืช L. monocytogenes LM2, LM5, LM12, LM15LM17, LM25 และ LM26 เป็นการรวบรวมวัฒนธรรมBacteriology ปฏิบัติของ Universidad Nacional de รีโอเดลาป CuartoC ordoba แบคทีเรียเหล่านี้ถูกปลูกใน TSB ที่ 37 C สำหรับ 24 h. ทั้งหมดสายพันธุ์ถูกเก็บไว้ที่ 20 C ในซุป TSB ประกอบด้วย 30% (w/v)กลีเซอร2.5 การระบุสายพันธุ์เชื้อแบคทีเรียห้องปฏิบัติแยกระบุโดยใช้การทดสอบต่อไปนี้ กรัมติด ผลิต catalase และ cytochrome oxidase ผลิต CO2จากกลูโคส เจริญเติบโตที่อุณหภูมิต่าง ๆ (10 และ45 C), ค่า pH ต่าง ๆ (4.4 และ 9.6), อัตราการเติบโตอัตราการเติบโตความเข้มข้น NaCl แตกต่าง (6.5 และ 18%) และการผลิตของกรดจากแหล่งคาร์บอนที่แตกต่างกัน (กลีเซอร erythritol, D arabinose, LarabinoseD xylose, D-adonitol กา แล็กโทส D, D-กลูโคส D- ฟรักโทสD-mannose, L-rhamnose, Dulcitol, Inositol, D-mannitol, D-celobioseD-maltose, D D-แล็กโทส D-melibiose -saccharose, D trehalose, D-rafinoseและแป้ง) (Holt et al., 1994)อาณานิคม morphologically ทั่วไปของออลิโอใน Palcam agarได้รับการยืนยัน โดยย้อมสีกรัมของ ปฏิกิริยา catalase, oxidase ทดสอบmotility ที่ 25 C, methyl แดงทดสอบ ทดสอบ VogeseProskauer ทดสอบแคมป์และหมักน้ำตาล (D-กลูโคส rhamnose, mannitol, amethylD-mannoside และ xylose) (Holt et al., 1994)2.6 การกำหนดกิจกรรมการต้านจุลชีพของห้องปฏิบัติการทดสอบความไวกับลิปกลอสไขสารจากห้องปฏิบัติการโดยการวิธีอับแพร่โดย Barberis และเพื่อนร่วมงาน มีวัฒนธรรมค้างคืนในซุป MRS ของพันธุ์ห้องปฏิบัติการทดสอบสำหรับผลิตสารต้านจุลชีพถูกลายอยู่ใจกลางเมืองเพิ่ม 1.2% ของ agar ซุป MRS จาน agar เป็น incubated ที่C 37 สำหรับ h 18 ภายใต้เงื่อนไข microaerobic Growthwas sterilizedจากการสัมผัสกับ chloroform กระทบสำหรับ 20 นาทีและอากาศสำหรับ 10 นาทีแล้ว ห้องปฏิบัติการสายพันธุ์ที่ห้าถูกลาย perpendicularly ไปเจริญเติบโตและแผ่นได้อีก incubated ที่ 37 C ใน 18 h ภายใต้สภาพ microaerobic แผ่นถูกตรวจสอบสำหรับโซนยับยั้ง2.7 การตรวจจับกิจกรรม antilisterialทำกิจกรรม Antilisterial โดยปฏิบัติตามวิธีการนำเสนอโดย Barberis et al. (2002), ดังที่ข้างต้น สายพันธุ์ตัวบ่งชี้ 8 สายพันธุ์ที่แตกต่างกันของL. monocytogenes (LM1, LM2, LM5, LM12, LM15, LM17, LM25 และLM26) ยับยั้งการเจริญเติบโตของเชื้อแบคทีเรียรอบแล็บกลางที่วัด2.8 การเตรียมเซลล์ฟรี supernatant และด้วยวิธีการแพร่เพื่อให้ได้เซลล์ฟรี supernatants (CFS), ต้องใช้ห้องปฏิบัติการแต่ละมีปลูกในซุป MRS ที่ 37 C ใน 24 ชมกับ 5% CO2 CFS ได้รับ โดย centrifuging วัฒนธรรมที่ g 8078 ในเย็น (4 C)สำหรับ 20 นาทีตาม ด้วยการสัมผัสกับ chloroform สำหรับ 20 นาที ในใบสั่งเพื่อกำจัดผลลิปกลอสไขเกิดจากการกรดอินทรีย์ส่วนเหล่านี้กับกิจกรรมชีวภาพถูก neutralized โดยนอกจากนี้ 1 โมล l 1 โซเดียมไฮดรอกไซด์ สายพันธุ์ทั้งหมดที่พบกิจกรรม antilisterial ถูกทดสอบ โดยทดสอบดีแพร่ TSAwasก่อน แสดงกับสิ่งมีชีวิตบ่งชี้ แล้วบ่อ 8 มม.ของเส้นผ่าศูนย์กลางได้ทำการ แล้ว 100 ml ของ CFS และ CFS neutralized จากแต่ละห้องปฏิบัติได้ poured เป็นบ่อแตกต่างกัน สมมาตรของการยับยั้งการโซนสถานแต่ละกันที่วัดหลังจากบ่มที่C 37 ใน 24 ชมกับ 5% CO2 ทดลองทั้งหมดได้ดำเนินการซ้ำ (Ruíz et al., 2012)2.9. สถิติวิเคราะห์กิจกรรมจุลินทรีย์ของห้องปฏิบัติมีวิเคราะห์ทางสถิติโดยใช้ซอฟต์แวร์ InfoStat ที่ผ่านการวิเคราะห์ความแปรปรวน หมายถึงยับยั้ง antilisterialhalo ถูกเทียบ Bonferroni ทดสอบในอับแพร่Tukey และวิธีทดสอบด้วยวิธีการแพร่จะกำหนดความแตกต่างระหว่างสายพันธุ์แตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญ (p 0.05) (ดิ
การแปล กรุณารอสักครู่..
2. วัสดุและวิธีการ
2.1 การเก็บตัวอย่าง
ตัวอย่างของเมล็ดเบียร์ของที่ถูกเก็บรวบรวมจากโรงงานที่ตั้งอยู่
ใน C? ordoba, อาร์เจนตินา ตัวอย่าง (3 กก. แต่ละคน) ที่ได้รับตั้งแต่เดือนกรกฎาคม
ปี 2012 2010eJune ตัวอย่างเป็นหลักหดหายและที่พักอาศัย
ที่จะได้รับตัวอย่างห้องปฏิบัติการ 1 กิโลกรัมแต่ละ.
