Fish protein hydrolysates preparati

Fish protein hydrolysates preparation and analysis
Fish proteins were purified from fresh filleting by-products or headed and
gutted by-catches using the pH-shift extraction method [26], based on the
solubility of myofibrillar and sarcoplasmic proteins at extreme acid and alkaline
pH. Fish muscle was minced, prewashed with water and centrifuged (3000
g,
10 min). The resulting pellet was dissolved in water (1:6, w:v) and pH was
adjusted with NaOH 1 M at 10.8, to solubilize myofibrillar and sarcoplasmic
proteins. Proteins were then efficiently separated from lipids, membranes, skin
and bones by centrifugation (3000
g, 10 min). Two phases were obtained: a
solid phase containing membranes, skin and bones (pellet) and a soluble phase
containing solubilized proteins. The soluble phase was carefully collected and
pH was adjusted to 5.6 with HCl 1 M, to precipitate proteins, which were
collected by centrifugation (3000
g, 10 min). The pellet was dissolved in two
parts water at pH 7.5 and hydrolyzed at 55–57 8C for 106 min with Protamex
98 g/1000 kg and Alcalase 20 mL/1000 kg (Novo Nordisk). The enzymes were
inactivated by heating the resulting suspension to 90 8C for 10 min. The
suspension was centrifuged (3000
g, 10 min) to pellet inactivated proteases
and non-hydrolyzed fish proteins. The supernatant, containing soluble peptides,
was collected and freeze dried.
Peptide, lipid and sodium chloride content of FPH were analyzed by the
certificated laboratory IFL, 101-Reykjavik, Iceland, following the Kjeldahl
(ISO 5983), Volhard (AOAC 937-09) and Soxhlet methods (AOCS Official
Method), respectively. Molecular weight distributions of FPH peptides were
determined using SEC in FPLC mode on a Superdex Peptide HR 10/30 column
(Pharmacia, fractionation range: 7000–100 Da) with a Waters 600 automated
gradient controller pump and a Waters 996 DAD. The mobile phase (isocratic)
consisted of MilliQ water-TFA 0.1% and acetonitrile (70:30) at a flow rate of
0.5 mL min1. Hydrolysates were dissolved in mobile phase to 5 g L1 and
sterile filtered. Sample size was 40 mL (200 mg of hydrolysate) and peptides
were detected at 220 nm. Millenium software was used to collect, plot and
process the chromatographic data. Standard peptides (Sigma, France) were used
to calibrate the column.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การเตรียมปลาโปรตีน hydrolysates และการวิเคราะห์บริสุทธิ์จากสินค้าพลอย filleting สด หรือหัวโปรตีนของปลา และgutted โดยใช้ค่า pH กะแยกวิธีการ [26], ตามด้วยการจับละลายของโปรตีน myofibrillar และ sarcoplasmic ที่มากกรด และด่างpH กล้ามเนื้อปลาถูกสับ prewashed น้ำและ centrifuged (3000 g10 นาที) เม็ดได้ที่ละลายในน้ำ (1:6, w:v) และมีค่า pHปรับ ด้วย NaOH 1 M ที่ 10.8, solubilize myofibrillar และ sarcoplasmicโปรตีน