2.6. Analytical methodsAnalysis of

2.6. Analytical methods
Analysis of FAN, IP and total Kjeldahl nitrogen (TKN) was carried
out according to the protocols presented by Kachrimanidou et al.
(2013). Glycerol concentration was determined by high performance
liquid chromatography (HPLC, Waters 600E) equipped with
an Aminex HPX-87H (300mm×7.8mm, Bio Rad CA) column, coupled
to a differential refractometer (RI Waters 410) with operating
conditions reported by Kachrimanidou et al. (2013). Quantification
of PHB concentration was carried out by the method described
by Riis and Mai (1988) using a gas chromatographic analyzer
(Fisons 8060) equipped with a flame ionization detector (FID) and a
Chrompack column (60m×0.25mm, film thickness 0.25m, J&W
Scientific) with operating conditions reported by Kachrimanidou
et al. (2013).
The total dry mass (TDM) that was produced during fermentation,
was determined by drying the samples in an oven (50 ◦C) for
24 h and cooling down in a desiccator until a constant weight was
obtained. RCM was determined by subtracting the PHB concentration
obtained by GC from the TDM. Protease activity was quantified
by the formation of FAN by hydrolyzing 15 g L−1 casein at 55 ◦C
in 200mM phosphate buffer (pH value of 6). One unit of protease
activity (U) was defined as the protease required for the production
of 1g FAN in 1min.
The total phenolic content (TPC) was estimated by the
Folin–Ciocalteu colorimetric method according to the procedure
reported by Wojdyło et al. (2007) using CGA as standard phenolic
compound. The TPC was expressed as CGA equivalents (CGAE)
(mg/100 g of dry mass). Free radical-scavenging activity of the
sample extracts was evaluated with the modified DPPH• (1,1-
diphenyl-2picrylhydrazil radical) assay and evaluated using the
IC50 method (Gardeli et al., 2008). The IC50 value stands for the minimum
concentration of extract that is required to scavenge 50% of
the DPPH free radical.
The phenolic compounds were identified and quantified using a
high performance liquid chromatography (HPLC, Jasco) coupled to a
diode array detector (MD-910 Jasco). The separation was achieved
by a reversed phase C18 column, Waters Nova-Pack C18 column
(3.9mm×150mm, 4m) at room temperature. The gradient program
was based on Guendez et al. (2005) with a few modifications.
More specifically, eluent (A) was 0.1% aqueous perchloric acid,
eluent (B) was MeOH and the flow rate was 1mLmin−1 with an
injection volume of 20L. The elution program usedwasas follows: 100% A 0–5 min, 90% A/10% B 5–15 min, 82.5% A/17.5% B 15–25 min,
75% A/25% B 25–45 min, 40% A/60% B 45–60 min, 100% B 60–80 min,
100% A 80–85 min. Chromatograms were monitored at 280, 320
and 360nm and identification was based on retention times and
