1.5. Phosphatase activityThe phosph

1.5. Phosphatase activity

The phosphatase activity of cultured biofilms was estimated mainly using a modified procedure by Turner et al. (2001) and Ellwood et al. (2012). The determination used para-nitrophenyl phosphate (pNPP) as an analogue substrate. Biofilm samples from each treatment were scraped from the slides, placed into 50-mL tubes containing 25.8 mL of buffered medium, thoroughly mixed, then equally divided into 6 aliquots in 10-mL glass tubes. The six small (10-mL) tubes were then placed in a shaking incubator at 25°C for 20 min. The assay was then initiated by adding 0.18 mL pNPP (final concentration 250 μmol/L) into four tubes, and the same amounts of ultrapure water for the other two tubes as control. Next, all samples were incubated at 25°C for 3 hr, then 0.25 mL of 0.5 mol/L NaOH was added to terminate the assay. The absorbance of p-nitrophenol was measured spectrophotometrically at 405 nm. The values of the blank (substrate and buffer only) and control tubes were subtracted from the final measured value.

For dry weight (DW) analysis, the scraped biofilm samples were first centrifuged at 10,000 r/min for 10 min, and then the pellets were rinsed with distilled water, dried at 105°C for 24 hr, and finally weighed.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

1.5 กิจกรรมฟอสฟากิจกรรมฟอสฟาของไบโอฟิล์มที่ล้างได้ประมาณส่วนใหญ่ใช้กระบวนการแก้ไข โดย Turner et al. (2001) และ Ellwood et al. (2012) การกำหนดใช้ para nitrophenyl ฟอสเฟต (pNPP) เป็นพื้นผิวที่เป็นอนาล็อก ฟิล์มตัวอย่างจากแต่ละการรักษาถูกขูดจากภาพนิ่ง วางลงในหลอด 50 มิลลิลิตรที่ประกอบด้วย 25.8 mL ของบัฟเฟอร์กลาง แบบ แล้วเท่า ๆ กัน แบ่งเป็น 6 aliquots ในหลอด 10 mL หลอด (10 mL) เล็กหกถูกแล้ววางในตู้อบสั่นที่ 25° C 20 นาที จากนั้นเริ่มการทดสอบ โดยการเพิ่ม pNPP 0.18 mL (ความเข้มข้นสุดท้าย 250 ไมโครโมล/ลิตร) ลงในหลอดที่ 4 และจำนวนน้ำบริสุทธิ์พิเศษสำหรับอื่น ๆ สองหลอดเดียวกันเป็นตัวควบคุม ถัดไป ตัวอย่างทั้งหมดได้รับการกกที่ 25° C 3 ชม. แล้ว 0.25 mL 0.5 mol/l NaOH ถูกยกเลิกการทดสอบ ค่าของ p-nitrophenol โดยวัด spectrophotometrically ที่ 405 nm ค่าของว่าง (พื้นผิวและบัฟเฟอร์เท่านั้น) และการควบคุมหลอดถูกหักออกจากค่าที่วัดสุดท้ายสำหรับวิเคราะห์น้ำหนักแห้ง (DW) ตัวอย่างฟิล์มที่ขูดได้จากครั้งแรกที่ 10,000 r/นาที 10 นาที แล้ว เม็ดถูกล้าง ด้วยน้ำกลั่น อบแห้งที่ 105° C 24 ชั่วโมง และน้ำหนักสุดท้าย

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

1.5 ใบกิจกรรมการเปลี่ยนแปลงกิจกรรมของไบโอฟิล์มเลี้ยงประมาณส่วนใหญ่ที่ใช้แก้ไขขั้นตอนโดยเทอร์เนอร์ et al . ( 2001 ) และ Ellwood et al . ( 2012 ) การใช้พารา nitrophenyl ฟอสเฟต ( pnpp ) เป็นแบบที่ทนทาน ฟิล์มตัวอย่างจากการรักษาแต่ละถูกขูดจากภาพนิ่ง ใส่เข้าไปในหลอดบรรจุ 50 มล. 25.8 มิลลิลิตร 2 ปานกลาง ผสมให้ทั่ว จากนั้นก็แบ่งออกเป็น 6 เฉยๆ 10 มล แก้ว หลอด หกเล็ก ( 10 ml ) หลอดถูกวางไว้แล้วในตู้อบที่อุณหภูมิ 25 ° C เขย่าเป็นเวลา 20 นาที ( ก็เริ่มต้น โดยการเพิ่ม pnpp 0.3 ml ( สุดท้ายความเข้มข้น 250 μ mol / L ) เป็น 4 หลอด และ เดียวกัน ปริมาณของน้ำที่บริสุทธิ์มากอีกสองหลอดควบคุม หน้าตัวอย่างที่อุณหภูมิ 25 ° C เป็นเวลา 3 ชั่วโมงจากนั้น 0.25 ml 0.5 โมลต่อลิตร NaOH เป็นยุติการทดสอบ มีการดูดกลืนแสงของ p-nitrophenol วัดนี้ที่ 405 nm . ค่าว่าง ( ( บัฟเฟอร์ ) และหลอดควบคุมถูกหักออกจากค่าวัดสุดท้าย .น้ำหนักแห้ง ( แห้ง ) โดยขูดฟิล์มจำนวนแรกที่ระดับ 10 , 000 R / นาทีเป็นเวลา 10 นาที จากนั้นก็ล้างด้วยน้ำกลั่นอัดเม็ดแห้งที่ 105 องศา เป็นเวลา 24 ชั่วโมง แล้วชั่งน้ำหนัก