2.14. Flow cytometry for measuremen

2.14. Flow cytometry for measurement of cytoplasmic concentration of NO ([NO]c) and ROS in endothelial cells
The aortas were isolated, opened longitudinally and the endothelial cells were mechanically isolated from the vessels as previously described [24]. The analysis was performed using a flow cytometer Becton–Dickinson FACScan (San Jose, CA, USA) with an argon ion laser tuned to 488 nm at 15 mW output. Initially, the cells were analyzed in the absence of the fluorescent dyes (blank samples). The cells were then incubated for 20 min with 4,5-diaminofluorescein-2 diacetate (DAF-2/DA, 10 μM, a selective fluorescent dye for NO, #D2813, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA). Afterwards, acetylcholine (10 μM) was added to the cells loaded with DAF-2/DA. After the addition of acetylcholine, the samples were analyzed for 15 min in intervals of 1, 3, 5, 10 and 15 min. In another set of experiments the cells were incubated for 20 min with dihydroethidium (DHE, 2.5 μM, #D7008, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) for ROS measurement. Acquisition was set at 10,000 cells and the mean fluorescent intensity was measured in all samples by using CellQuest 1.2 software (Becton–Dickinson, Franklin Lakes, NJ, USA). Results are expressed as fluorescence intensity (FI).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.14 การเซลล์ไหลการวัดไม่ ([ไม่] c) เข้มข้น cytoplasmic และ ROS ในเซลล์บุผนังหลอดเลือดAortas ถูกแยก เปิด longitudinally และเซลล์บุผนังหลอดเลือดมีกลไกแยกจากเรืออธิบายว่า ก่อนหน้านี้ [24] ทำการวิเคราะห์ cytometer กระแส FACScan Becton – ดิกคินสัน (San Jose, CA, USA) ด้วยการเลเซอร์ไอออนอาร์กอนผ่านกล่อง 488 nm ที่ 15 mW ผลลัพธ์ เริ่มแรก เซลล์ถูกวิเคราะห์ในกรณีสีเรืองแสง (ว่างเปล่าตัวอย่าง) เซลล์ได้แล้ว incubated สำหรับ 20 นาทีกับ diacetate 4,5-diaminofluorescein-2 (2/เยอรมัน ดา 10 μM สีเรืองแสงใช้สำหรับไม่มี #D2813 ซิก Aldrich, St. Louis, MO สหรัฐอเมริกา) ภายหลัง acetylcholine (10 μM) ถูกเพิ่มไปยังเซลล์ที่มีเยอรมัน-2/DA. หลังจากการเพิ่มของ acetylcholine ตัวอย่างถูกจัดวิเคราะห์สำหรับ 15 นาทีในช่วง 1, 3, 5, 10 และ 15 นาที ในอีกการทดลอง เซลล์ถูก incubated สำหรับ 20 นาทีกับ dihydroethidium (DHE, 2.5 μM, #D7008 ซิก Aldrich, St. Louis, MO สหรัฐอเมริกา) สำหรับประเมิน ROS ซื้อได้ตั้ง 10000 เซลล์ และความเข้มเฉลี่ยเรืองแสงถูกวัดในตัวอย่างทั้งหมด โดยใช้ซอฟต์แวร์ CellQuest 1.2 (Becton – สัน แฟรงคลินทะเลสาบ NJ สหรัฐอเมริกา) ผลลัพธ์จะแสดงในรูปความเข้ม fluorescence (ไร้สาย)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.14 ภูมิคุ้มกันสำหรับการวัดการไหลของความเข้มข้นของนิวเคลียสของ NO ([ไม่] ค) และ ROS ในเซลล์บุผนังหลอดเลือด
