Polymerase Chain Reaction (PCR)The

Polymerase Chain Reaction (PCR)
The amount of DNA evidence obtained during the investigation of a crime is often very small, thus for successful DNA profiling some form of amplification is ideal. Polymerase Chain Reaction (PCR) is a technique which allows for the exponential amplification of DNA fragments to lengths of approximately 10,000 base pairs. This means that, theoretically, a single copy of a DNA fragment could be amplified to millions of copies in just a few hours. PCR is particularly beneficial in the amplification of minute amounts or degraded samples.

A successful PCR reaction requires a number of vital primary components. Oligonucleotide primers which are complementary to the DNA target and mark the target to be amplified, with two primers being used. The base sequence of one primer binds to one side of the target whilst the other primer binds to the other side of the target, with the DNA between the primers being amplified. Fluorescent tags are often added to the primers to visualise amplified DNA in electrophoresis. DNA polymerase enzyme allows the DNA strand to be copied by adding nucleotides to the 3’ end of the primers. Other components required include a reaction buffer with MgCl to ensure ideal conditions for the functioning of the DNA polymerase enzyme, deoxyribonucleotides to build the DNA molecule, and template DNA. Modern PCR uses thermostable DNA polymerases. Most commonly used is the Taq polymerase, which has largely replaced the previously used E.coli-derived polymerase. This was isolated from Thermus aquaticus, which is an organism capable of surviving in temperatures over 70oC. However Taq polymerase lacks the ability to proof read. VENT polymerase is from Thermococcus litoralis, which can survive in temperatures over 100oC.

The PCR cycle consists of three primary steps: denaturation, annealing and extension. The process is generally conducted in a small, plastic centrifuge tube with the temperature carefully controlled using a thermal cycler.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส (PCR)จำนวนหลักฐานดีเอ็นเอที่ได้รับในระหว่างการสืบสวนอาชญากรรมมักมีขนาดเล็กมาก สำหรับดีเอ็นเอสำเร็จ โพบางรูปแบบของการขยายจึงเหมาะ ปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส (PCR) เป็นเทคนิคที่ช่วยให้การขยายเนนของชิ้นส่วนดีเอ็นเอเพื่อความยาวของฐานประมาณ 10,000 คู่ ซึ่งหมายความ ว่า ในทางทฤษฎี สำเนาส่วนดีเอ็นเอเดียวสามารถขยายล้านสำเนาในเพียงไม่กี่ชั่วโมง PCR จะเป็นประโยชน์อย่างยิ่งในการขยายตัวของจำนวนนาที หรือลดลงอย่างปฏิกิริยา PCR ที่ประสบความสำเร็จต้องมีจำนวนของส่วนประกอบหลักที่สำคัญ Oligonucleotide ไพรเมอร์ซึ่งเป็นดีเอ็นเอเพื่อกำหนดเป้าหมาย และเป้าหมายขยาย ด้วยสองไพรเมอร์ที่ใช้ทำเครื่องหมาย ลำดับฐานพื้นหนึ่งผูกอีกด้านหนึ่งของเป้าหมายในขณะที่ไพรเมอร์อื่น ๆ ผูกไปด้านอื่น ๆ ของเป้าหมาย ดีเอ็นเอระหว่างไพรเมอร์ที่ถูกขยาย แท็กฟลูออเรสเซนต์มักลงไพรเมอร์เพื่อดูภาพขยายดีเอ็นเอในอิ เอนไซม์ dna พอลิเมอเรสทำให้สาระดีเอ็นเอที่จะคัดลอก โดยการเพิ่มนิวคลีโอไทด์ที่ปลาย 3' ของไพรเมอร์ที่ ส่วนประกอบอื่น ๆ ที่จำเป็นได้แก่บัฟเฟอร์ปฏิกิริยากับ MgCl ให้เงื่อนไขที่เหมาะสำหรับการทำงานของเอนไซม์ DNA พอลิเมอเรส deoxyribonucleotides สร้างโมเลกุลดีเอ็นเอ และแม่แบบดีเอ็นเอ ทันสมัย PCR ใช้ thermostable DNA polymerases ใช้มากที่สุดคือการ Taq พอลิเมอเรส ซึ่งได้มาแทนที่พอลิเมอเรส E.coli มาใช้ก่อนหน้านี้ นี้คือ isolated จาก Thermus aquaticus ซึ่งเป็นสิ่งมีชีวิตที่สามารถอยู่รอดในอุณหภูมิกว่า 70oC อย่างไรก็ตาม พอลิเมอเรส Taq ขาดหลักฐานความสามารถในการอ่าน พอลิเมอเรสระบายมาจากทะเล Thermococcus ซึ่งสามารถอยู่รอดในอุณหภูมิกว่า 100oCPCR รอบประกอบด้วยขั้นตอนหลักสาม: แปรสภาพ หลอม และนามสกุล โดยทั่วไปกระบวนการจะดำเนินการในหลอดหมุนเหวี่ยงขนาดเล็ก พลาสติกอุณหภูมิควบคุมใช้ cycler มีความร้อน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