2.2 การแยกเชื้อ Listeria spp.
แยก Listeria spp จาก grainswas ของเหล้าดำเนินการ
ตามวิธีการตกแต่งคู่ (ไม่เลือก
การตกแต่งและการตกแต่งที่เลือก) ตามด้วยแผ่นแยก
ขั้นตอนที่อธิบายไว้ในคู่มือการวิเคราะห์แบคทีเรียของ
สหรัฐอเมริกาอาหารและยา (Hitchins, 1998) ด้วยการปรับเปลี่ยนในสื่อและ
ตัวแทนที่เลือกใช้ .
ยี่สิบห้ากรัมของแต่ละตัวอย่างถูกหดหายใน 225 มิลลิลิตร
ของน้ำซุปถั่วเหลือง tryptic (TSB) และบ่มที่อุณหภูมิ 37? C เป็นเวลา 24 ชั่วโมง (nonselective
การตกแต่ง) ส่วนลงตัวของ 1 มิลลิลิตรของการเพิ่มคุณค่าหลัก
ถูกย้ายไป 10 มลของ TSB เสริมด้วย tripaflavine
และซิดีมและบ่มที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมงแล้วที่อุณหภูมิ 37? C เป็นเวลา
24 ชั่วโมง (เพิ่มคุณค่าในการคัดเลือก) ต่อมาส่วนลงตัว 0.1 มิลลิลิตร
enrichments รองถูกชุบในที่ซ้ำกันใน Oxford-agar
(Merck®, เยอรมนี) เสริมด้วยตัวแทนที่เลือก โดยทั่วไป
อาณานิคมเลือกโดยการย้อมสีแกรมได้รับเชื้อในถั่วเหลือง tryptic
วุ้น (TSA) สำหรับลักษณะทางชีวเคมีเพิ่มเติม.
2.3 กิจกรรม hemolytic ของ L. monocytogenes
กิจกรรม hemolytic สายพันธุ์เชื้อ Listeria ถูกกำหนดโดย
ใช้ขั้นตอนการพัฒนาโดย Gallego และคณะ (2007) สายพันธุ์
ที่ได้รับเชื้อในสมองแช่เตา (BHI) และบ่มที่อุณหภูมิ
37? C เป็นเวลา 18 ชั่วโมง เจือจางสองเท่าอนุกรมที่ถูกสร้างขึ้นโดยการผสม 50 มล
ของแต่ละระงับเชื้อแบคทีเรียที่มี 0.85% ClNa ในแผ่น microtitle
กับบ่อ U-รูปแบบ จากนั้น 100 มิลลิลิตรระงับ 3% ของมนุษย์
เม็ดเลือดแดงล้างก่อนหน้านี้ที่มีการแก้ปัญหาที่มี 0.85%
ClNa เจลาติน 0.01% และ 0.43% NaN3 ถูกเพิ่มเข้ามาในแต่ละเจือจาง
microplates บ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 4 ชั่วโมง กิจกรรม hemolytic
titer ถูกแสดงเป็นหน่วย hemolysis ฉบับสมบูรณ์ (ชู: ซึ่งกันและกัน
ของการลดสัดส่วนสูงสุดที่ hemolysis 100% ได้รับการ
สังเกต) และหน่วย hemolysis ขั้นต่ำ (MHU: กฎของ
การลดสัดส่วนสูงสุดที่ตรวจพบภาวะเม็ดเลือดแดงแตก).
2.4 สายพันธุ์แบคทีเรีย
สายพันธุ์ LAB ที่แยกได้จากเมล็ดของเหล้าตาม
วิธีการที่เสนอโดยคณะกรรมาธิการระหว่างประเทศใน
ทางจุลชีววิทยาข้อกำหนดสำหรับฟู้ดส์ (ICMSF, 1996) LAB ถูก
เก็บรักษาไว้ที่? 20? C ในผู้ชาย Rogosa น้ำซุปชาร์ป (MRS) ที่มี
30% (w / v) กลีเซอรอล แปดสายพันธุ์ของ L. monocytogenes ถูก
นำมาใช้ในการศึกษาครั้งนี้ L. monocytogenes LM1 ที่ได้รับจาก
กลุ่มตัวอย่างธัญพืชของผู้ผลิตเบียร์ L. monocytogenes LM2, LM5, LM12, LM15,
LM17, LM25 LM26 และอยู่ในคอลเลกชันวัฒนธรรมของ
ห้องปฏิบัติการแบคทีเรียของมหาวิทยาลัยแห่งชาติ Rio Cuarto,
C? ordoba แบคทีเรียเหล่านี้ถูกปลูกใน TSB ที่ 37? C เป็นเวลา 24 ชั่วโมง ทุก
สายพันธุ์ที่ถูกเก็บไว้ที่? 20? C ในน้ำซุป TSB ที่มี 30% (w / v)
กลีเซอรอล.
2.5 บัตรประจำตัวของแบคทีเรีย
สายพันธุ์ LAB ถูกระบุโดยใช้การทดสอบต่อไปนี้แกรม
คราบผลิต catalase และ oxidase cytochrome ผลิต CO2
จากกลูโคสการเจริญเติบโตที่อุณหภูมิที่แตกต่างกัน (10 และ
45 องศาเซลเซียส), การเจริญเติบโตที่ค่าพีเอชที่แตกต่างกัน (4.4 และ 9.6) การเจริญเติบโตที่
ระดับความเข้มข้นของโซเดียมคลอไรด์ที่แตกต่างกัน (6.5 และ 18%) และการผลิตกรด
จากแหล่งคาร์บอนที่แตกต่างกัน (กลีเซอรอล, Erythritol, D-arabinose, Larabinose,
D-ไซโลส, D-adonitol D-กาแลค, D-กลูโคสฟรุกโตส D- ,
D-mannose, L-rhamnose, Dulcitol, Inositol, D-mannitol, D-celobiose,
D-มอลโตส, D-แลคโตส, D-melibiose D-Saccharose D-ทรีฮาโล, D-rafinose
และแป้ง.) (โฮลท์ et al., 1994).
