2.4.2. Preparation and injection of

2.4.2. Preparation and injection of coffee extracts
The extraction protocol was based on the conditions previously
optimized by Rostagno et al. [24]. In short, 0.5 g of each coffee
sample were extracted with 15 ml of 50% methanol/water,
followed by 15 ml of 75% methanol/water, and finally with
15 ml of 100% methanol. Extraction was performed on a multifrequency
ultrasound bath [10,25,26], operating at 25 kHz for
20 min at 60 8C. After each extraction step, the sample is
centrifuged for 10 min at 10 8C and a velocity of 4000 rpm using
a universal centrifuge. The supernatant was collected and the solid
residue was subjected to the next extraction step. After the final
extraction, the supernatants were combined, and water was added
to obtain a final volume of 100 ml. 20 ml of the obtained extract
was filtered and injected into the HPLC apparatus. Analyses were
performed in triplicate.
2.4.3. HPLC gradient
A binary gradient elution (Table 1) was used. The mobile phase
was as follows: 1% phosphoric acid in water (solvent A) and 1%
phosphoric acid in acetonitrile (solvent B). The flow rate was
systematically controlled and set at 1 ml/min.
2.4.4. Analytical method validation
The limit of detection (LOD) was determined considering a
value three times the standard deviation of the background noise
obtained from blank samples (solvent; methanol), divided by the
slope of the calibration curve. The limit of quantification (LOQ) was
determined considering a value 10 times the standard deviation of
the background noise, obtained from noise samples divided by the
slope of the calibration curve. The limit of detection (LOD) ranged
from 0.75 to 14.79 mg/l, while the limit of quantification (LOQ)
ranged from 2.26 to 44.44 mg/l (Table 2a).
The recovery capacities of the method were assessed in
quadruplicate by spiking coffee extracts with three different
concentrations of pure standards (phenolic compounds and
caffeine) (0.5, 0.7 and 1.0 mg/100 g). The average recovery was
greater than 98% for all molecules (Table 2b).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4.2 การเตรียมและการฉีดสารสกัดจากกาแฟโพรโทคอลสกัดได้ขึ้นอยู่กับเงื่อนไขก่อนหน้านี้ปรับให้เหมาะสมโดย Rostagno et al. [24] ในระยะสั้น g 0.5 ของกาแฟแต่ละตัวอย่างที่สกัด ด้วย 15 ml ของเมทานอล/น้ำ 50%ตาม ด้วย 15 ml 75% เมทานอล/น้ำ และสุดท้ายด้วยml 15 ของเมทานอล 100% ทำการแยกตามที่ multifrequencyห้องอัลตร้าซาวด์ [10,25,26], ปฏิบัติที่ 25 kHz สำหรับ20 นาทีที่ 60 