aortas ถูกแยกเปิดยาวและเซลล์บุผนังหลอดเลือดที่แยกได้โดยอัตโนมัติจากเรือตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [24] การวิเคราะห์ถูกดำเนินการโดยใช้การไหล cytometer Becton Dickinson-FACScan (San Jose, CA, USA) กับไอออนอาร์กอนเลเซอร์ปรับไปที่ 488 นาโนเมตรที่ 15 mW เอาท์พุท ในขั้นต้นเซลล์ถูกนำมาวิเคราะห์ในกรณีที่ไม่มีสีเรืองแสงที่ (ตัวอย่างที่ว่างเปล่า) เซลล์ที่ถูกบ่มแล้วเป็นเวลา 20 นาทีกับ 4,5-diaminofluorescein-2 diacetate (DAF-2 / DA 10 ไมครอน, สีเรืองแสงสำหรับเลือก NO # D2813, Sigma-Aldrich เซนต์หลุยส์ MO, USA) หลังจากนั้น acetylcholine (10 ไมครอน) ถูกบันทึกอยู่ในเซลล์เต็มไปด้วย DAF-2 / DA หลังจากที่นอกเหนือจาก acetylcholine ตัวอย่างมาวิเคราะห์เป็นเวลา 15 นาทีในช่วงเวลา 1, 3, 5, 10 และ 15 นาที ในชุดการทดลองอื่นเซลล์ถูกบ่มเป็นเวลา 20 นาทีกับ dihydroethidium (DHE 2.5 ไมครอน # D7008, Sigma-Aldrich, เซนต์หลุยส์สหรัฐอเมริกา) สำหรับการตรวจวัด ROS การได้มาซึ่งตั้งอยู่ที่ 10,000 เซลล์และเรืองแสงความเข้มหมายถึงวัดในตัวอย่างทั้งหมดโดยใช้ซอฟแวร์ CellQuest 1.2 (Becton-ดิกคินสัน, แฟรงคลินทะเลสาบ, NJ, สหรัฐอเมริกา) ผลการค้นหาจะแสดงเป็นความเข้มแสง (FI)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.14 . ( สำหรับการวัดความเข้มข้นของการไหลนี้ครับ [ ไม่ ] c ) และผลตอบแทนในเยื่อบุเซลล์
aortas แยกเปิดตามยาวและเซลล์เยื่อบุเป็นกลไกที่แยกได้จากเรือตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [ 24 ] ผลจากการวิเคราะห์การไหลสำหรับ facscan เบคตอนใช้โมโนดิกคินสัน ( ซานโฮเซ่ แคลิฟอร์เนียสหรัฐอเมริกา ) กับไอออนอาร์กอนเลเซอร์ปรับ nm 488 ที่ผลผลิต 15 MW ตอนแรกเซลล์มาวิเคราะห์ในการขาดงานของสีย้อมเรืองแสง ( ตัวอย่างว่างเปล่า ) เซลล์แล้วบ่มนาน 20 นาที กับ 4,5-diaminofluorescein-2 ได ซิเตท ( daf-2 / ดา 10 μ M สีเรืองแสง เลือกไม่ # d2813 ซิกม่า Aldrich , St . Louis , MO , USA ) หลังจากนั้นอะซิทิลโคลีน ( 10 μ M ) คือการเพิ่มเซลล์โหลด daf-2 / DA หลังจากเติมสารอะเซติลโคลีน , วิเคราะห์ 15 นาทีในช่วงเวลา 1 , 3 , 5 , 10 และ 15 นาที อีกชุดของการทดลองเซลล์ถูกบ่มเป็นเวลา 20 นาที dihydroethidium ( และ 2.5 μ M , # d7008 ซิกม่า Aldrich , St . Louis , MO , USA ) สำหรับการวัดรอส ซื้อไว้ที่ 10 ,000 เซลล์และหมายถึงเรืองแสงเข้มวัดตัวอย่าง โดยใช้ cellquest 1.2 ซอฟต์แวร์ ( เบคตอน–ดิกคินสัน Franklin Lakes , NJ , USA ) ผลลัพธ์ที่ได้จะแสดงเป็นเรืองแสงเข้ม
( FI )