สัณฐานอาณานิคมทั่วไปของ Listeria spp ใน Oxford-agar
ได้รับการยืนยันโดยการย้อมสีแกรมของปฏิกิริยา catalase ทดสอบ oxidase,
การเคลื่อนไหวอยู่ที่ 25 องศาเซลเซียส, เมธิการทดสอบสีแดงทดสอบ VogeseProskauer ทดสอบ CAMP
และการหมักน้ำตาล (D-กลูโคสแรมโนส, แมนนิทอล, amethyl
D-mannoside และไซโล) (โฮลท์ et al., 1994).
2.6 ความมุ่งมั่นของฤทธิ์ต้านจุลชีพของ LAB
ความไวต่อสารยับยั้งจากห้องปฏิบัติการได้รับการทดสอบโดย
วิธีการแนวการแพร่อธิบายโดย Barberis และเพื่อนร่วมงาน
วัฒนธรรมค้างคืนในน้ำซุป MRS ของสายพันธุ์ LAB ที่จะทดสอบสำหรับ
การผลิตของสารต้านจุลชีพได้รับลายอยู่บน
น้ำซุป MRS เพิ่มเข้ามาด้วย 1.2% ของวุ้น จานเลี้ยงเชื้อที่ได้รับการบ่มที่อุณหภูมิ
37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 18 ชั่วโมงภายใต้เงื่อนไขที่เซลล์มี Growthwas ฆ่าเชื้อ
โดยการสัมผัสกับไอระเหยคลอโรฟอร์มเป็นเวลา 20 นาทีและอากาศเป็นเวลา 10 นาที.
จากนั้นห้าสายพันธุ์ LAB ถูกเส้นตั้งฉากกับกลาง
การเจริญเติบโตและแผ่นอีกครั้งบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 18 ชั่วโมงภายใต้
เงื่อนไขที่เซลล์มี แผ่นถูกตรวจสอบสำหรับโซนยับยั้ง.
2.7 การตรวจสอบของกิจกรรม antilisterial
กิจกรรม Antilisterial โดย LAB ได้ดำเนินการดังต่อไปนี้
วิธีการที่เสนอโดย Barberis et al, (2002) ตามที่กล่าวไว้
ข้างต้น สายพันธุ์ตัวบ่งชี้แปดสายพันธุ์ที่แตกต่างกันของ
แอล monocytogenes (LM1, LM2, LM5, LM12, LM15, LM17, LM25 และ
LM26) ยับยั้งการเจริญเติบโตของแบคทีเรียรอบกลาง LAB
วัด.
2.8 การเตรียมสารละลายมือถือฟรีและวิธีการแพร่กระจายอย่างดี
เพื่อให้ได้ supernatants มือถือฟรี (CFS) สายพันธุ์ LAB แต่ละ
ได้รับการปลูกฝังในอาหาร MRS broth ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมงด้วย CO2 5% CFS ถูก
ที่ได้จากการปั่นแยกวัฒนธรรมที่ 8078? กรัมในเย็น (4 องศาเซลเซียส)
เป็นเวลา 20 นาทีตามด้วยการสัมผัสกับคลอโรฟอร์มเป็นเวลา 20 นาที เพื่อ
ที่จะกำจัดการยับยั้งประกอบกับกรดอินทรีย์
เศษส่วนเหล่านี้กับกิจกรรมทางชีวภาพถูกเป็นกลางโดย
นอกเหนือจาก 1 mol L? 1 โซดาไฟ ทุกสายพันธุ์ที่แสดงให้เห็น
กิจกรรม antilisterial ถูกทดสอบด้วยวิธีการแพร่กระจายได้ดี TSAwas
แสดงครั้งแรกกับชีวิตตัวบ่งชี้และจากนั้นหลุม 8mm ของ
เส้นผ่าศูนย์กลางได้ทำ จากนั้น 100 มิลลิลิตรและ CFS CFS เป็นกลางจาก
แต่ละ LAB ถูกเทลงไปในหลุมที่แตกต่างกัน เส้นผ่าศูนย์กลางของการยับยั้ง
โซนรอบดีแต่ละวัดหลังจากบ่มที่
37? C เป็นเวลา 24 ชั่วโมงด้วย CO2 5% การทดสอบทั้งหมดได้ดำเนินการใน
ที่ซ้ำกัน (Ruíz et al., 2012).
2.9 การวิเคราะห์ทางสถิติ
ฤทธิ์ต้านจุลชีพของ LAB ที่ได้มาวิเคราะห์ทางสถิติ
โดยใช้ซอฟแวร์ InfoStat ผ่าน ANOVA หมายถึงการยับยั้ง antilisterial
รัศมีถูกนำมาเปรียบเทียบโดยการทดสอบ Bonferroni ในแนวแพร่
วิธีการและทดสอบ Tukey ในวิธีการแพร่กระจายได้ดีในการตรวจสอบ
ความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญระหว่างสายพันธุ์ที่แตกต่างกัน (p? 0.05) (Di
2.1 การเก็บตัวอย่าง
ตัวอย่างของเมล็ดเบียร์ของที่ถูกเก็บรวบรวมจากโรงงานที่ตั้งอยู่
ใน C? ordoba, อาร์เจนตินา ตัวอย่าง (3 กก. แต่ละคน) ที่ได้รับตั้งแต่เดือนกรกฎาคม
ปี 2012 2010eJune ตัวอย่างเป็นหลักหดหายและที่พักอาศัย
ที่จะได้รับตัวอย่างห้องปฏิบัติการ 1 กิโลกรัมแต่ละ.
2.2 การแยกเชื้อ Listeria spp.
แยก Listeria spp จาก grainswas ของเหล้าดำเนินการ
ตามวิธีการตกแต่งคู่ (ไม่เลือก
การตกแต่งและการตกแต่งที่เลือก) ตามด้วยแผ่นแยก
ขั้นตอนที่อธิบายไว้ในคู่มือการวิเคราะห์แบคทีเรียของ
สหรัฐอเมริกาอาหารและยา (Hitchins, 1998) ด้วยการปรับเปลี่ยนในสื่อและ
ตัวแทนที่เลือกใช้ .