8C. หลังจากแต่ละขั้นตอนสกัด ตัวอย่างเป็นcentrifuged ที่ 10 8C 10 นาทีและความเร็ว 4000 rpm ใช้เครื่องหมุนเหวี่ยงสากล Supernatant ถูกรวบรวม และของแข็งสารตกค้างอยู่ภายใต้การแยกขั้นตอนถัดไป หลังสุดท้ายสกัด supernatants ถูกรวมเข้าด้วยกัน และเพิ่มน้ำเพื่อให้ได้ ปริมาตรสุดท้ายของ 100 ml. 20 ml ของที่ได้รับสารสกัดจากกรอง และฉีดเข้าเครื่อง HPLC วิเคราะห์ได้ดำเนินการใน triplicate2.4.3 การ HPLC ไล่ระดับสีใช้ elution ไล่ระดับแบบไบนารี (ตาราง 1) ระยะเคลื่อนมีดังนี้: 1% กรดฟอสฟอริกในน้ำ (ตัวทำละลาย A) และ 1%กรดฟอสฟอริกใน acetonitrile (ตัวทำละลาย B) อัตราการไหลได้ระบบควบคุม และตั้งค่าที่ 1 ml/min2.4.4 การวิเคราะห์วิธีการตรวจสอบกำหนดขีดจำกัดของการตรวจสอบ (ลอด) พิจารณาการค่า 3 ครั้งส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานของพื้นเสียงรับจากว่างเปล่าตัวอย่าง (ตัวทำละลาย เมทานอล), โดยความชันของเส้นโค้งการปรับเทียบ จำนวนนับ (LOQ) ได้กำหนดพิจารณาค่า 10 ครั้งส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานของเสียงพื้นหลัง ได้จากตัวอย่างเสียงหารความชันของเส้นโค้งการปรับเทียบ ขีดจำกัดของการตรวจสอบ (ลอด) อยู่ในช่วงจาก 0.75 ถึง 14.79 mg/l ในขณะที่จำนวนนับ (LOQ)อยู่ในช่วงจาก 2.26 การ 44.44 mg/l (ตาราง 2a)กำลังกู้คืนของวิธีการถูกประเมินในquadruplicate โดย spiking สารสกัดจากกาแฟกับ 3 แตกต่างกันความเข้มข้นมาตรฐานบริสุทธิ์ (ม่อฮ่อม และคาเฟอีน) (0.5, 0.7 และ 1.0 มิลลิกรัม/100 กรัม) ถ.เฉลี่ยค่ามากกว่า 98% สำหรับโมเลกุลทั้งหมด (ตารางที่ 2b)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4.2 การเตรียมและการฉีดสารสกัดจากกาแฟโพรโทคอสกัดก็ขึ้นอยู่กับเงื่อนไขที่ก่อนหน้านี้เพิ่มประสิทธิภาพโดยRostagno et al, [24] ในระยะสั้น 0.5 กรัมของกาแฟแต่ละตัวอย่างถูกสกัดด้วย15 มลเมทานอล 50% / น้ำตามด้วย15 มลเมทานอล 75% / น้ำและสุดท้ายกับ15 มลเมทานอล 100% การสกัดที่ได้ดำเนินการใน multifrequency อาบน้ำอัลตราซาวนด์ [10,25,26] การดำเนินงาน ณ วันที่ 25 เฮิร์ทซ์สำหรับ20 นาทีที่ 60 8C หลังจากขั้นตอนการสกัดแต่ละตัวอย่างจะถูกปั่นเป็นเวลา 10 นาทีที่ 10 8C และความเร็วของ 4000 รอบต่อนาทีใช้หมุนเหวี่ยงสากล สารละลายที่ถูกเก็บรวบรวมและของแข็งที่เหลือก็จะถูกขั้นตอนการสกัดต่อไป หลังจากรอบสุดท้ายสกัด supernatants ถูกรวมและน้ำถูกเพิ่มเข้ามาจะได้รับเล่มสุดท้าย100 มล. 20 มล. ของสารสกัดที่ได้ถูกกรองและฉีดเข้าไปในเครื่องHPLC ได้ วิเคราะห์ได้ดำเนินการในเพิ่มขึ้นสามเท่า. 2.4.3 ลาด HPLC ชะลาดไบนารี (ตารางที่ 1) ถูกนำมาใช้ เฟสเคลื่อนที่ได้ดังนี้กรดฟอสฟอรัส 1% ในน้ำ (ตัวทำละลาย A) และ 1% กรดฟอสฟอรัสใน acetonitrile (ตัวทำละลาย B) อัตราการไหลได้รับการควบคุมอย่างเป็นระบบและตั้งวันที่ 1 มล. / นาที. 