(Polymerase Chain Reaction PCR)
ปริมาณของหลักฐานดีเอ็นเอที่ได้รับในระหว่างการสอบสวนของอาชญากรรมมักจะมีขนาดเล็กมากดังนั้นสำหรับโปรไฟล์ดีเอ็นเอที่ประสบความสำเร็จของการขยายรูปแบบบางอย่างเหมาะ (Polymerase Chain Reaction PCR) เป็นเทคนิคที่ช่วยให้การขยายชี้แจงของดีเอ็นเอยาวประมาณ 10,000 คู่ฐาน ซึ่งหมายความว่าในทางทฤษฎีสำเนาเดียวของชิ้นดีเอ็นเอที่อาจจะขยายไปยังล้านเล่มในเวลาเพียงไม่กี่ชั่วโมง PCR เป็นประโยชน์โดยเฉพาะอย่างยิ่งในการขยายของจำนวนนาทีหรือตัวอย่างเสื่อมโทรม.

ปฏิกิริยา PCR ที่ประสบความสำเร็จต้องใช้จำนวนขององค์ประกอบหลักที่สำคัญ ไพรเมอร์ oligonucleotide ซึ่งจะประกอบไปยังเป้าหมายดีเอ็นเอและทำเครื่องหมายเป้าหมายที่จะขยายด้วยไพรเมอร์ทั้งสองถูกนำมาใช้ ลำดับฐานของไพรเมอร์หนึ่งผูกกับอีกด้านหนึ่งของเป้าหมายในขณะที่ไพรเมอร์อื่น ๆ ผูกกับด้านอื่น ๆ ของเป้าหมายที่มีดีเอ็นเอระหว่างไพรเมอร์ที่มีการขยาย แท็กเรืองแสงมักจะถูกเพิ่มลงไพรเมอร์ที่จะเห็นภาพในดีเอ็นเอ electrophoresis เอนไซม์ DNA Polymerase ช่วยให้ดีเอ็นเอที่จะคัดลอกโดยการเพิ่มนิวคลีโอไปที่ปลาย 3 'ของไพรเมอร์ ส่วนประกอบอื่น ๆ ที่จำเป็นรวมถึงกันชนทำปฏิกิริยากับ MgCl เพื่อให้แน่ใจว่าเงื่อนไขที่เหมาะสมสำหรับการทำงานของเอนไซม์ดีเอ็นเอโพลิเมอร์ที่ deoxyribonucleotides การสร้างโมเลกุลดีเอ็นเอและดีเอ็นเอแม่แบบ โมเดิร์น PCR ใช้ดีเอ็นเอ polymerases ทนต่อความร้อน ใช้กันมากที่สุดเป็นโพลิเมอร์ Taq ซึ่งได้เข้ามาแทนที่ E.coli ที่ได้มาจากโพลิเมอร์ใช้ก่อนหน้านี้ส่วนใหญ่ นี้ถูกแยกออกจาก Thermus aquaticus ซึ่งเป็นสิ่งมีชีวิตที่มีความสามารถในการอยู่รอดในอุณหภูมิที่สูงกว่า 70oC อย่างไรก็ตาม Taq โพลิเมอร์ขาดความสามารถในการอ่านหลักฐาน VENT โพลิเมอร์จาก litoralis Thermococcus ซึ่งสามารถอยู่รอดได้ในอุณหภูมิที่สูงกว่า 100oC.

