Transgene integration complexity in

Transgene integration complexity in the recipient genome can be an important determinant of transgene expression and field performance in transgenic crops. We provide the first direct comparison of Agrobacterium-mediated transformation (AMT) and particle bombardment using whole plasmid (WP) and excised minimal cassettes (MC), for transformation efficiency, transgene integration complexity and transgene expression in plants. To enable direct comparison, a selectable marker and a luciferase reporter gene were linked in identical configurations in plasmids suitable for AMT or direct gene transfer into sugarcane. Transformation efficiencies were similar between WP and MC when equal molar DNA quantities were delivered. When the MC concentration was reduced from 66 to 6.6 ng per shot, transformation efficiency dropped fourfold, to a level equivalent with AMT in amenable genotype Q117. The highest proportion of transformants combining low copy number (estimated below two integrated copies by qPCR) with expression of the non-selected reporter gene was obtained using AMT (55 %) or MC at low DNA concentration (30 %). In sugarcane, both of these methods yielded high-expressing, single-copy transgenic plant lines at a workable efficiency for practical plant improvement; but AMT is currently limited to a few amenable genotypes. These methods are best coupled with rapid early screens for desired molecular characteristics of transformants, e.g. PCR screens for low copy number and/or transcription of the gene of practical interest.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ซับซ้อนรวม Transgene ในกลุ่มผู้รับสามารถดีเทอร์มิแนนต์การสำคัญ transgene และฟิลด์ประสิทธิภาพในพืชถั่วเหลือง เรามีการเปรียบเทียบโดยตรงแรกแปลง mediated อโกรแบคทีเรียม (AMT) และการระดมยิงอนุภาคใช้ plasmid ทั้ง (WP) และ excised ฝ้าน้อย (MC), ประสิทธิภาพการแปลง transgene รวมซับซ้อน และ transgene นิพจน์ในพืช การเปิดใช้งานการเปรียบเทียบโดยตรง เครื่องหมายเลือกและยีนโปรแกรมรายงาน luciferase เป็นการเชื่อมโยงในโครงแบบที่เหมือนกันใน plasmids เหมาะสำหรับ AMT หรือถ่ายโอนยีนโดยตรงเป็นอ้อย ประสิทธิภาพการแปลงคล้ายกันระหว่าง WP และ MC เมื่อปริมาณดีเอ็นเอสบเท่าถูกส่ง เมื่อความเข้มข้นของ MC ถูกลดจาก 66 6.6 ng ต่อประสิทธิภาพการยิง fourfold หลุดระดับเทียบเท่ากับจำนวนในลักษณะทางพันธุกรรม amenable Q117 สัดส่วนสูงสุดของ transformants รวมจำนวนสำเนาที่ต่ำ (ประมาณด้านล่างรวมสำเนา โดย qPCR) กับของยีนไม่ได้เลือกโปรแกรมรายงานกล่าวใช้ AMT (55%) หรือ MC ที่ความเข้มข้นดีเอ็นเอต่ำ (30%) อ้อย ทั้งสองวิธีให้ผลพืชถั่วเหลือง กำลังสูง เดี่ยวคัดลอกบรรทัดที่มีประสิทธิภาพสามารถทำงานได้ปรับปรุงโรงงานปฏิบัติ แต่จำนวนจำกัดในขณะนี้การศึกษาจีโนไทป์ amenable กี่ วิธีการเหล่านี้เป็นส่วนควบคู่กับหน้าจอเริ่มต้นอย่างรวดเร็วสำหรับระบุลักษณะโมเลกุลของ transformants หน้าจอเช่น PCR สำหรับหมายเลขสำเนาต่ำและ/หรือ transcription ของยีนน่าสนใจจริง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