on-line spectra data related to the standard compounds. Quantification
was based on standards calibration curves of each compound.
All aforementioned analyses were performed in triplicate.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.6 การวิเคราะห์วิธีทำการวิเคราะห์ ของพัดลม IP Kjeldahl ไนโตรเจน (TKN)ออกตามโปรโตคอลที่นำเสนอโดย Kachrimanidou et al(2013) การกำหนดความเข้มข้นของกลีเซอร ด้วยประสิทธิภาพสูงของเหลว chromatography (HPLC น้ำ 600E) พร้อมการ Aminex HPX - 87H (300 มม. × 7 8 มม. Bio Rad CA) คอลัมน์ ควบคู่การ refractometer แตกต่าง (RI น้ำ 410) เกี่ยวกับการดำเนินการเงื่อนไขที่รายงานโดย Kachrimanidou et al. (2013) นับของ PHB สมาธิถูกดำเนินการ โดยวิธีการอธิบายโดย Riis และเชียงใหม่ (1988) ใช้เป็นแก๊ส chromatographic วิเคราะห์(Fisons 8060) พร้อมตรวจจับการ ionization เปลวไฟ (FID) และคอลัมน์ Chrompack (60 m × 0.25 มม. ความหนาของฟิล์ม 0.25 m, J และ Wวิทยาศาสตร์) กับปฏิบัติเงื่อนไขที่รายงาน โดย Kachrimanidoual. ร้อยเอ็ด (2013)แห้งมวลรวม (แบบ TDM) ที่มีผลิตในระหว่างการหมักถูกกำหนด โดยตัวอย่างในเตาอบ (50 ◦C) สำหรับการอบแห้ง24 ชมและเย็นลงใน desiccator เป็นจนได้น้ำหนักคงรับ กำหนด โดยการลบความเข้มข้นของ PHB RCMรับ โดย GC จากแบบ TDM กิจกรรมรติเอสถูก quantifiedโดยการก่อตัวของพัดลมโดย hydrolyzing 15 g L−1 เคซีนที่ 55 ◦Cใน 200mM ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH ค่าจาก 6) หน่วยหนึ่งของรติเอสกิจกรรม (U) ถูกกำหนดเป็นรติเอสที่จำเป็นสำหรับการผลิตของ g 1 พัดลมใน 1 นาทีรวมเนื้อหาฟีนอ (สิ่งทอ) ถูกประเมินโดยการวิธีเทียบเคียง Folin-Ciocalteu ตามขั้นตอนรายงานโดย Wojdyło et al. (2007) ใช้ CGA เป็นฟีนอมาตรฐานผสม สิ่งทอถูกแสดงเป็น CGA เทียบเท่า (CGAE)(มิลลิกรัม/100 กรัมของมวลแห้ง) กิจกรรม scavenging อนุมูลอิสระของการสารสกัดจากตัวอย่างที่ประเมิน ด้วย DPPH• ปรับเปลี่ยน (1.1-วิเคราะห์ฟีนิลได 2picrylhydrazil รัศมี) และใช้ค่าวิธี IC50 (Gardeli et al., 2008) ค่า IC50 หมายถึงต่ำสุดความเข้มข้นของสารสกัดที่ต้อง scavenge 50%อนุมูลอิสระ DPPHสารฟีนอระบุ และ quantified โดยใช้การประสิทธิภาพสูงที่ของเหลว chromatography (HPLC, Jasco) ควบคู่กับการไดโอดอาร์เรย์จับ (Jasco MD-910) แยกสำเร็จโดยย้อนกลับขั้นตอน C18 คอลัมน์ คอลัมน์ C18 โนวาชุดน้ำ(3.9 มม.× 150 mm, 4 m) ที่อุณหภูมิห้อง โปรแกรมไล่ระดับถูกใช้ใน Guendez et al. (2005) กับกี่แก้ไขอื่น ๆ โดยเฉพาะ eluent (A) มี 0.1% อควี perchloric กรดeluent (B) ถูกทานอ และอัตราการไหล 1mLmin−1 กับการปริมาณการฉีดของ 20 L. Usedwasas โปรแกรม elution ดังต่อไปนี้: 100% ได้ 0 – 5 นาที 90% A/10% B 5 – 15 นาที 82.5 อาศานั้น% A/17.5% B 15-25 นาที75% A/25% B 25 – 45 นาที 40% A/60% B 45 – 60 นาที 100% B 60 – 80 นาที100% Chromatograms นาที 80 – 85 ได้ตรวจสอบที่ 280, 320และ 360nm และรหัสถูกตามเก็บข้อมูลเวลา และแรมสเป็คตราง่ายดายข้อมูลที่เกี่ยวข้องกับสารมาตรฐาน นับถูกตามเส้นโค้งการปรับเทียบมาตรฐานของสารประกอบแต่ละมีดำเนินการวิเคราะห์ดังกล่าวทั้งหมดใน triplicate