โปรตีนได้อย่างมีประสิทธิภาพแยกออกแล้วจากโครงการ ผิวหนัง เยื่อหุ้มและกระดูก โดย centrifugation (3000 g, 10 นาที) ระยะที่สองได้รับ: การระยะที่ประกอบด้วยเยื่อหุ้ม ผิวหนัง และกระดูก (เม็ด) และระยะที่ละลายน้ำแข็งประกอบด้วยโปรตีน solubilized ขั้นตอนการละลายน้ำได้ถูกรวบรวมอย่างระมัดระวัง และถูกปรับ pH 5.6 กับ HCl 1 M, precipitate โปรตีน ซึ่งรวบรวม โดย centrifugation (3000 g, 10 นาที) เม็ดถูกละลายในสองส่วนน้ำที่ pH 7.5 และ hydrolyzed 55 – 57 8 C สำหรับ 106 นาทีกับ Protamex98 g/1000 กก.และ Alcalase 20 mL/1000 กก. (Novo Nordisk) เอนไซม์ได้ยกเลิก โดยการระงับรายการ 8C 90 สำหรับ 10 นาทีความร้อนระบบกันสะเทือนถูก centrifuged (3000 g, 10 นาที) ให้เม็ด proteases ยกเลิกและโปรตีนปลาไม่ใช่ hydrolyzed Supernatant ประกอบด้วยเปปไทด์ละลายถูกรวบรวมไว้ และแช่แข็งแห้งเพปไทด์ ไขมัน และโซเดียมคลอไรด์เนื้อหาของ FPH ถูกวิเคราะห์โดยการผู้ช่ายเป็นจริงปฏิบัติ IFL, 101-เรคยาวิก ไอซ์แลนด์ Kjeldahl ต่อไปนี้(ISO 5983), Volhard (AOAC 937-09) และ Soxhlet (AOCS ทางวิธีวิธี), ตามลำดับ มีการกระจายน้ำหนักโมเลกุลของเปปไทด์ FPHกำหนดใช้ SEC ในโหมด FPLC ในคอลัมน์ HR เปป Superdex 10/30(Pharmacia ช่วงแยกส่วน: ดา 7000 – 100) กับ 600 น้ำอัตโนมัติปั๊มควบคุมไล่โทนสีและแบบน้ำ 996 พ่อ เฟสเคลื่อนที่ (isocratic คิด)ประกอบด้วย MilliQ TFA น้ำ 0.1% และ acetonitrile (70:30) ที่อัตราการไหลของมล. 0.5 นาที 1 Hydrolysates ถูกละลายในระยะเคลื่อนไป 5 g L 1 และกรองฆ่าเชื้อ ขนาดตัวอย่าง 40 mL (200 มก.ต่อด้วย) และเปปไทด์พบที่ 220 nm มิลเลนเนียมซอฟต์แวร์ใช้ในการรวบรวม การลงจุด และประมวลผลข้อมูล chromatographic ใช้มาตรฐานเปปไทด์ (ซิก ฝรั่งเศส)การปรับเทียบคอลัมน์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

โปรตีนไฮโดรไลเซปลาการเตรียมการและการวิเคราะห์
โปรตีนปลาถูกบริสุทธิ์จากเนื้อสดโดยผลิตภัณฑ์หรือมุ่งหน้าไปและ
เสียใจมากโดยจับโดยใช้ค่า pH เปลี่ยนแปลงวิธีการสกัด [26] ขึ้นอยู่กับ
การละลายของโปรตีนกล้ามเนื้อและ sarcoplasmic ที่รุนแรงและกรดด่าง
พีเอช กล้ามเนื้อปลาสับ prewashed ด้วยน้ำและปั่น (3000? กรัม
10 นาที) ส่งผลให้เม็ดถูกละลายในน้ำ (1: 6 w: V) และพีเอชได้รับการ
ปรับปรุงด้วย NaOH M 1 ที่ 10.8 เพื่อละลายกล้ามเนื้อและ sarcoplasmic
โปรตีน โปรตีนที่ถูกแยกออกจากกันได้อย่างมีประสิทธิภาพแล้วจากไขมันในเยื่อผิวหนัง
และกระดูกโดยการหมุนเหวี่ยง (3000? กรัม 10 นาที) สองขั้นตอนที่ได้รับ:
ของแข็งที่มีเยื่อผิวหนังและกระดูก (เม็ด) และขั้นตอนการละลายน้ำ
ที่มีส่วนผสมของโปรตีนที่ละลาย ขั้นตอนที่ละลายน้ำได้ถูกเก็บรวบรวมอย่างระมัดระวังและ
มีการปรับค่า pH 5.6 ที่มี HCl 1 M เพื่อตกตะกอนโปรตีนซึ่งเป็น
ที่เก็บรวบรวมโดยการหมุนเหวี่ยง (3000? กรัม 10 นาที) เม็ดก็เลือนหายไปในสอง
ส่วนน้ำที่ pH 7.5 และไฮโดรไลซ์ที่ 55-57 8C 106 นาที Protamex
98 กรัม / 1,000 กก. และ 20 มลเอนไซม์อัลคา / 1,000 กิโลกรัม (Novo Nordisk) เอนไซม์ถูก
ยกเลิกด้วยความร้อนส่งผลให้ระงับ 90 8C เป็นเวลา 10 นาที
ถูกระงับการหมุนเหวี่ยง (3000? กรัม 10 นาที) เม็ดยกเลิกโปรตีเอส
และโปรตีนปลาไฮโดรไลซ์ที่ไม่ใช่ สารละลายที่มีเปปไทด์ที่ละลายน้ำได้
ถูกเก็บรวบรวมและแช่แข็งแห้ง.