บูรณาการความซับซ้อนของยีนในจีโนมที่ผู้รับสามารถปัจจัยสำคัญของการแสดงออกของยีนและประสิทธิภาพการทำงานภาคสนามในพืชดัดแปรพันธุกรรม เราให้บริการการเปรียบเทียบโดยตรงแรกของเชื้อ Agrobacterium (AMT) และการโจมตีโดยใช้อนุภาคพลาสมิดทั้ง (WP) และพอเทปน้อยที่สุด (MC) ให้มีประสิทธิภาพการเปลี่ยนแปลงซับซ้อนบูรณาการของยีนและการแสดงออกของยีนในพืช เมื่อต้องการเปิดใช้การเปรียบเทียบโดยตรงเครื่องหมายเลือกและยีนนักข่าว luciferase ถูกเชื่อมโยงในการกำหนดค่าเหมือนกันในพลาสมิดที่เหมาะสมสำหรับ AMT หรือการถ่ายโอนยีนตรงเข้าสู่อ้อย ประสิทธิภาพการเปลี่ยนแปลงมีความคล้ายคลึงกันระหว่าง WP และ MC เมื่อดีเอ็นเอกรามเท่ากับปริมาณที่ถูกส่งมา เมื่อความเข้มข้น MC ลดลง 66-6.6 ศึกษาต่อยิงที่มีประสิทธิภาพการเปลี่ยนแปลงลดลงเท่าที่จะเทียบเท่าในระดับเดียวกับ AMT ใน Q117 จีโนไทป์คล้อย สัดส่วนที่สูงที่สุดของ transformants รวมจำนวนสำเนาต่ำ (ประมาณด้านล่างสองชุดแบบบูรณาการโดย qPCR) ที่มีการแสดงออกของยีนนักข่าวที่ไ​​ม่ถูกเลือกได้โดยใช้ AMT (55%) หรือ MC ที่มีความเข้มข้นต่ำดีเอ็นเอ (30%) ในอ้อยทั้งวิธีการเหล่านี้ส่งผลให้ผู้สูงแสดงสำเนาเดียวเส้นพืชดัดแปรพันธุกรรมที่สามารถทำงานได้อย่างมีประสิทธิภาพในการปรับปรุงโรงงานปฏิบัติ; แต่ AMT ปัจจุบันถูก จำกัด ไว้ที่ไม่กี่สายพันธุ์คล้อย วิธีการเหล่านี้เป็นคู่ที่ดีที่สุดที่มีหน้าจอต้นอย่างรวดเร็วสำหรับลักษณะโมเลกุลที่ต้องการของ transformants เช่นหน้าจอ PCR สำหรับจำนวนสำเนาต่ำและ / หรือการถอดรหัสของยีนที่น่าสนใจ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ยีนในจีโนมมนุษย์การบูรณาการของผู้รับสามารถเป็นปัจจัยที่สำคัญในการแสดงออกของยีนในพืชดัดแปรพันธุกรรม และเขตการ . เรามีการเปรียบเทียบโดยตรงครั้งแรกของ Agrobacterium ) เปลี่ยนแปลง ( AMT ) และเครื่องยิงที่ใช้ทั้งพลาสมิด ( WP ) และตัดเทปน้อยที่สุด ( MC ) ประสิทธิภาพการแปลงความซับซ้อนของการบูรณาการและการแสดงออกยีนยีนในพืช ให้เปรียบเทียบโดยตรง เครื่องหมายที่เลือกและเอนไซม์ลูซิเฟอเรส นักข่าวจีนที่ถูกเชื่อมโยงในการตั้งค่าในพลาสมิดเหมือนกันเหมาะสำหรับ AMT หรือโดยตรงถ่ายโอนยีนเข้าสู่อ้อย การเปลี่ยนแปลงประสิทธิภาพใกล้เคียงกันระหว่าง WP และ MC เมื่อเท่ากับฟันกรามดีเอ็นเอปริมาณถูกส่งมาเมื่อพิธีกรความเข้มข้นลดลงจาก 66 ไป 6.6 นาโนต่อประสิทธิภาพการยิงลดลงจาตุรงค์ , ในระดับเทียบเท่ากับคู่ขาในซูฮกกับ q117 .สัดส่วนสูงสุดของ transformants รวมจำนวนสำเนา ( รวมประมาณด้านล่าง สองเล่ม qpcr ) กับการแสดงออกของยีนไม่เลือกนักข่าวได้รับการใช้ AMT ( 55% ) หรือพิธีกร ที่ความเข้มข้นของดีเอ็นเอต่ำ ( 30% ) ในอ้อยทั้งสองวิธีให้ผลสูงแสดงเดี่ยว , คัดลอกพันธุกรรมพืชเพื่อการปรับปรุงประสิทธิภาพสายที่สามารถใช้งานได้ประโยชน์ พืชแต่จำนวนจำกัดเพื่อขณะนี้ซูฮกพันธุ์น้อย วิธีเหล่านี้ที่ดีที่สุดควบคู่กับหน้าจอแรกอย่างรวดเร็วสำหรับโมเลกุลที่ต้องการคุณลักษณะของพลาสมิดดีเอ็นเอ เช่น หน้าจอจำนวนสำเนาและ / หรือการถอดรหัสของยีนที่สนใจปฏิบัติ