In our previous study, folate biofo

In our previous study, folate biofortification was achieved in wine using yeast bioengineering (Walkey et al., 2015). We confirmed the success of this application in the present study and herein, further explored the folate biosynthetic pathway in the wine yeast to determine if additional folate enhancement could be achieved. For a number of folate biosynthetic genes present in wine yeast, we reconstructed them by replacing the endogenous promoter with the highly active PGK1 promoter. This strategy resulted in significant increases in mRNA levels for each gene that was manipulated (Table 3). Overexpression of FOL2, which encodes the enzyme responsible for the initial biosynthetic step of the pteridine moiety of the folate molecule, produced a 2-fold increase in the folate level in white wine and 5-fold increase in the red wine,(Table 4) which was similar to our previous study (Walkey et al.,2015). However, overexpression of other folate biosynthesis genes,including ABZ1, ABZ2, DFR1, FOL1, FOL3, had no effect on the total folate level in wine. Increasing the overexpression of the ABZ1 did not result in appreciable increase in folate accumulation. Co-overexpression of these genes with FOL2 also brought no further improvement in boosting folate biosynthesis in wine(Table 4). These results confirm and extends our previous findings that FOL2 is the key gene to encode the rate-limiting step of folate biosynthesis in wine yeast.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ในการศึกษาก่อนหน้านี้ของเรา โฟ biofortification สำเร็จในไวน์ที่ใช้ยีสต์ bioengineering (Walkey et al., 2015) เรายืนยันความสำเร็จของโปรแกรมประยุกต์นี้ ในการศึกษาปัจจุบัน และ นี้ ต่อไปสำรวจทางเดิน biosynthetic ของโฟเลตในยีสต์ไวน์เพื่อกำหนดว่าถ้าได้รับโฟเลตเพิ่มเติมปรับปรุง จำนวนโฟ biosynthetic ยีนในเชื้อยีสต์ไวน์ เราเชิดได้ โดยแทนโปรโมเตอร์ endogenous โปรโมเตอร์ PGK1 สูงใช้งาน กลยุทธ์นี้ให้เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญที่ระดับ mRNA สำหรับแต่ละยีนที่จัดการ (ตาราง 3) Overexpression ของ FOL2 ซึ่งจแมปเอนไซม์ชอบขั้นตอน biosynthetic แรกของ moiety pteridine ของโมเลกุลโฟ ผลิตเพิ่ม 2-fold ในระดับโฟเลตในไวน์ขาวและเพิ่ม 5-fold,(Table 4) ไวน์แดงซึ่งคล้ายกับการศึกษาก่อนหน้านี้ของเรา (Walkey et al., 2015) อย่างไรก็ตาม overexpression ของยีนสังเคราะห์อื่น ๆ โฟ รวม ABZ1, ABZ2, DFR1, FOL1, FOL3 ได้ไม่มีผลต่อระดับรวมโฟในไวน์ เพิ่ม overexpression ของ ABZ1 ผลไม่เห็นเพิ่มโฟเลตสะสม Co-overexpression ของยีนเหล่านี้กับ FOL2 กุมารไม่มีปรับปรุงเพิ่มเติมในการส่งเสริมการสังเคราะห์โฟเลตในไวน์ (ตาราง 4) ผลลัพธ์เหล่านี้ยืนยัน