ยี่สิบห้ากรัมของแต่ละตัวอย่างถูกหดหายใน 225 มิลลิลิตร
ของน้ำซุปถั่วเหลือง tryptic (TSB) และบ่มที่อุณหภูมิ 37? C เป็นเวลา 24 ชั่วโมง (nonselective
การตกแต่ง) ส่วนลงตัวของ 1 มิลลิลิตรของการเพิ่มคุณค่าหลัก
ถูกย้ายไป 10 มลของ TSB เสริมด้วย tripaflavine
และซิดีมและบ่มที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมงแล้วที่อุณหภูมิ 37? C เป็นเวลา
24 ชั่วโมง (เพิ่มคุณค่าในการคัดเลือก) ต่อมาส่วนลงตัว 0.1 มิลลิลิตร
enrichments รองถูกชุบในที่ซ้ำกันใน Oxford-agar
(Merck®, เยอรมนี) เสริมด้วยตัวแทนที่เลือก โดยทั่วไป
อาณานิคมเลือกโดยการย้อมสีแกรมได้รับเชื้อในถั่วเหลือง tryptic
วุ้น (TSA) สำหรับลักษณะทางชีวเคมีเพิ่มเติม.
2.3 กิจกรรม hemolytic ของ L. monocytogenes
กิจกรรม hemolytic สายพันธุ์เชื้อ Listeria ถูกกำหนดโดย
ใช้ขั้นตอนการพัฒนาโดย Gallego และคณะ (2007) สายพันธุ์
ที่ได้รับเชื้อในสมองแช่เตา (BHI) และบ่มที่อุณหภูมิ
37? C เป็นเวลา 18 ชั่วโมง เจือจางสองเท่าอนุกรมที่ถูกสร้างขึ้นโดยการผสม 50 มล
ของแต่ละระงับเชื้อแบคทีเรียที่มี 0.85% ClNa ในแผ่น microtitle
กับบ่อ U-รูปแบบ จากนั้น 100 มิลลิลิตรระงับ 3% ของมนุษย์
เม็ดเลือดแดงล้างก่อนหน้านี้ที่มีการแก้ปัญหาที่มี 0.85%
ClNa เจลาติน 0.01% และ 0.43% NaN3 ถูกเพิ่มเข้ามาในแต่ละเจือจาง
microplates บ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 4 ชั่วโมง กิจกรรม hemolytic
titer ถูกแสดงเป็นหน่วย hemolysis ฉบับสมบูรณ์ (ชู: ซึ่งกันและกัน
ของการลดสัดส่วนสูงสุดที่ hemolysis 100% ได้รับการ
สังเกต) และหน่วย hemolysis ขั้นต่ำ (MHU: กฎของ
การลดสัดส่วนสูงสุดที่ตรวจพบภาวะเม็ดเลือดแดงแตก).
2.4 สายพันธุ์แบคทีเรีย
สายพันธุ์ LAB ที่แยกได้จากเมล็ดของเหล้าตาม
วิธีการที่เสนอโดยคณะกรรมาธิการระหว่างประเทศใน
ทางจุลชีววิทยาข้อกำหนดสำหรับฟู้ดส์ (ICMSF, 1996) LAB ถูก
เก็บรักษาไว้ที่? 20? C ในผู้ชาย Rogosa น้ำซุปชาร์ป (MRS) ที่มี
30% (w / v) กลีเซอรอล แปดสายพันธุ์ของ L. monocytogenes ถูก
นำมาใช้ในการศึกษาครั้งนี้ L. monocytogenes LM1 ที่ได้รับจาก
กลุ่มตัวอย่างธัญพืชของผู้ผลิตเบียร์ L. monocytogenes LM2, LM5, LM12, LM15,
LM17, LM25 LM26 และอยู่ในคอลเลกชันวัฒนธรรมของ
ห้องปฏิบัติการแบคทีเรียของมหาวิทยาลัยแห่งชาติ Rio Cuarto,
C? ordoba แบคทีเรียเหล่านี้ถูกปลูกใน TSB ที่ 37? C เป็นเวลา 24 ชั่วโมง ทุก
สายพันธุ์ที่ถูกเก็บไว้ที่? 20? C ในน้ำซุป TSB ที่มี 30% (w / v)
กลีเซอรอล.
2.5 บัตรประจำตัวของแบคทีเรีย
สายพันธุ์ LAB ถูกระบุโดยใช้การทดสอบต่อไปนี้แกรม
คราบผลิต catalase และ oxidase cytochrome ผลิต CO2
จากกลูโคสการเจริญเติบโตที่อุณหภูมิที่แตกต่างกัน (10 และ
45 องศาเซลเซียส), การเจริญเติบโตที่ค่าพีเอชที่แตกต่างกัน (4.4 และ 9.6) การเจริญเติบโตที่
ระดับความเข้มข้นของโซเดียมคลอไรด์ที่แตกต่างกัน (6.5 และ 18%) และการผลิตกรด
จากแหล่งคาร์บอนที่แตกต่างกัน (กลีเซอรอล, Erythritol, D-arabinose, Larabinose,
D-ไซโลส, D-adonitol D-กาแลค, D-กลูโคสฟรุกโตส D- ,
D-mannose, L-rhamnose, Dulcitol, Inositol, D-mannitol, D-celobiose,
D-มอลโตส, D-แลคโตส, D-melibiose D-Saccharose D-ทรีฮาโล, D-rafinose
และแป้ง.) (โฮลท์ et al., 1994).
สัณฐานอาณานิคมทั่วไปของ Listeria spp ใน Oxford-agar
ได้รับการยืนยันโดยการย้อมสีแกรมของปฏิกิริยา catalase ทดสอบ oxidase,
การเคลื่อนไหวอยู่ที่ 25 องศาเซลเซียส, เมธิการทดสอบสีแดงทดสอบ VogeseProskauer ทดสอบ CAMP
และการหมักน้ำตาล (D-กลูโคสแรมโนส, แมนนิทอล, amethyl
D-mannoside และไซโล) (โฮลท์ et al., 1994).