รอบ PCR ประกอบด้วยสามขั้นตอนหลัก: denaturation, การอบและการขยาย กระบวนการนี้จะดำเนินการโดยทั่วไปในขนาดเล็กหลอด centrifuge พลาสติกที่มีอุณหภูมิอย่างระมัดระวังควบคุมการใช้ความร้อน Cycler

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ปฏิกิริยาลูกโซ่ ( PCR )จํานวนของหลักฐานดีเอ็นเอที่ได้ในระหว่างการสืบสวนของอาชญากรรมที่มักจะมีขนาดเล็กมาก ดังนั้นเพื่อความสำเร็จการศึกษาลายพิมพ์ดีเอ็นเอของบางรูปแบบของการสื่อสารได้เหมาะสมที่สุด ปฏิกิริยาลูกโซ่ ( PCR ) เป็นเทคนิคที่ช่วยให้สำหรับการเพิ่มปริมาณชิ้นดีเอ็นเอแบบที่ความยาวประมาณ 10 , 000 ฐานคู่ ซึ่งหมายความว่า ในทางทฤษฎี สำเนาเดียวของดีเอ็นเอสามารถขยายไปยังล้านเล่มในเวลาเพียงไม่กี่ชั่วโมง ซึ่งจะเป็นประโยชน์โดยเฉพาะอย่างยิ่งในการนำมาใช้ในปริมาณนาทีหรือสลายตัวอย่างปฏิกิริยา PCR ที่ประสบความสำเร็จจำเป็นต้องมีหมายเลขของคอมโพเนนต์หลักที่สําคัญ ซึ่งจะประกอบไปด้วย ซึ่งเป้าหมายของดีเอ็นเอและเครื่องหมายเป้าหมายที่จะขยาย กับสองชนิดที่ใช้ ลำดับฐานของไพรเมอร์จับกับด้านหนึ่งของเป้าหมายในขณะที่ไพรอื่น ๆผูกกับด้านอื่น ๆของเป้าหมาย กับ ดีเอ็นเอ ระหว่างวิธีการขยาย . ป้ายเรืองแสงมักจะเพิ่มด้วยจะเห็นภาพแถบดีเอ็นเอในโตรโฟรีซีส เอนไซม์ดีเอ็นเอพอลิเมอเรสช่วยให้เกลียวดีเอ็นเอจะถูกคัดลอกโดยการเพิ่มขนาดให้กับ 3 จบด้วย . ส่วนประกอบอื่น ๆ ที่จำเป็นรวมถึงปฏิกิริยาบัฟเฟอร์ที่มีคลอไรด์เพื่อให้แน่ใจว่าเงื่อนไขที่เหมาะสำหรับการทำงานของเอนไซม์ DNA polymerase แมงอีนูน , การสร้างโมเลกุลดีเอ็นเอและดีเอ็นเอแม่แบบ เทคนิคสมัยใหม่ที่ใช้ใน polymerases ดีเอ็นเอ ที่ใช้บ่อยที่สุดคือแท็กใช้ ซึ่งส่วนใหญ่ได้ถูกแทนที่โดยก่อนหน้านี้เคย e.coli-derived . นี้ถูกแยกจาก thermus พรายน้ำซึ่งเป็นสิ่งมีชีวิตที่สามารถอยู่รอดได้ในอุณหภูมิเกิน 70oc . อย่างไรก็ตาม แท็กการขาดความสามารถในการพิสูจน์อ่าน การระบายจาก thermococcus litoralis ซึ่งสามารถอยู่รอดได้ในอุณหภูมิเกิน 100oc .วงจรซึ่งประกอบด้วยสามขั้นตอนหลัก : ( annealing และนามสกุล . กระบวนการนี้โดยทั่วไปดำเนินการในขนาดเล็ก , หลอดพลาสติกด้วยเครื่องควบคุมอุณหภูมิอย่างละเอียดโดยใช้วงจรความร้อน