และขยายผลการวิจัยของเราก่อนหน้านี้ว่า FOL2 ยีนคีย์การเข้ารหัสขั้นตอนการจำกัดอัตราการสังเคราะห์โฟเลตในยีสต์ไวน์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ในการศึกษาก่อนหน้านี้ของเราชีวภาพโฟเลตประสบความสำเร็จในไวน์โดยใช้ชีววิศวกรรมยีสต์ (Walkey et al., 2015) เราได้รับการยืนยันความสำเร็จของโปรแกรมนี้ในการศึกษาปัจจุบันและในที่นี้ต่อไปสำรวจเส้นทางชีวสังเคราะห์โฟเลตในยีสต์ไวน์เพื่อตรวจสอบว่าการเพิ่มประสิทธิภาพของโฟเลตที่เพิ่มขึ้นจะประสบความสำเร็จ สำหรับจำนวนของยีนสังเคราะห์โฟเลตอยู่ในยีสต์ไวน์ที่เราสร้างขึ้นใหม่ได้โดยการเปลี่ยนก่อการภายนอกกับผู้ก่อการ PGK1 ใช้งานสูง กลยุทธ์นี้มีผลในการเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในระดับ mRNA ของยีนแต่ละตัวที่ถูกจับ (ตารางที่ 3) แสดงออกของ FOL2 ซึ่งเข้ารหัสเอนไซม์ที่รับผิดชอบในการขั้นตอนชีวสังเคราะห์เริ่มต้นของครึ่ง pteridine ของโมเลกุลโฟเลตผลิตเพิ่มขึ้น 2 เท่าในระดับโฟเลตในไวน์ขาวและการเพิ่มขึ้น 5 เท่าในไวน์แดง (ตารางที่ 4) ซึ่งคล้ายกับการศึกษาก่อนหน้านี้ของเรา (Walkey et al., 2015) แต่แสดงออกของยีนสังเคราะห์โฟเลตอื่น ๆ รวมทั้ง ABZ1, ABZ2, DFR1, FOL1, FOL3, ไม่มีผลต่อระดับโฟเลตรวมในไวน์ การเพิ่มการแสดงออกของ ABZ1 ที่ไม่ได้ส่งผลให้เกิดการเพิ่มขึ้นเห็นได้ในการสะสมโฟเลต ร่วมแสดงออกของยีนเหล่านี้กับ FOL2 ยังนำไม่มีการปรับปรุงต่อไปในการส่งเสริมการสังเคราะห์โฟเลตในไวน์ (ตารางที่ 4) ผลลัพธ์เหล่านี้ยืนยันและขยายผลการวิจัยก่อนหน้านี้ที่ FOL2 เป็นยีนที่สำคัญในการเข้ารหัสขั้นตอนการ จำกัด อัตราการสังเคราะห์ของโฟเลตในยีสต์ไวน์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ในการศึกษาของเรา โฟเลต biofortification สําเร็จในไวน์โดยใช้ยีสต์ใช้ ( walkey et al . , 2015 ) เรายืนยันความสำเร็จของโปรแกรมนี้ในการศึกษาและในที่นี้ ต่อสํารวจโฟเลทร่วมเส้นทางในไวน์ยีสต์เสริมโฟเลตเพิ่มเติมเพื่อตรวจสอบว่าได้บรรลุแล้ว สำหรับจำนวนของโฟเลทร่วมยีนอยู่ในไวน์ยีสต์เราสร้างพวกเขาโดยการส่งเสริมโครงสร้างกับโปรโมเตอร์ pgk1 สูงใช้งาน กลยุทธ์นี้มีผลในการเพิ่มขึ้นอย่างมากในระดับของแต่ละยีนที่ควบคุม ( ตารางที่ 3 ) overexpression ของพิมพ์แบบ FOL2 ขนาดซึ่ง encodes เอนไซม์รับผิดชอบในขั้นตอนการเริ่มต้นของ pteridine กึ่งหนึ่งของโฟเลตและโมเลกุลผลิตถึงเพิ่มในระดับโฟเลตในไวน์ขาวและผู้อื่นเพิ่มขึ้นในไวน์แดง ( ตารางที่ 4 ) ซึ่งคล้ายคลึงกับการศึกษาก่อนหน้าของเรา ( walkey et al . , 2015 ) อย่างไรก็ตาม overexpression ของยีน ในประเภทอื่นๆ รวมทั้ง abz1 abz2 dfr1 fol1 , , , , fol3 ไม่มีผลกระทบต่อระดับโฟเลททั้งหมดในไวน์เพิ่ม overexpression ของ abz1 ไม่ได้ผลชดช้อย เพิ่มการสะสมโฟเลต . Co overexpression ของยีนเหล่านี้กับพิมพ์แบบ FOL2 ขนาดยังเอาไม่ต่อการปรับปรุงในการส่งเสริมระดับโฟเลตในไวน์ ( ตารางที่ 4 ) ผลลัพธ์เหล่านี้ยืนยันและขยายผลของเราก่อนหน้านี้ที่พิมพ์แบบ FOL2 ขนาดเป็นยีนคีย์เข้ารหัสอัตราการขั้นตอนของโฟเลตในไวน์ยีสต์