2.6 ความมุ่งมั่นของฤทธิ์ต้านจุลชีพของ LAB
ความไวต่อสารยับยั้งจากห้องปฏิบัติการได้รับการทดสอบโดย
วิธีการแนวการแพร่อธิบายโดย Barberis และเพื่อนร่วมงาน
วัฒนธรรมค้างคืนในน้ำซุป MRS ของสายพันธุ์ LAB ที่จะทดสอบสำหรับ
การผลิตของสารต้านจุลชีพได้รับลายอยู่บน
น้ำซุป MRS เพิ่มเข้ามาด้วย 1.2% ของวุ้น จานเลี้ยงเชื้อที่ได้รับการบ่มที่อุณหภูมิ
37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 18 ชั่วโมงภายใต้เงื่อนไขที่เซลล์มี Growthwas ฆ่าเชื้อ
โดยการสัมผัสกับไอระเหยคลอโรฟอร์มเป็นเวลา 20 นาทีและอากาศเป็นเวลา 10 นาที.
จากนั้นห้าสายพันธุ์ LAB ถูกเส้นตั้งฉากกับกลาง
การเจริญเติบโตและแผ่นอีกครั้งบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 18 ชั่วโมงภายใต้
เงื่อนไขที่เซลล์มี แผ่นถูกตรวจสอบสำหรับโซนยับยั้ง.
2.7 การตรวจสอบของกิจกรรม antilisterial
กิจกรรม Antilisterial โดย LAB ได้ดำเนินการดังต่อไปนี้
วิธีการที่เสนอโดย Barberis et al, (2002) ตามที่กล่าวไว้
ข้างต้น สายพันธุ์ตัวบ่งชี้แปดสายพันธุ์ที่แตกต่างกันของ
แอล monocytogenes (LM1, LM2, LM5, LM12, LM15, LM17, LM25 และ
LM26) ยับยั้งการเจริญเติบโตของแบคทีเรียรอบกลาง LAB
วัด.
2.8 การเตรียมสารละลายมือถือฟรีและวิธีการแพร่กระจายอย่างดี
เพื่อให้ได้ supernatants มือถือฟรี (CFS) สายพันธุ์ LAB แต่ละ
ได้รับการปลูกฝังในอาหาร MRS broth ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมงด้วย CO2 5% CFS ถูก
ที่ได้จากการปั่นแยกวัฒนธรรมที่ 8078? กรัมในเย็น (4 องศาเซลเซียส)
เป็นเวลา 20 นาทีตามด้วยการสัมผัสกับคลอโรฟอร์มเป็นเวลา 20 นาที เพื่อ
ที่จะกำจัดการยับยั้งประกอบกับกรดอินทรีย์
เศษส่วนเหล่านี้กับกิจกรรมทางชีวภาพถูกเป็นกลางโดย
นอกเหนือจาก 1 mol L? 1 โซดาไฟ ทุกสายพันธุ์ที่แสดงให้เห็น
กิจกรรม antilisterial ถูกทดสอบด้วยวิธีการแพร่กระจายได้ดี TSAwas
แสดงครั้งแรกกับชีวิตตัวบ่งชี้และจากนั้นหลุม 8mm ของ
เส้นผ่าศูนย์กลางได้ทำ จากนั้น 100 มิลลิลิตรและ CFS CFS เป็นกลางจาก
แต่ละ LAB ถูกเทลงไปในหลุมที่แตกต่างกัน เส้นผ่าศูนย์กลางของการยับยั้ง
โซนรอบดีแต่ละวัดหลังจากบ่มที่
37? C เป็นเวลา 24 ชั่วโมงด้วย CO2 5% การทดสอบทั้งหมดได้ดำเนินการใน
ที่ซ้ำกัน (Ruíz et al., 2012).
2.9 การวิเคราะห์ทางสถิติ
ฤทธิ์ต้านจุลชีพของ LAB ที่ได้มาวิเคราะห์ทางสถิติ
โดยใช้ซอฟแวร์ InfoStat ผ่าน ANOVA หมายถึงการยับยั้ง antilisterial
รัศมีถูกนำมาเปรียบเทียบโดยการทดสอบ Bonferroni ในแนวแพร่
วิธีการและทดสอบ Tukey ในวิธีการแพร่กระจายได้ดีในการตรวจสอบ
ความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญระหว่างสายพันธุ์ที่แตกต่างกัน (p? 0.05) (Di
การแปล กรุณารอสักครู่..
2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . ตัวอย่างของเบียร์ธัญพืช )
เก็บจากโรงงานตั้งอยู่
C ordoba , อาร์เจนตินา ตัวอย่าง ( 3 กิโลกรัมละ ) ที่ได้รับจาก 2010ejune
กรกฎาคม 2012 ตัวอย่างหลักถูกบดและ quartered
ได้รับปฏิบัติการตัวอย่าง 1 กิโลกรัมละ
2.2 . การแยกของ Listeria spp .
แยก Listeria spp . จากผลของการ grainswas
ตามวิธีการเสริมคู่ ( ไม่มีการเลือกและเลือกค่า
) ตามด้วยจานแยกขั้นตอนที่อธิบายไว้ในคู่มือวิเคราะห์ทางแบคทีเรียของ
usa-fda ( ฮิตชินส์ , 1998 ) , มีการปรับเปลี่ยนในสื่อและตัวแทนที่ใช้งาน
.
ยี่สิบห้ากรัมของแต่ละตัวอย่างถูกบดใน 225 ml
ของน้ำซุปถั่วเหลืองอาหาร ( TSB ) บ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง ( nonselective
เสริม ) เฉยๆ 1 มล.
เสริมหลักที่ถูกโอนไปยัง 10 มิลลิลิตร เติมยา tripaflavine
TSB และบ่มที่ 4 เป็นเวลา 24 ชั่วโมงแล้วที่ 37 C
24 H ( selective enrichment ) ต่อมาเฉยๆ 0.1 มิลลิลิตรของ
enrichments ทุติยภูมิได้ชุบซ้ำใน palcam agar ( Merck ®
,เยอรมนี ) เสริมด้วยตัวแทนที่เลือก โดยทั่วไป
อาณานิคมเลือกโดยกรัมคราบเป็น subcultured ในอาหารวุ้นถั่วเหลือง
( TSA ) ซึ่งลักษณะทางชีวเคมี .