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.6 วิธีการวิเคราะห์การวิเคราะห์ FAN, IP และไนโตรเจน Kjeldahl รวม (TKN) ได้ดำเนินการตามโปรโตคอลที่นำเสนอโดยKachrimanidou et al. (2013) ความเข้มข้นของกลีเซอรอลถูกกำหนดโดยมีประสิทธิภาพสูงของเหลว chromatography (HPLC น้ำ 600E) พร้อมกับ Aminex HPX-87H (300mm × 7.8mm ไบโอราด CA) คอลัมน์คู่ที่จะแตกต่างกันเครื่องวัด(RI ​​น้ำ 410) ที่มีการดำเนินงานสภาพการรายงานโดยKachrimanidou et al, (2013) ปริมาณความเข้มข้นของ PHB ได้ดำเนินการโดยวิธีการที่อธิบายโดยรีสและเชียงใหม่(1988) โดยใช้การวิเคราะห์สารก๊าซ(Fisons 8060) การติดตั้งเครื่องตรวจจับเปลวไฟไอออนไนซ์ (FID) และคอลัมน์Chrompack (60 × 0.25mm ฟิล์มหนา 0.25? ม. J & W วิทยาศาสตร์) ที่มีสภาพการใช้งานที่รายงานโดย Kachrimanidou et al, (2013). มวลแห้งรวม (TDM) ที่ถูกผลิตในระหว่างการหมักถูกกำหนดโดยการอบแห้งตัวอย่างในเตาอบ(50 ◦C) สำหรับ24 ชั่วโมงและเย็นลงในเดซิจนน้ำหนักคงที่ได้รับ RCM ถูกกำหนดโดยการลบความเข้มข้น PHB ที่ได้รับจากประชาคมโลกจาก TDM กิจกรรมโปรติเอสได้รับการวัดโดยการก่อตัวของพัดลมโดยไฮโดรไลซ์ 15 กรัม L-1 เคซีนที่ 55 ◦Cในฟอสเฟตบัฟเฟอร์200mm (ค่าพีเอชของ 6) หนึ่งหน่วยของน้ำย่อยกิจกรรม (U) ถูกกำหนดเป็นโปรติเอสที่จำเป็นสำหรับการผลิตของ1 กรัม FAN ใน 1min. เนื้อหาฟีนอลรวม (TPC) อยู่ที่ประมาณโดยวิธีการสีFolin-Ciocalteu ตามขั้นตอนการรายงานโดยWojdyło et al, . (2007) โดยใช้ไมฟีนอลเป็นมาตรฐานสาร มาตรฐาน TPC ได้แสดงเป็นรายการเทียบเท่า CGA (CGAE) (มก. / 100 กรัมของมวลแห้ง) กิจกรรมที่รุนแรง-ขับฟรีของสารสกัดจากตัวอย่างที่ได้รับการประเมินด้วยแก้ไข DPPH • (1,1- diphenyl-2picrylhydrazil รุนแรง) การทดสอบและประเมินผลโดยใช้วิธีIC50 (Gardeli et al., 2008) ค่า IC50 ย่อมาจากต่ำสุดเข้มข้นของสารสกัดที่จำเป็นต้องไล่50% ของอนุมูลอิสระDPPH. สารประกอบฟีนอลที่ได้รับการระบุและปริมาณการใช้ประสิทธิภาพสูงของเหลว chromatography (HPLC, Jasco) คู่กับเครื่องตรวจจับอาร์เรย์ไดโอด(MD- Jasco 910) การแยกก็ประสบความสำเร็จโดยขั้นตอนการกลับคอลัมน์ C18 น้ำโนวาแพ็คคอลัมน์ C18 (3.9mm × 150 มม, 4 เมตร) ที่อุณหภูมิห้อง โปรแกรมการไล่ระดับสีอยู่บนพื้นฐานของ Guendez et al, (2005) มีการปรับเปลี่ยนไม่กี่. โดยเฉพาะอย่างยิ่งตัวชะ (A) เป็น 0.1% กรดเปอร์คลอริกน้ำชะ(B) เป็นเมธานอลและอัตราการไหลเป็น 1mLmin-1 ที่มีปริมาณการฉีด20 L usedwasas ชะโปรแกรมดังต่อไปนี้: 100% 0-5 นาที, 90% A / B 10% 5-15 นาที, 82.5% A / B 17.5% 15-25 นาที, 75% A / B 25% 25-45 นาที 40% A / B 60% 45-60 นาที, 100% B 60-80 นาที, 100% 80-85 นาที chromatograms ถูกตรวจสอบที่ 280, 320 และ 360nm และบัตรประจำตัวก็ขึ้นอยู่กับเวลาการเก็บรักษาและข้อมูลสเปกตรัมในบรรทัดที่เกี่ยวข้องกับสารมาตรฐาน ปริมาณก็ขึ้นอยู่กับเส้นโค้งการสอบเทียบมาตรฐานของแต่ละสารประกอบ. ทั้งหมดการวิเคราะห์ดังกล่าวได้ดำเนินการในเพิ่มขึ้นสามเท่า

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.6 วิธีการวิเคราะห์การวิเคราะห์
พัดลม , IP และไนโตรเจน ( TKN ) ทำการ
ตามโปรโตคอลที่นำเสนอโดย kachrimanidou et al .
