Cell LineThe cell line must express

Cell Line
The cell line must express the target protein. This protocol can be used directly for adherent cells. For
suspension cells and loosely attached cells, two steps are required: 1) Coat the plates with 100 μl of 10
μg/ml Poly-L-Lysine (Sigma Cat# P4832, not included) to each well of the 96-well plate for 30 minutes at
37°C before proceeding to Step 1 of Assay Procedure. Use 8% formaldehyde to fix the cells on Step 5 of
Assay Procedure.
• Cell Number and Sensitivity
The number of cells plated onto the 96-well plates depends on the expression level of iNOS protein in the
cells, cell size, treatment conditions and incubation time. The cells used for testing should be around
75-90% confluent. Typically for HeLa cells, seed 30,000 cells per well overnight for treatment the
following day. The NOS2 (Human) Cell-Based ELISA Kit can detect iNOS expression in as little as 5,000
HeLa cells.
• Cell Treatment
The cells can be treated with inhibitors, activators, stimulators (ie. chemicals, proteins/peptides) or a
combination of the substances listed above. The cells can be treated with UV and serum starvation to
meet the needs of the end-user.
• Positive and Negative Controls
Mouse Anti-GAPDH Antibody (included) should be used to detect the internal positive controls for
normalization of OD values of the target protein. The negative controls are HRP-Conjugated Anti-Rabbit
IgG Antibody and HRP-Conjugated Anti-Mouse IgG Antibody alone in different wells (without the primary
antibodies). Both positive and negative controls should be performed in the same plate with the iNOS
target experiments.
• Accuracy and Precision
Each condition should be performed in duplicate or in triplicate.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เซลล์รายการ
รายการเซลล์ต้องแสดงโปรตีนเป้าหมาย โพรโทคอลนี้สามารถใช้ได้โดยตรงในเซลล์นฤมล สำหรับ
ระงับเซลล์และเซลล์ซึ่งแนบ สองขั้นตอนจำเป็น: 1) Coat แผ่นกับ μl 100 10
μg/ml โพลี-L-ไลซีน (ซิก Cat# P4832 ไม่รวม) ให้ดีแต่ละจานดี 96 30 นาทีที่
37 ° C ก่อนขั้นตอนที่ 1 ของวิเคราะห์กระบวนการ ใช้ 8% ฟอร์มาลดีไฮด์ในการแก้ไขเซลล์ในขั้นตอนที่ 5 ของ
วิเคราะห์กระบวนการ
•จำนวนเซลล์และความไว
จำนวนเซลล์ที่เคลือบบนแผ่น 96 ดีขึ้นอยู่กับระดับโปรตีน iNOS ในนิพจน์
เซลล์ ขนาดของเซลล์ รักษาสภาพ และเวลาบ่ม เซลล์ที่ใช้ในการทดสอบควรจะรอบ
confluent 75-90% โดยทั่วไปสำหรับเซลล์ HeLa เมล็ด 30เซลล์ 000 ต่อแอร์พอร์ตโอเวอร์ไนท์ดีการรักษา
วันถัดไป ELISA โดยใช้เซลล์ (มนุษย์) ของ NOS2 ชุดสามารถตรวจสอบนิพจน์ iNOS ในเป็น 5, 000
เซลล์ HeLa.
•รักษาเซลล์
สามารถรักษาเซลล์ inhibitors คริปต์ stimulators (ie. เคมี โปรตีน/เปป) หรือ
ชุดของสารข้างได้ เซลล์สามารถได้รับความอดอยากที่รังสียูวีและซีรั่มเพื่อ
ความสิ้น-ผู้ใช้
•ค่าบวกและค่าลบควบคุม
แอนติบอดี Anti-GAPDH เมาส์ (รวมอยู่) ควรจะใช้เพื่อตรวจสอบควบคุมบวกภายในสำหรับ
ฟื้นฟูค่า OD ของโปรตีนเป้าหมาย ควบคุมค่าลบเป็น HRP-Conjugated ป้องกันกระต่าย
แอนติบอดี IgG และ HRP-Conjugated ป้องกันเมาส์ IgG แอนติบอดีเดียวในบ่อแตกต่างกัน (โดยหลัก
แอนตี้) ควรดำเนินการควบคุมทั้งบวก และลบในแผ่นเดียวกันกับ iNOS
เป้าหมายทดลอง
•ปรากฏ
เงื่อนไขแต่ละควรจะทำซ้ำ หรือ triplicate

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เซลล์เส้น
เซลล์เส้นต้องแสดงออกโปรตีนเป้าหมาย โปรโตคอลนี้สามารถใช้โดยตรงเพื่อติดเซลล์ สำหรับช่วงล่างหลวม
เซลล์ต่อเซลล์ สองขั้นตอน : 1 ) ต้องเคลือบแผ่น 100 μ L 10
μ g / ml poly-l-lysine ( Sigma # p4832 แมวไม่รวม กันของ 96 ดีจานสำหรับ 30 นาทีที่ 37 ° C
ก่อนดำเนินการในขั้นตอนที่ 1 ของขั้นตอนการทดสอบ .ใช้ฟอร์มาลดีไฮด์ 8% เพื่อแก้ไขเซลล์ในขั้นตอนที่ 5 ของขั้นตอนการทดสอบ
.

- เบอร์มือถือและความไวของจำนวนเซลล์บนแผ่นชุบ 96 ก็ขึ้นอยู่กับการแสดงออกของโปรตีนในระดับ inos
เซลล์ , เซลล์ขนาดและเงื่อนไขการรักษาและเวลาในการบ่ม เซลล์ที่ใช้สำหรับการทดสอบควรจะไปรอบ ๆ
75-90 % ที่ไหลไปด้วยกัน โดยทั่วไปสำหรับล่าเซลล์เมล็ด 30000 เซลล์ต่อดีคืนสำหรับการรักษา
ตามวัน การ nos2 ( มนุษย์ ) เซลล์ตามชุด ELISA สามารถตรวจพบ inos การแสดงออกในน้อยได้ตาม 5
ล่าเซลล์ การรักษาเซลล์
-
เซลล์สามารถรักษาได้ด้วยสารยับยั้งการกระตุ้นเร้า ( เช่นสารเคมี , โปรตีน , เปปไทด์
/ ) หรือการรวมกันของสารที่ระบุข้างต้น เซลล์ที่สามารถรักษาได้ด้วย UV และเซรั่ม

ความอดอยากตอบสนองความต้องการของผู้ใช้ .
-
เมาส์ควบคุมบวกและลบแอนติบอดีต่อต้าน gapdh ( รวม ) ควรใช้ตรวจสอบภายในบวกการควบคุมสำหรับ
การฟื้นฟูค่า OD ของโปรตีนเป้าหมาย การควบคุมและป้องกันผลลบ HRP กระต่าย
IgG และ IgG conjugated โปรตีนชป้องกันเมาส์แอนติบอดีอยู่คนเดียวในหลุมที่แตกต่างกัน ( ไม่มีแอนติบอดีประถม
)การควบคุมทั้งทางบวกและทางลบ ควรดำเนินการในจานเดียวกันกับ inos
เป้าหมายการทดลอง .
-
แต่ละเงื่อนไขความถูกต้อง ควรใช้ซ้ำ หรือทั้งสามใบ