เปปไทด์, ไขมันและโซเดียมคลอไรด์ของ FPH วิเคราะห์
ในห้องปฏิบัติการ IFL หนังสือรับรอง 101 เรคยาวิก, ไอซ์แลนด์, ต่อไปนี้ Kjeldahl
(ISO 5983) Volhard (AOAC 937-09 ) และวิธีการวิธีการสกัดแบบ (อย่างเป็นทางการ AOCS
วิธี) ตามลำดับ การกระจายน้ำหนักโมเลกุลของเปปไทด์ FPH ถูก
กำหนดโดยใช้คณะกรรมการ ก.ล.ต. ในโหมด FPLC ในการบริหารทรัพยากรบุคคลเปปไทด์ Superdex 10/30 คอลัมน์
(Pharmacia ช่วงแยก: 7000-100 ดา) กับน้ำ 600 อัตโนมัติ
ปั๊มควบคุมการไล่ระดับสีและน้ำ 996 DAD เฟสเคลื่อนที่ (isocratic)
ประกอบด้วย MilliQ น้ำ TFA 0.1% และ acetonitrile (70:30) ในอัตราการไหลของ
0.5 มิลลิลิตรนาที 1 ไฮโดรไลเซถูกกลืนหายไปในเฟสเคลื่อนที่ 5 กรัม L 1 และ
ผ่านการฆ่าเชื้อกรอง ขนาดของกลุ่มตัวอย่าง 40 มิลลิลิตร (200 มิลลิกรัมของไฮโดรไล) และเปปไทด์
ที่ถูกตรวจพบที่ 220 นาโนเมตร มิลเลนเนียมซอฟแวร์ที่ใช้ในการเก็บรวบรวมพล็อตและ
การประมวลผลข้อมูลที่โครมา เปปไทด์มาตรฐาน (Sigma, ฝรั่งเศส) ถูกนำมาใช้
ในการสอบเทียบคอลัมน์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การเตรียมโปรตีนของปลาและปลาเป็นโปรตีนบริสุทธิ์จากการวิเคราะห์
กาก
หรือหัวสด filleting และ gutted โดยจับโดยใช้ pH เปลี่ยนวิธีสกัด [ 26 ] ขึ้นอยู่กับ
การละลายลดลง และโปรตีน กรดและด่าง
sarcoplasmic ที่รุนแรงเมื่อกล้ามเนื้อปลาถูกสับ prewashed ด้วยน้ำและไฟฟ้า ( 3000
กรัม
10 นาที )ส่งผลให้เม็ดละลายในน้ำ ( 6 w : V ) และ pH
ปรับด้วย NaOH 1 M ที่ 10.8 , solubilize ลดลง และโปรตีน sarcoplasmic

โปรตีนจึงมีประสิทธิภาพที่แยกออกจากไขมัน เยื่อ ผิวหนัง และกระดูกโดยการเหวี่ยงแยก (
3
กรัมต่อ 10 นาที ) สองขั้นตอนที่ได้รับ :
โซลิดเฟสที่มีเยื่อ ผิวหนัง และกระดูก ( เม็ด ) และ
เฟสที่ละลายได้ที่สร้างโปรตีน ขั้นตอนละลายคือการเก็บรวบรวมอย่างระมัดระวังและ
pH ปรับ 5.6 กับ HCl 1 M , ตกตะกอนโปรตีน ซึ่งรวบรวมโดย 3
( 3000
กรัมต่อ 10 นาที ) เม็ดละลายในน้ำ 2
ส่วนที่ pH 7.5 และย่อยที่ 55 - 57 8C สำหรับ 106 นาที protamex
98 กรัม / 1 , 000 กก. และประสบการณ์ 20 ml / 1 , 000 กก. ( Novo Nordisk ) เอนไซม์คือ
ซึ่งจากผลระงับความร้อน 90 8C 10 นาที
ถูกระงับไฟฟ้า ( 3000
กรัมต่อ 10 นาที ) ซึ่งทางเม็ด
และไม่ใช่โปรตีนไฮโดรไลซ์ฟิช ส่วนนำ ประกอบด้วยปริมาณเปป รวบรวม และตรึงแห้ง
.
เปปไทด์ของโปรตีนไขมันและโซเดียม คลอไรด์ เนื้อหา วิเคราะห์โดย
certificated IFL ปฏิบัติการ 101 , เรคยาวิก , ไอซ์แลนด์ ,ต่อไปนี้ 0
( ISO 5983 ) volhard ( ไม่ 937-09 ) และวิธีการ ( วิธีการ Soxhlet อย่างเป็นทางการ
aocs ) ตามลำดับ การกระจายตัวของโปรตีนเปปไทด์ คือ โมเลกุลที่ใช้วินาทีในโหมด fplc
มุ่งมั่นใน superdex เปปไทด์ HR 10 / 30 คอลัมน์
( ฟาร์มาเซีย ( 7000 ) , ช่วง 100 ดา ) กับน้ำ 600 อัตโนมัติ
ลาดควบคุมปั๊มและน้ำว่าพ่อ เฟสเคลื่อนที่ ( Isocratic )
จำนวน milliq น้ำระดับ 0.1% และไน ( 70 : 30 ) ที่อัตราการไหล
0.5 มิลลิลิตรต่อนาที  1 ของถูกละลายในเฟสเคลื่อนที่ 5 g l  1
ปลอดเชื้อกรอง จำนวน 40 มล. ( ขนาด 200 มิลลิกรัม ตามลำดับ ) และเปปไทด์
ถูกตรวจพบที่ 220 นาโนเมตร ซอฟต์แวร์ที่ใช้เก็บสหัสวรรษ , พล็อตและ
ประมวลผลข้อมูลทางโครมาโทกราฟี สารมาตรฐาน ( Sigma , ฝรั่งเศส ) ใช้
ปรับแต่งคอลัมน์