2.4.4 การตรวจสอบวิธีการวิเคราะห์ขีด จำกัด ของการตรวจสอบ (LOD) ถูกกำหนดพิจารณาค่าสามเท่าของส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานของเสียงพื้นหลังที่ได้รับจากกลุ่มตัวอย่างที่ว่างเปล่า(ตัวทำละลาย; เมทานอล) หารด้วยความลาดชันของเส้นโค้งการสอบเทียบ ขีด จำกัด ของปริมาณ (LOQ) ถูกกำหนดพิจารณาค่า10 ครั้งค่าเบี่ยงเบนมาตรฐานของเสียงพื้นหลังที่ได้รับจากตัวอย่างเสียงแบ่งตามความลาดชันของเส้นโค้งการสอบเทียบ ขีด จำกัด ของการตรวจสอบ (LOD) ตั้งแต่0.75-14.79 มิลลิกรัม / ลิตรในขณะที่ขีด จำกัด ของปริมาณนี้ (LOQ) ตั้งแต่ 2.26-44.44 mg / l (ตารางที่ 2a). ความจุการฟื้นตัวของวิธีการที่ถูกประเมินในquadruplicate กาแฟองศา สารสกัดที่มีความแตกต่างกันสามระดับความเข้มข้นของมาตรฐานบริสุทธิ์(ฟีนอลและสารคาเฟอีน) (0.5, 0.7 และ 1.0 มก. / 100 กรัม) การฟื้นตัวเฉลี่ยมากกว่า 98% โมเลกุลทั้งหมด (ตารางที่ 2b)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4.2 . การเตรียมการและการฉีดสารสกัดจากกาแฟ
ขั้นตอนการสกัดจะขึ้นอยู่กับเงื่อนไขที่เหมาะสม จากก่อนหน้านี้
rostagno et al . [ 24 ] ในระยะสั้น , 0.5 กรัม กาแฟแต่ละ
ตัวอย่างสกัดด้วยเมทานอล 50% 15 มิลลิลิตรของน้ำ
ตามด้วย 15 ml 75% เมทานอลต่อน้ำ และสุดท้ายกับ
15 ml 100 % เมทานอล การสกัดจะแสดงบน multifrequency
อัลตร้าซาวด์บาท [ 10,25,26 ]ปฏิบัติการที่ 25 kHz สำหรับ
20 นาทีที่ 60 8C หลังจากที่แต่ละขั้นตอนการสกัด กลุ่มตัวอย่าง เป็นระดับ 10 นาทีที่ 10
8C และความเร็วของ 4000 รอบต่อนาทีใช้
เครื่องสากล การรวบรวมและนำกากของแข็ง
ภายใต้ขั้นตอนการสกัดต่อไป หลังจากการสกัดสุดท้าย
, supernatants อยู่รวมกันและมีน้ำเพิ่ม
ขอรับเล่มสุดท้ายของ 100 ml20 มิลลิลิตร นำสารสกัด
ถูกกรองและฉีดเข้าไปใน HPLC อุปกรณ์ วิเคราะห์ข้อมูลใช้ทั้งสามใบ
.
2.4.3 . การใช้ HPLC : ลาดไบนารี ( ตารางที่ 1 ) พบว่า
เฟสเคลื่อนที่ดังนี้ 1 เปอร์เซ็นต์ กรดฟอสฟอริค ในน้ำ ( ตัวทำละลาย ) และ 1 %
กรดฟอสฟอริกใน Acetonitrile ( ตัวทำละลาย B ) อัตราการไหลเท่ากับ
มีระบบควบคุมและตั้งค่าที่ 1 มิลลิลิตร / นาที
2.4.4 .วิเคราะห์วิธีการตรวจสอบ
ขีด จำกัด ของการตรวจหา ( LOD ) คือกำหนดพิจารณา
มูลค่า 3 เท่าของส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานเสียงพื้นหลังได้จากตัวอย่าง
ว่าง ( ตัวทำละลาย ; เมทานอล ) หารด้วยค่า
ความชันของเส้นโค้ง ขีดจำกัดของปริมาณ ( loq ) คือ
กำหนดพิจารณามูลค่า 10 เท่าของส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานของ
เสียงพื้นหลังที่ได้จากเสียงตัวอย่างแบ่งโดย
ความชันของรูปโค้ง . ขีดจำกัดของการตรวจหา ( LOD ) ค่า
จาก 0.75 14.79 มิลลิกรัมต่อลิตร ในขณะที่ ขีดจำกัดของปริมาณ ( loq )
1 เพื่อ 44.44 2.26 mg / l ( ตารางที่ 2A ) .
การกู้คืนความสามารถของวิธีการประเมินใน
ประกอบด้วยสี่ส่วนโดย spiking กาแฟสกัด 3
มาตรฐานบริสุทธิ์ ( ความเข้มข้นต่าง ๆ สารประกอบฟีนอลิกและ
คาเฟอีน ) ( 0.5 , 0.7 และ 1.0 มิลลิกรัม / 100 กรัม ) การกู้คืนโดยเฉลี่ย
มากกว่า 98% ทุกโมเลกุล ( โต๊ะ 2B )