2.3 กิจกรรมหลังของ L . monocytogenes
กิจกรรมหลังของ Listeria สายพันธุ์ที่ถูกกำหนดจากการใช้กระบวนการพัฒนาโดย
Gallego et al . ( 2007 ) แยกได้
ปลูกเชื้อในเตาที่ใช้สมอง ( BHI ) บ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 18 ชั่วโมง
อนุกรมสองเท่าเจือจาง สร้างโดยการผสม 50 มิลลิลิตร
แต่ละ bacterial suspension กับ clna 0.85 % ใน microtitle แผ่น
กับเวลส์ u-form . แล้ว 100 ml ของ 3% ช่วงล่างของมนุษย์
การล้างด้วยสารละลายที่มีก่อนหน้านี้ 0.85 %
clna เจลาติน 0.01 % และ 4 % nan3 , เพิ่มไปยังแต่ละเจือจาง
microplates ถูกบ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 4 ชั่วโมง กิจกรรม
hemolytic ระดับจะแสดงเป็นหน่วยระดับสมบูรณ์ ( ชู : ส่วนกลับของ dilution
สูงสุดที่ 100% ระดับคือ
สังเกต ) และหน่วยระดับต่ำสุด ( mhu : ส่วนกลับของ dilution สูงสุดที่ระดับ
2.4 ถูกตรวจพบ ) . แบคทีเรียสายพันธุ์ที่แยกได้จากห้องปฏิบัติการ
นำธัญพืช ตามที่
วิธีการที่เสนอโดยคณะกรรมาธิการระหว่างประเทศว่าด้วย
คุณสมบัติทางจุลชีววิทยาสำหรับอาหาร ( icmsf , 1996 ) แล็บถูก
รักษาที่ 20 C ในมนุษย์ rogosa ชาร์ป broth ( นาง ) ประกอบด้วย
30 % ( w / v ) กลีเซอรอล . 8 L .
monocytogenes เป็นสายพันธุ์ที่ใช้ในการทดลอง ฉัน monocytogenes lm1 ได้จาก
นำธัญพืช อย่าง ฉัน monocytogenes lm2 lm5 , lm12 lm15 lm17
, , , ,และ lm25 lm26 เป็นของวัฒนธรรมคอลเลกชันของ
แบคทีเรียในห้องปฏิบัติการของ Universidad Nacional de R í o cuarto
, C ordoba . แบคทีเรียเหล่านี้ถูกปลูกใน TSB 37 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 24 ชั่วโมง ทั้งหมด
สายพันธุ์ เก็บไว้ที่ 20 C ใน TSB broth ที่มี 30 % ( w / v )
รอล . 2.5 การจำแนกชนิดของแบคทีเรียไอโซเลท
แล็บระบุใช้การทดสอบต่อไปนี้ กรัม
เปื้อน ,การผลิตและสามารถนกลุมพู
การผลิต CO2 , กลูโคส , การเจริญเติบโตที่อุณหภูมิแตกต่างกัน ( 10
45 C ) , การเจริญเติบโตที่ค่า pH ที่แตกต่างกัน ( 4.4 และ 9.6 ) , การเจริญเติบโตที่แตกต่างกันความเข้มข้นเกลือ
( 6.5 และ 18% ) และการผลิตกรด
จากแหล่งคาร์บอนที่แตกต่างกัน ( กลีเซอรอลอีริทริตอล d-arabinose , larabinose d-xylose d-adonitol
, , , , d-galactose ดี กูลโคส d-fructose
ดี แมนโนส , , , ,l-rhamnose ดัลซิทอล , Inositol , d-mannitol d-celobiose d-maltose d-lactose
, , , , d-saccharose d-melibiose d-trehalose d-rafinose
, , , และแป้ง ) ( Holt et al . , 1994 ) .
จากปกติเชื้อ Listeria spp . ใน palcam วุ้น
ได้รับการยืนยันโดยกรัมของการย้อมสีสามารถทดสอบปฏิกิริยา เอนไซม์
การเคลื่อนที่ที่ 25 C , เมทิลเรด ทดสอบ vogeseproskauer
ทดสอบ , ค่ายและการหมักของน้ำตาล ( ดี กูลโคส rhamnose , mannitol , d-mannoside และ amethyl
6 ) ( Holt et al . , 1994 ) .
2.6 การกำหนดกิจกรรมการต้านจุลชีพของห้องปฏิบัติการ
ไวยับยั้งสารจากห้องปฏิบัติการทดสอบตามวิธีที่อธิบายโดย barberis
ริ้วกระจาย และเพื่อนร่วมงาน เป็น
วัฒนธรรมพักค้างคืนใน MRS broth ของห้องปฏิบัติการทดสอบ
เมื่อยเป็นการผลิตสารต้านจุลชีพจากส่วนกลางเป็นลายบน
MRS broth เพิ่ม 1.2% ของวุ้น การใช้จาน บ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 18 ชั่วโมง
ภายใต้เงื่อนไข microaerobic . ผ่านการฆ่าเชื้อด้วยแสง growthwas
( ไอสำหรับ 20 นาทีและอากาศเป็นเวลา 10 นาทีจากนั้นสายพันธุ์ 5
, แลปลายดิ่งเพื่อการเจริญเติบโตกลาง
และแผ่นถูกจะบ่มที่ 37 เป็นเวลา 18 ชั่วโมง ภายใต้
เงื่อนไข microaerobic . แผ่นทดสอบยับยั้งโซน .
2.7 . การตรวจหา antilisterial กิจกรรม
antilisterial กิจกรรมโดย Lab มีการปฏิบัติตามวิธีการที่เสนอโดย
barberis et al . ( 2002 )
, ตามที่อธิบายไว้ข้างต้น ตัวบ่งชี้ 8 สายพันธุ์สายพันธุ์แตกต่างกันของ
L monocytogenes ( lm1 lm2 lm5 lm12 , , , , lm17 lm15 , และ , lm25
lm26 )ยับยั้งการเติบโตของแบคทีเรียแลปกลางวัดรอบ
.