( 2013 ) ความเข้มข้นของกลีเซอรอล ถูกกำหนดโดยวิธีโครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูง ( HPLC , น้ำ

600e ) พร้อมกับการ aminex hpx-87h ( 300mm × 7.8mm ชีวภาพราด CA ) คู่
คอลัมน์เป็นอนุพันธ์ Refractometer ( ริน้ำ 410 ) กับปฏิบัติการ
เงื่อนไขรายงานโดย kachrimanidou et al . ( 2013 ) ปริมาณความเข้มข้นของ PHB
กระทำโดยวิธีการอธิบาย
โดยริสกับเชียงใหม่ ( 2531 ) โดยใช้เครื่องแก๊สโครมาโตกราฟี (
fisons 8060 ) พร้อมกับเฟลมไอออไนเซชันตรวจจับ ( FID ) และ
chrompack คอลัมน์ ( 60 × 0.25mm ความหนาของฟิล์ม  0.25 m , J & W
วิทยาศาสตร์กับเงื่อนไขที่รายงานโดย kachrimanidou
et al . ( 2013 ) .
มวลแห้งทั้งหมด ( TDM ) ที่ผลิตในระหว่างการหมัก
ถูกกำหนดโดยการอบแห้งตัวอย่างในเตาอบ ( 50 ◦ C )
24 ชั่วโมงและเย็นลงในเดซิกเคเตอร์จนน้ำหนักคงที่ คือ
) จำนวนที่ถูกตัดสินใจโดยการลบ PHB สมาธิ
ได้รับโดย GC จาก TDM . กิจกรรมเอนไซม์โปรตีเอสถูก quantified
โดยการก่อตัวของพัดลมโดยการย่อย 15 g L − 1 เคซีนที่ 55 C
200mm ◦ในฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ( ค่า pH 6 ) หน่วยหนึ่งของกิจกรรมเอนไซม์โปรตีเอส
( U ) ถูกนิยามเป็นโปรตีนที่จำเป็นสำหรับการผลิต
1  g - พัดลม 1min .
เนื้อหาฟีนอลิกทั้งหมด ( TPC ) คือประมาณโดย
พระชานุ folin – ciocalteu ตามขั้นตอน
รายงานโดย wojdy ł o et al .( 2007 ) โดยใช้มาตรฐาน CGA เป็นสารประกอบฟีนอลิก
. การร่วมแสดงเป็น CGA เทียบเท่า ( cgae )
( มิลลิกรัมต่อ 100 กรัมแห้ง ) กำจัดอนุมูลอิสระของ
ตัวอย่างสารสกัดจากการประเมินด้วยแบบ ( 1 , 1 dpph - -
diphenyl-2picrylhydrazil หัวรุนแรง ) ในการประเมินการใช้
ic50 วิธี ( gardeli et al . , 2008 ) ค่าต่ำสุด
ic50 ย่อมาจากความเข้มข้นของสารที่จะต้องกรอง 50%

dpph อนุมูลอิสระ สารฟีโนลิก พบว่าปริมาณการใช้
ของเหลวสมรรถนะสูง chromatography ( HPLC jasco ) คู่กับ
ไดโอดเรย์ตรวจจับ ( md-910 jasco ) การแยกโดยคอลัมน์เท่ากับ
เฟส c18 กลับน้ำ c18 โนวาแพ็คคอลัมน์
( 3.9mm × 150mm , 4  M ) ที่อุณหภูมิห้อง การไล่ระดับสีโปรแกรม
ขึ้นอยู่กับ guendez et al . ( 2005 ) ด้วยการปรับเปลี่ยนบางอย่าง .
มากขึ้นโดยเฉพาะสารละลาย ( ) คือ 0.1% สารละลายกรด perchloric
( B ) , ตัวปริมาณและอัตราการไหล คือ 1mlmin − 1 ด้วย
 ฉีดปริมาณ 20 ลิตร ใช้โปรแกรม usedwasas ดังนี้ : 100 % 0 – 5 นาที 90 % เป็น / 10 % B 5 – 15 นาที 82.5 % / 17.5 % B 15 – 25 นาที
% 75 / 25 % B 25 – 45 นาที , 40% / 60% B 45 - 60 นาที , 100 % B 60 – 80 นาที
100% 80 – 85 นาที กลิ่นที่ได้ตรวจสอบที่ 280 , 320
360nm และระบุและใช้ครั้งและเก็บ
ออนไลน์ให้ข้อมูลที่เกี่ยวข้องกับสารมาตรฐาน ปริมาณ
เป็นเส้นโค้งสอบเทียบตามมาตรฐานของแต่ละสารประกอบ .
วิเคราะห์ดังกล่าวมีการปฏิบัติทั้งสามใบ