2.8 . เตรียมนำมือถือฟรีและวิธีการกระจาย
เพื่อให้ได้เซลล์ supernatants ฟรี ( CFS ) แต่ละ Lab เครียด
ถูกปลูกใน MRS broth ที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง คาร์บอนไดออกไซด์ 5% CFS )
) สารวัฒนธรรมที่ 8078 กรัมในที่เย็น ( 4 C )
นาน 20 นาที ตามด้วยการเข้าไปตั้ง 20 นาทีเพื่อ
เพื่อขจัดผลการยับยั้งเกิดจากกรดอินทรีย์
เศษส่วนนี้กับกิจกรรมทางชีวภาพเป็น neutralized โดย
เพิ่ม 1 โมล ผม 1 โซเดียม ไฮดรอกไซด์ ทุกสายพันธุ์ พบว่า antilisterial
กิจกรรมทดสอบโดยดีกระจายการทดสอบ tsawas
ครั้งแรกที่แสดงด้วยตัวบ่งชี้สิ่งมีชีวิตแล้วบ่อขนาด 8mm ของ
ได้ทํา จากนั้น100 มิลลิลิตร และถอนพิษจากโฆษณาโฆษณา
แต่ละ Lab ถูกเทลงไปในบ่อที่แตกต่างกัน ขนาดเส้นผ่านศูนย์กลางของการยับยั้ง
โซนแต่ละรอบก็ถูกวัดหลังจากบ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง
ร่วมกับ CO2 ร้อยละ 5 การทดลองทั้งหมดถูกกวาดออกไปใน
ซ้ำ ( RU í z et al . , 2012 ) .
2.9 . การวิเคราะห์ทางสถิติฤทธิ์ต้านจุลชีพของห้องปฏิบัติการ
ได้มาวิเคราะห์ทาง สถิติการใช้ซอฟต์แวร์ infostat ผ่านทางเดียวหมายถึง antilisterial ยับยั้ง
รัศมีเปรียบเทียบโดยการทดสอบในวิธีแพร่
อับบอนเฟอร์โรนีและวิธีทดสอบในการตรวจสอบแบบคู่ดี
ความแตกต่างระหว่างสายพันธุ์ที่แตกต่างกัน ( P 0.05 ) ดี
2.1 . ตัวอย่างของเบียร์ธัญพืช )
เก็บจากโรงงานตั้งอยู่
C ordoba , อาร์เจนตินา ตัวอย่าง ( 3 กิโลกรัมละ ) ที่ได้รับจาก 2010ejune
กรกฎาคม 2012 ตัวอย่างหลักถูกบดและ quartered
ได้รับปฏิบัติการตัวอย่าง 1 กิโลกรัมละ
2.2 . การแยกของ Listeria spp .
แยก Listeria spp . จากผลของการ grainswas
ตามวิธีการเสริมคู่ ( ไม่มีการเลือกและเลือกค่า
) ตามด้วยจานแยกขั้นตอนที่อธิบายไว้ในคู่มือวิเคราะห์ทางแบคทีเรียของ
usa-fda ( ฮิตชินส์ , 1998 ) , มีการปรับเปลี่ยนในสื่อและตัวแทนที่ใช้งาน
.
ยี่สิบห้ากรัมของแต่ละตัวอย่างถูกบดใน 225 ml
ของน้ำซุปถั่วเหลืองอาหาร ( TSB ) บ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง ( nonselective
เสริม ) เฉยๆ 1 มล.
เสริมหลักที่ถูกโอนไปยัง 10 มิลลิลิตร เติมยา tripaflavine
TSB และบ่มที่ 4 เป็นเวลา 24 ชั่วโมงแล้วที่ 37 C
24 H ( selective enrichment ) ต่อมาเฉยๆ 0.1 มิลลิลิตรของ
enrichments ทุติยภูมิได้ชุบซ้ำใน palcam agar ( Merck ®
,เยอรมนี ) เสริมด้วยตัวแทนที่เลือก โดยทั่วไป
อาณานิคมเลือกโดยกรัมคราบเป็น subcultured ในอาหารวุ้นถั่วเหลือง
( TSA ) ซึ่งลักษณะทางชีวเคมี .
2.3 กิจกรรมหลังของ L . monocytogenes
กิจกรรมหลังของ Listeria สายพันธุ์ที่ถูกกำหนดจากการใช้กระบวนการพัฒนาโดย
Gallego et al . ( 2007 ) แยกได้
ปลูกเชื้อในเตาที่ใช้สมอง ( BHI ) บ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 18 ชั่วโมง
อนุกรมสองเท่าเจือจาง สร้างโดยการผสม 50 มิลลิลิตร
แต่ละ bacterial suspension กับ clna 0.85 % ใน microtitle แผ่น
กับเวลส์ u-form . แล้ว 100 ml ของ 3% ช่วงล่างของมนุษย์
การล้างด้วยสารละลายที่มีก่อนหน้านี้ 0.85 %
clna เจลาติน 0.01 % และ 4 % nan3 , เพิ่มไปยังแต่ละเจือจาง
microplates ถูกบ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 4 ชั่วโมง กิจกรรม
hemolytic ระดับจะแสดงเป็นหน่วยระดับสมบูรณ์ ( ชู : ส่วนกลับของ dilution
สูงสุดที่ 100% ระดับคือ
สังเกต ) และหน่วยระดับต่ำสุด ( mhu : ส่วนกลับของ dilution สูงสุดที่ระดับ
2.4 ถูกตรวจพบ ) . แบคทีเรียสายพันธุ์ที่แยกได้จากห้องปฏิบัติการ
นำธัญพืช ตามที่
วิธีการที่เสนอโดยคณะกรรมาธิการระหว่างประเทศว่าด้วย
คุณสมบัติทางจุลชีววิทยาสำหรับอาหาร ( icmsf , 1996 ) แล็บถูก
รักษาที่ 20 C ในมนุษย์ rogosa ชาร์ป broth ( นาง ) ประกอบด้วย
30 % ( w / v ) กลีเซอรอล . 8 L .
monocytogenes เป็นสายพันธุ์ที่ใช้ในการทดลอง ฉัน monocytogenes lm1 ได้จาก
นำธัญพืช อย่าง ฉัน monocytogenes lm2 lm5 , lm12 lm15 lm17
, , , ,และ lm25 lm26 เป็นของวัฒนธรรมคอลเลกชันของ
แบคทีเรียในห้องปฏิบัติการของ Universidad Nacional de R í o cuarto
, C ordoba . แบคทีเรียเหล่านี้ถูกปลูกใน TSB 37 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 24 ชั่วโมง ทั้งหมด
สายพันธุ์ เก็บไว้ที่ 20 C ใน TSB broth ที่มี 30 % ( w / v )
รอล . 2.5 การจำแนกชนิดของแบคทีเรียไอโซเลท
แล็บระบุใช้การทดสอบต่อไปนี้ กรัม
เปื้อน ,การผลิตและสามารถนกลุมพู
การผลิต CO2 , กลูโคส , การเจริญเติบโตที่อุณหภูมิแตกต่างกัน ( 10
45 C ) , การเจริญเติบโตที่ค่า pH ที่แตกต่างกัน ( 4.4 และ 9.6 ) , การเจริญเติบโตที่แตกต่างกันความเข้มข้นเกลือ
( 6.5 และ 18% ) และการผลิตกรด
จากแหล่งคาร์บอนที่แตกต่างกัน ( กลีเซอรอลอีริทริตอล d-arabinose , larabinose d-xylose d-adonitol
, , , , d-galactose ดี กูลโคส d-fructose
ดี แมนโนส , , , ,l-rhamnose ดัลซิทอล , Inositol , d-mannitol d-celobiose d-maltose d-lactose
, , , , d-saccharose d-melibiose d-trehalose d-rafinose
, , , และแป้ง ) ( Holt et al . , 1994 ) .
จากปกติเชื้อ Listeria spp . ใน palcam วุ้น
ได้รับการยืนยันโดยกรัมของการย้อมสีสามารถทดสอบปฏิกิริยา เอนไซม์
การเคลื่อนที่ที่ 25 C , เมทิลเรด ทดสอบ vogeseproskauer
ทดสอบ , ค่ายและการหมักของน้ำตาล ( ดี กูลโคส rhamnose , mannitol , d-mannoside และ amethyl
6 ) ( Holt et al . , 1994 ) .
2.6 การกำหนดกิจกรรมการต้านจุลชีพของห้องปฏิบัติการ
ไวยับยั้งสารจากห้องปฏิบัติการทดสอบตามวิธีที่อธิบายโดย barberis
ริ้วกระจาย และเพื่อนร่วมงาน เป็น
วัฒนธรรมพักค้างคืนใน MRS broth ของห้องปฏิบัติการทดสอบ
เมื่อยเป็นการผลิตสารต้านจุลชีพจากส่วนกลางเป็นลายบน
MRS broth เพิ่ม 1.2% ของวุ้น การใช้จาน บ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 18 ชั่วโมง
ภายใต้เงื่อนไข microaerobic . ผ่านการฆ่าเชื้อด้วยแสง growthwas
( ไอสำหรับ 20 นาทีและอากาศเป็นเวลา 10 นาทีจากนั้นสายพันธุ์ 5
, แลปลายดิ่งเพื่อการเจริญเติบโตกลาง
และแผ่นถูกจะบ่มที่ 37 เป็นเวลา 18 ชั่วโมง ภายใต้
เงื่อนไข microaerobic . แผ่นทดสอบยับยั้งโซน .
2.7 . การตรวจหา antilisterial กิจกรรม
antilisterial กิจกรรมโดย Lab มีการปฏิบัติตามวิธีการที่เสนอโดย
barberis et al . ( 2002 )
, ตามที่อธิบายไว้ข้างต้น ตัวบ่งชี้ 8 สายพันธุ์สายพันธุ์แตกต่างกันของ
L monocytogenes ( lm1 lm2 lm5 lm12 , , , , lm17 lm15 , และ , lm25
lm26 )ยับยั้งการเติบโตของแบคทีเรียแลปกลางวัดรอบ
.
2.8 . เตรียมนำมือถือฟรีและวิธีการกระจาย
เพื่อให้ได้เซลล์ supernatants ฟรี ( CFS ) แต่ละ Lab เครียด
ถูกปลูกใน MRS broth ที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง คาร์บอนไดออกไซด์ 5% CFS )
) สารวัฒนธรรมที่ 8078 กรัมในที่เย็น ( 4 C )
นาน 20 นาที ตามด้วยการเข้าไปตั้ง 20 นาทีเพื่อ
เพื่อขจัดผลการยับยั้งเกิดจากกรดอินทรีย์
เศษส่วนนี้กับกิจกรรมทางชีวภาพเป็น neutralized โดย
เพิ่ม 1 โมล ผม 1 โซเดียม ไฮดรอกไซด์ ทุกสายพันธุ์ พบว่า antilisterial
กิจกรรมทดสอบโดยดีกระจายการทดสอบ tsawas
ครั้งแรกที่แสดงด้วยตัวบ่งชี้สิ่งมีชีวิตแล้วบ่อขนาด 8mm ของ
ได้ทํา จากนั้น100 มิลลิลิตร และถอนพิษจากโฆษณาโฆษณา
แต่ละ Lab ถูกเทลงไปในบ่อที่แตกต่างกัน ขนาดเส้นผ่านศูนย์กลางของการยับยั้ง
โซนแต่ละรอบก็ถูกวัดหลังจากบ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง
ร่วมกับ CO2 ร้อยละ 5 การทดลองทั้งหมดถูกกวาดออกไปใน
ซ้ำ ( RU í z et al . , 2012 ) .
2.9 . การวิเคราะห์ทางสถิติฤทธิ์ต้านจุลชีพของห้องปฏิบัติการ
ได้มาวิเคราะห์ทาง สถิติการใช้ซอฟต์แวร์ infostat ผ่านทางเดียวหมายถึง antilisterial ยับยั้ง
รัศมีเปรียบเทียบโดยการทดสอบในวิธีแพร่
อับบอนเฟอร์โรนีและวิธีทดสอบในการตรวจสอบแบบคู่ดี
ความแตกต่างระหว่างสายพันธุ์ที่แตกต่างกัน ( P 0.05 ) ดี
การแปล กรุณารอสักครู่..
ภาษาอื่น ๆ
การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.
- Seksit kantaman
- fair enough
- Ok but I warn you, it's a tired photo bu
- นักเรียนเรียนดี
- Spring
- Düşünmüyorum.
- Even in geometry, there is an opportunit
- ฉันมีไลน์สองอัน
- สนุกจนทำให้ลืมหน้าที่ของตัวเองไป
- Tốt giấc mơ
- These analytical features combined
- นครศรีธรรมราชเป็นศูนย์รวมแหล่งธรรมชาติที
- บาย
- ฉันอยู่ตรงนี้
- หลังจากลูกอายุ2ปี เราค่อยจัดงานแต่งงาน
- COMMON DERIVATION OF THE STRING ENERGY
- I can't sleep Because I like to sleep la
- Additional column use following data map
- ยิ้มน่ารัก
- จนกว่า
- คุณจะมีความสุขโดยไม่มีฉัน
- What does that have to do with universit
- Beneficiary
- The mis-spliced GSK3β fails to down-regu
